大黄鱼抗菌肽hepcidin在巴斯德毕赤酵母中的表达及其产物的抑菌活性     

汪玉华  敖敬群  陈新华 《台湾海峡》2013,32(3)

Hepcidin是一类具有独特性质的小分子抗菌肽,克隆得到大黄鱼(Pseudosciana crocea)的hepcidin基因(Lyc-Hepc),cDNA序列全长585个核苷酸,编码一个由85个氨基酸组成的蛋白,包含24个氨基酸的信号肽、35个氨基酸的前导肽和26个氨基酸的成熟肽,成熟肽具有8个保守的半胱氨酸.将Lyc-Hepc 183bp的编码前导肽和成熟肽的前体肽(25aa-85aa)基因片段克隆到毕赤酵母表达载体pPICZαA中,然后电击转化巴斯德毕赤酵母SMD1168,经高浓度Zeocin筛选获得多个单克隆.挑取4个克隆进行培养,提取酵母基因组进行PCR检测,结果表明目的基因片段已成功整合到酵母菌SMD1168基因组中,获得酵母工程菌株SMD1168/pP1CZα-Lyc-Hepc.SDS-PAGE和WesternBlot分析表明酵母工程菌株在0.5％甲醇诱导培养72h后,Lyc-Hepc在培养上清中得到了分泌型表达.体外抑菌实验表明重组Lyc-Hepc蛋白能够抑制2株水产养殖病害菌嗜水气单胞菌和副溶血弧菌的生长.研究结果表明大黄鱼hepcidin可能在抗细菌免疫中发挥了作用.  相似文献   

O1型霍乱弧菌Fosmid文库的构建及分析     

倪鑫  麻丽丹  雷质文  梁成珠  王殿夫  吕秀芳 《中国海洋大学学报(自然科学版)》2013,(2):36-39

为构建O1型霍乱弧菌Fosmid文库并对文库进行分析,采用低熔点琼脂糖包埋法提取O1群霍乱弧菌N16961完整基因组,用随机剪切法将基因组进行片段化处理,脉冲电泳分离片段化DNA并切胶回收33～48kb之间的DNA片段,然后对DNA片段进行末端平滑化和磷酸化处理,与pCC1FOS载体连接,经包装、转染后构建霍乱弧菌Fosmid文库。平均插入片段为37kb,共保存9 600个克隆,空载率小于2%。本文库符合文库的构建要求,文库的建立为O1霍乱弧菌重要基因及其功能的研究奠定了基础。  相似文献   

酵母培养物对凡纳滨对虾肠道菌群结构的影响     

《广东海洋大学学报》2017,(4)

在基础饲料中分别添加质量分数0(对照)和0.30%的酵母培养物,配制2种等氮等脂饲料(分别记为Y0、Y0.3组),投喂初始体质量为(1.20±0.01)g的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)56 d。提取凡纳滨对虾肠道总DNA,采用Illumina Mi Seq高通量测序比较样品菌群组成和多样性,研究饲料中添加酵母培养物对凡纳滨对虾肠道菌群结构的影响。结果表明,Y0.3组对虾肠道分类单元(OTUs)数量、丰富度指数(Chao1、ACE值)、多样性指数(Shannon、np Shannon指数)与Y0组差异无统计学意义(P0.05);从物种分类树发现,两组的主要细菌类群均为变形菌门(Proteobacteria),其中,γ-变形菌纲是对虾肠道的最主要菌群,所占比例达69.48%;从科分类水平看,Y0.3组对虾肠道菌群链球菌科(Streptococcaceae)比Y0组提高4.98%;从优势属水平来看,Y0.3组对虾肠道的乳球菌属(Lactococcus)高于Y0组,差异有统计学意义(P0.01);Y0.3组对虾肠道的发光杆菌属(Photobacterium)低于Y0组,差异有统计学意义(P0.05)。饲料中添加质量分数0.30%酵母培养物可改善凡纳滨对虾肠道菌群多样性。  相似文献   

Construction of a muscle cDNA library of Chinese shrimp <Emphasis Type="Italic">Fenneropenaeus chinensis</Emphasis> and sequence analysis of the troponin I gene     

Jitao Li  Ping Chen  Jian Li  Ping Liu  Yuying He  Qingyin Wang 《中国海洋大学学报(英文版)》2010,9(1):81-86

A muscle cDNA library of Chinese shrimp (Fenneropenaeus chinensis) was constructed with the SMART™ cDNA Library Construction Kit. The titer of optimal primary library was 7.7×10⁵ pfu mL⁻¹ and that of the amplified library was 3.0×10⁹ pfu mL⁻¹. The percentages of the recombinant clones of primary and amplified libraries were over 98%. The insert sizes were longer than 400 bp with an average of 1000 bp. A positive clone containing a 794 bp insert was sequenced and identified encoding fast skeletal troponin I gene. This library provided a useful resource for the functional genomic research of F. chinensis.  相似文献   

Distribution and diversity of <Emphasis Type="Italic">Candida tropicalis</Emphasis> strains in different marine environments     

