海洋球石藻Emiliania huxleyi(Prymnesiophyceae)病毒主要外壳蛋白基因的克隆与序列分析     

张稚兰  刘静雯  董双林  苏国成  张彦锋 《海洋与湖沼》2009,40(2):152-158

在实验室纯培养条件下,用过滤的海洋球石藻特异性病毒(Emiliania huxliyi virus,EhV)EhV-99B1株感染球石藻(E.huxleyi,Eh),建立病毒与宿主之间稳定的感染体系,病毒裂解滤液经卷式切向流超滤和PEG 8000浓缩、CsC1密度梯度离心,获得足量高纯度的病毒颗粒.根据已报道的其它EhV株系主要外壳蛋白(MCP)基因内保守片段设计合成一对特异引物,从EhV-99B1病毒基因组中克隆到了长度约为300bp的病毒外壳蛋白基因保守片段.该片段与pBS-T载体连接后转化Escherichia coli DH5α,对筛选到的阳性克隆进行序列测定与分析.结果表明,该克隆片段与GenBank中EhV163(AF453851)分离株的同源性最高,该区域内的核苷酸与对应推导的氨基酸序列同源性均为100%,证实获得的DNA片段是EhV-99B1的外壳蛋白基因;与EhV203(AF453855)分离株的核苷酸及氨基酸序列的同源性较低,分别为93%和100%.表明该病毒在自然海域中分布广泛并具有一定的多态性,同时在进化上也存在相当的复杂性.因此,MCP基因可以作为一种新的分子遗传标记以区分自然群落中EhV的不同基因型,对于理解海洋球石藻类病毒与宿主之间复杂的相互作用关系将是一个十分有价值的工具.  相似文献   

Digestive enzyme activity and mRNA level of trypsin in embryonic redclaw crayfish, <Emphasis Type="Italic">Cherax quadricarnatus</Emphasis>     

罗文  赵云龙  周忠良  安传光  马强 《中国海洋湖沼学报》2008,26(1):62-68

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Efficient expression of green fluorescent protein （GFP） mediated by a chimeric promoter in Chlamydomonas reinhardtii     

吴锦霞  胡章立  王潮岗  黎双飞  雷安平 《中国海洋湖沼学报》2008,26(3):242-247

To improve the expression efficiency of exogenous genes in Chlamydomonas reinhardtii, a high efficient expression vector was constructed. Green fluorescent protein （GFP） was expressed in C. reinhardtii under the control of promoters： RBCS2 and HSP70A-RBCS2. Efficiency of transformation and expression were compared between two transgenic algae： RBCS2 mediated strain Tran-Ⅰ and HSP70A-RBCS2 mediated strain Tran-Ⅱ. Results show that HSP70A-RBCS2 could improve greatly the transformation efficiency by approximately eightfold of RBCS2, and the expression efficiency of GFP in Tran-Ⅱ was at least double of that in Tran-Ⅰ. In addition, a threefold increase of GFP in Tran-Ⅱ was induced by heat shock at 40℃. All of the results demonstrated that HSP70A-RBCS2 was more efficient than RBCS2 in expressing exogenous gene in C. reinhardtii.  相似文献   

Cloning, Expression and Characterization of Translationally Controlled Tumor Protein （TCTP） Gene from Flatfish Turbot （Scophthalmus maximus）     

Jian Wang  Huarong Guo  Shicui Zhang  Licheng Yin  Bin Guo  Shaojie Wang 《中国海洋大学学报(英文版)》2008,7(2):184-192

A full-length cDNA encoding translationally controlled tumor protein of marine flatfish turbot (Scophthalmus maximus), SmTCTP, was isolated with rapid amplification of cDNA Ends (RACE). SmTCTP consisted of a 5' untranslated region (UTR) of 84 bp, a 3' UTR of 451 bp and an open reading flame (ORF) of 513 bp, encoding a protein of 170 amino acid residues, which contained two signature sequences of TCTP family. The 5'UTR of SmTCTP started with a 5'-terminal oligopyrimidine tract (5'-TOP), a typical feature for translationaily controlled mRNAs. The deduced amino acid sequence of SmTCTP was similar to the other known verte-brate TCTPs in a range of 58.8% to 64.1%. The length offish TCTPs was diverse among species, e.g., TCTP of turbot and sea perch (Lateolabrax japonicus) is 170 aa in length, while that of zebrafish (Danio rer/o) and rohu (Labeo rohita) is 171 aa in length. North-ern blot analysis revealed that SmTCTP has only one type of mRNA. Its expression level in albino skin was slightly higher than that in normal skin. We constructed the pET3Oa-SmTCTP expression plasmid. The recombinant protein of His-tag SmTCTP was over-expressed in E. coli, purified and identified with peptide mass fingerprinting. These results may pave the way of further inves-tigation of the biological function of TCTP in fish.  相似文献   