Kuiran Yan  Ying Zhang  Zhenming Chi 《中国海洋大学学报(英文版)》2010,9(2):139-144

1089 strains of yeasts were obtained from seawater,sea sediments,mud of sea saltems,guts of marine fishes,mangrove plants and marine algae.The results of routine identification and molecular analysis methods show that 44 strains among the marine yeasts obtained in this study belong to Candida tropicalis,which may indicate its wide distribution in different environment,especially in the tropical and subtropical marine environment.The wide distribution of C.tropicalis indicates that it may play an importam role in marine environment and the marine environment in turn is a good source for obtaining C.tropicalis.  相似文献   

南极冰藻 Chlamydomonas sp.ICE-L的 cDNA文库构建及品质检测     

王能飞  沈继红  金治平  赵爱云  林学政 《海洋科学进展》2006,24(4):520-525

为构建南极冰藻Chlamydomonassp.ICE-L的cDNA文库,提取对数生长期南极冰藻ICE-L的总RNA,以此为模板,通过PowerScript逆转录酶逆转录合成第一链cDNA;再以第一链cDNA产物为模板,用LD-PCR合成第二链cDNA。该cDNA产物经分级分离转入大肠杆菌中,即获得南极冰藻ICE-L的cDNA原始文库,其滴度为1.6×106cfu/mL。扩增后的cDNA文库的滴度为1.0×1010cfu/mL。用PCR方法测得文库的重组率大于97%,插入cDNA的长度为0.5~1.8 kb,0.9 kb以上插入片段占50%以上。取适量扩增文库稀释并铺平板,挑取72个独立菌落,对其中22个独立菌落所插入的cDNA进行测序,克隆到了一个具有5′和3′非编码区的40S ribosomalprotein S5全长基因序列,GenBank收录号为AM167929。  相似文献   

Expression and localization of a novel phosducin-like protein from amphioxus <Emphasis Type="Italic">Branchiostoma belcheri</Emphasis>     

萨仁高娃  赵永刚 《中国海洋湖沼学报》2009,27(2):324-330

A full length amphioxus cDNA, encoding a novel phosducin-like protein (Amphi-PhLP), was identified for the first time from the gut cDNA library of Branchiostoma belcheri. It is comprised of 1 550 bp and an open reading frame (ORF) of 241 amino acids, with a predicted molecular mass of approximately 28 kDa. In situ hybridization histochemistry revealed a tissue-specific expression pattern of Amphi-PhLP with the high levels in the ovary, and at a lower level in the hind gut and testis, hepatic caecum, gill, endostyle, and epipharyngeal groove, while it was absent in the muscle, neural tube and notochord. In the Chinese Hamster Ovary (CHO) cells transfected with the expression plasmid pEGFP-N1/Amphi-PhLP, the fusion protein was targeted in the cytoplasm of CHO cells, suggesting that Amphi-PhLP is a cytosolic protein. This work may provide a framework for further understanding of the physiological function of Amphi-PhLP in B. belcheri. Supported by the Pilot Projects of Knowledge Innovation Project of Chinese Academy of Sciences (No. KZCX2-YW-211-03 and MGE2008KG06)  相似文献   

基因工程技术应用于水产养殖     

王美功 《海洋信息》1998,(5):8-9

中国科学院海洋研究所张培军研究员带领课题组成员采用基因工程技术研制的高新技术产品——基因工程酵母饲料添加剂,在水产养殖中应用取得了显著成效。 国外利用外源生长激素进行鱼类促生长效应的研究,以及应用基因工程  相似文献   

利用酵母双杂交研究铜绿微囊藻生物钟蛋白KaiB的自身相互作用     

郑锦乾  徐虹  章军  王靖  朱斌琳 《海洋科学》2006,30(8):41-45

从铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)PCC7820中克隆了生物钟基因kaiB,并将其克隆入酵母双杂交系统的两个质粒pGADT7和pGBKT7中。经测序验证后,将重组质粒pGADT7-kaiB和pGBKT7-kaiB转化酵母菌AH109进行自激活性和自身相互作用的检测和验证。结果表明,铜绿微囊藻生物钟蛋白KaiB无自激活性,KaiB蛋白自身能发生相互作用。因此,可用KaiB蛋白为诱饵利用酵母双杂交系统筛选文库钓取与KaiB发生相互作用的蛋白。  相似文献   

对虾白斑综合症病毒极早期基因启动子筛选文库的构建     

林梵宇  徐丽美  杨丰 《台湾海峡》2010,29(2):184-188

对虾白斑综合症病毒（white spot syndrome virus,WSSV）是危害对虾养殖业的主要病原,而WSSV极早期基因对病毒功能基因的转录翻译和调控起着至关重要的作用.本研究将WSSV基因组以超声法随机断裂至400～900bp DNA片段,并插入启动子缺失且多克隆位点下游具有报告基因的载体来构建文库,转染昆虫细胞Hi5.倒置荧光显微镜观察发现部分转染后的细胞有增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的表达,表明这部分细胞中的DNA片段可能具有极早期启动子活性.流式细胞仪分析显示,这部分荧光细胞占总细胞的比例为0.35%.由于转染效率为50%,可认为占比0.7%的WSSV基因组随机片段能在Hi5细胞中激发下游报告基因的转录翻译,可能具有极早期基因启动子活性.这对于进一步筛选和鉴定WSSV极早期基因及开展极早期启动子研究具有重要的意义.  相似文献