不同饲料蛋白水平下L-肉碱对新吉富品系尼罗罗非鱼生长和饲料利用的影响   总被引：1，自引：1，他引：0  

张明辉  陈刚  董宏标  张健东  周晖  汤保贵  黄建盛  施刚  姜玲 《广东海洋大学学报》2008,28(6)

研究了三个蛋白水平(22%、25%、28%)和五个L-肉碱水平(0、200、400、600、800mg/kg)下尼罗罗非鱼生长和饲料利用率。结果表明,随着饲料中蛋白水平的提高,罗非鱼幼鱼的终体重、增重率(WGR)和特定生长率(SGR)呈上升趋势,而饲料系数(FCR)和蛋白质效率(PER)均随饲料蛋白水平的升高而显著下降(P<0.05);同等蛋白水平下,终体重、WGR和SGR均在L-肉碱添加量为200mg/kg时最高,不添加L-肉碱组最小;在添加400mg/kgL-肉碱时FCR最小,而PER最大,与不添加L-肉碱组比较,差异均显著(P<0.05)。说明饲料中蛋白含量和L-肉碱添加量能显著影响罗非鱼幼鱼的生长和饲料利用,而外源性L-肉碱可明显促进罗非鱼生长,提高饲料转化效率。  相似文献   

大珠母贝外套膜基因PMMG1的克隆、表达及其特征分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

王玉梅  夏建红  黄桂菊  喻达辉 《海洋学报》2010,32(3):121-128

EF-hand结构域在真核生物细胞内钙离子吸收和运输中发挥重要作用,在贝类中可能参与贝壳和珍珠质的形成。根据已报道的贝类中具有EF-hand结构域的碱基序列设计简并引物,从大珠母贝外套膜cDNA文库中筛选得到PMMG1基因(大珠母贝外套膜基因1)。PMMG1基因全长618 bp,开放读码框编码140个氨基酸,N-端的22个氨基酸肽段为信号肽。PMMG1氨基酸序列与合浦珠母贝PFMG1的一致性为56%,预测有两个EF-hand结构域。选取编码PMMG1成熟蛋白的cDNA序列插入pET-32a质粒构建表达载体,通过IPTG诱导,Ni2+-NTA亲和层析柱纯化,成功获得预期大小的融合蛋白。凝胶电泳迁移率的变化证明PMMG1蛋白具有结合Ca2+/Mg2+的活性,组织特异性表达表明PMMG1基因在外套膜的表达量远高于其他组织。大珠母贝外套膜基因PMMG1的克隆与表达研究为进一步研究该蛋白在珍珠质矿化中的作用、探讨珍珠质形成的分子生物学机制奠定了一定基础。  相似文献   

大叶藻内生放线菌的分离及抗菌活性筛选   总被引：1，自引：0，他引：1       下载免费PDF全文

陈雷  申琳溪  马翠红  王光玉 《海洋科学进展》2021,39(1):102-109

大叶藻是一种水生单子叶植物,是构成海草床的主要藻类之一.对大叶藻内生放线菌及其活性物质的研究是发现海洋微生物资源和新天然产物的有利途径.通过纯培养的方法,使用2216E等7种培养基,从山东省威海市荣成天鹅湖采集的大叶藻样品中分离出62株内生放线菌,并利用纸片法对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌和副溶血性弧菌等7种指示菌进行了...  相似文献   

三沙湾大肠杆菌和肠球菌抗生素耐药性分析          下载免费PDF全文

李向乾  李晓东  林永豪  张伟  徐晗  杨桂琴  路玮静  俞道进  陈新华 《海洋科学》2023,47(7):138-148

为探究三沙湾水域细菌耐药性的情况,本文分离了该海域11株大肠杆菌和12株肠球菌,并测定其对常见抗生素的耐药性以及相关耐药基因。结果显示:大肠杆菌对抗生素的耐药率从高到低为四环素=氨苄西林>氯霉素=头孢唑啉>头孢噻肟=呋喃妥因>庆大霉素>环丙沙星,其中大肠杆菌对氨苄西林存在明显的高水平耐药(MIC≥256μg/mL占36.36%), TEM基因可能是导致耐药的主要基因。肠球菌对抗生素的耐药率从高到低为利福平>呋喃妥因>红霉素>氨苄西林=氯霉素=万古霉素,其对呋喃妥因存在明显的高水平耐药(MIC≥128μg/mL占74.93%)。肠球菌中仅检出喹诺酮类耐药基因gyra和四环素类耐药基因tetM、tetG。该海区存在着明显的多重耐药现象,大肠杆菌和肠球菌的多重耐药率分别达到54.55%和100%,表明三沙湾海域可能存在较为严重的抗生素耐药菌与耐药基因污染。  相似文献