原位杂交技术在斜带石斑鱼神经坏死病毒检测中的应用   总被引：4，自引：0，他引：4  

陈晓艳  何建国 《海洋科学》2008,32(6):1-4

根据斜带石斑鱼（Epinephelus coioids）神经坏死病毒（orang-spotted nervous necrosis virus,0GNNV）的主衣壳蛋白（major capsid protein,MCP）基因的保守序列,设计一对引物,从感染0GNNV的斜带石斑鱼组织匀浆液提取RNA为模板进行RT-PCR扩增,得到426bp的cDNA片断。用得到的RT-PCR产物加上地高辛（DIG）标记作为核酸探针。通过注射病毒提取液人工感染一组斜带石斑鱼,解剖感染病毒的斜带石斑鱼,从中分离出脑和眼睛,运用原位杂交技术检测组织中的OGNNV。实验表明,原位杂交具有较高的灵敏性和特异性,可以用原位杂交的办法来检测养殖的石斑鱼是否有携带该病毒,达到监控和预防神经坏死病爆发的目的。本实验还采用了H＆E染色方法检测了感染NNV的石斑鱼脑部和眼部组织,观察细胞内的坏死部分。与原位杂交做对比,提高了检测的可靠性和准确性。本实验建立的石斑鱼神经坏死病毒的ISH检测方法有着较高的特异性和敏感性,易于操作,有助于石斑鱼神经坏死病毒的组织定位、发病机理的研究。  相似文献   

防海胆食害藻礁的设计及实验研究     

田涛  张秀梅  张沛东  杨宝清  陈勇 《中国海洋大学学报(自然科学版)》2008,38(1):68-72

人工藻礁是进行藻场建设的重要手段,但由于海胆等食藻类生物的摄食,将会影响藻类的生长,从而影响人工藻场的建设效果.为解决人工藻场建设中海胆的食害问题,从礁体自身设计出发,实验设计了8种不同形状的藻礁,选用光棘球海胆和中间球海胆为实验对象,观察比较了不同形状藻礁对海胆攀爬的阻碍效果,实验发现:侧周面为锯齿形或侧周面缠挂多孔柔性材料的礁型可有效阻止海胆攀爬,起到防止海胆摄食礁顶藻类的目的.研究结果为人工藻礁的设计提供了参考依据.  相似文献   

姬松茸提取物组分体外抗病毒感染活性的研究     

樊廷俊  钱冠兰  杜玉堂  袁文鹏  吕雅萌 《中国海洋大学学报(自然科学版)》2008,38(5)

为了探明姬松茸提取物的体外抗病毒感染活性及其作用方式,进而为水产养殖鱼类高效抗淋巴囊肿病毒(lymphocystis disease virus,LCDV)感染活性物质的开发和鲆蝶类淋巴囊肿病的防治奠定基础,利用热水浸提和酒精沉淀法得到了5种姬松茸提取物组分(E1～5),并利用MTT、细胞病变程度观察等方法研究了5种组分对LCDV感染体外培养大菱鲆鳍细胞(turbot fin cells,TF细胞)的影响作用.细胞毒性实验结果显示,5种组分对体外培养TF细胞均无毒性.细胞病变程度结果表明,本文所得5种姬松茸提取物组分尤其是E5组分具有显著的抗LCDV感染TF细胞的活性.不同方式感染的实验结果进一步显示,5种姬松茸提取物组分抗LCDV感染TF细胞的作用可能主要是通过直接灭活病毒和/或阻断病毒吸附细胞来实现的.  相似文献   

Seasonal change of ice algal and phytoplankton assemblages in the Nella Fjord near Zhongshan Station, East Antarctica     

He Jianfeng  Chen Bo 《极地研究(英文版)》2000,11(2)

The ice algal and phytoplankton assemblages were studied from Nella Fjord near Zhongshan Station, East Antarctica from April 12 to December 30, 1992. Algal blooms occurred about 3 cm thick on the bottom of sea ice in late April and mid November to early December respectively, and a phytoplankton bloom appeared in the underlying surface water in mid December following the spring ice algal bloom. The biomass in ice bottom was 1 to 3 orders of magnitude higher than that of surface water. Amphiprora kjellmanii, Berkeleya sp., Navicula glaciei, Nitzschia barkelyi, N. cylindrus /N. curta, N. lecointei and Nitzschia sp. were common in the sea ice temporarily or throughout the study period. The biomass in a certain ice segment was decreased gradually and the dominant species were usually succeeded as the season went on. Nitzschia sublineata and Dactyliosolen antarctica were two seasonal dominant species only observed in underlying water column. The assemblages between bottom of ice and underlying surface water were different except when spring ice algae bloomed. The evidence shows that the ice algal blooms occurred mainly by in situ growth of ice algae, and the phytoplankton bloom was mostly caused by the release of ice algae.  相似文献   

三疣梭子蟹几丁质酶基因(PtCht6)的克隆及其在免疫中的功能分析     

宋柳  吕建建  王磊  孙东方  刘萍 《海洋与湖沼》2019,50(5):1080-1090

几丁质酶(chitinase)在甲壳动物的蜕皮、消化和免疫等很多生物学过程中发挥重要功能,为深入探讨几丁质酶的免疫防御机制,本实验利用RACE技术克隆了三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)PtCht6基因。该基因cDNA全长2736bp,开放阅读框(ORF)2103bp,编码700个氨基酸,具有几丁质酶GH18家族典型特征。利用实时荧光定量技术分析PtCht6在三疣梭子蟹不同组织、不同蜕皮阶段、不同病原感染以及低盐胁迫(11)下的表达特征,结果显示:PtCht6在各组织中均有表达且在肝胰腺中的表达量最高;在不同蜕皮时期的肝胰腺中,其表达量由蜕皮后期(A/B)、蜕皮间期(C)、蜕皮前期(D)依次递减(P0.05);人工感染WSSV和副溶血弧菌后.PtCht6的表达量在肝胰腺中分别于12h、72h达到最大值,在血细胞中均于12h达到最大值,且相较于对照组,整体显著上调表达(P0.05);低盐胁迫能够显著抑制该基因的表达,最高抑制73倍(P0.05)。同时发现,低盐环境下感染WSSV后,该基因达到峰值的时间明显延迟(至少延迟12h.P0.05)。该研究结果预示PtCht6作为免疫因子参与三疣梭子蟹的病原防御,且低盐胁迫在一定程度上抑制了该基因的免疫功能。  相似文献   

一例异育银鲫(Carassius auratus gibelio)暴发性出血病病原分析     

袁雪梅  潘晓艺  郝贵杰  刘莉  吕孙建  蔺凌云  沈锦玉 《海洋与湖沼》2019,50(4):913-920

2016年6月,江苏某异育银鲫(Carassius auratus gibelio)养殖场暴发一种传染性急性出血病,造成养殖银鲫大量死亡。为分析此次疾病病因及流行规律,本研究从发病养殖场采集患出血病的异育银鲫,从细菌、病毒及寄生虫三个方面对病原进行了分析。采用病原菌分离、组织病理学观察、超薄切片电镜观察、病毒核酸分析、回感实验等对病原进行鉴定。结果显示从发病鲫鱼体内分离到病毒一株,未发现寄生虫及细菌感染。经测序及序列分析,该病毒为鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesvirus2,CyHV-2)病毒,组织病理学观察结果显示患病鱼的鳃和肾脏有明显病变,电镜下可观察到病鱼脾脏组织有带囊膜的球形病毒,囊膜直径约为170—200nm,病毒衣壳直径约为110—120nm,核心直径约为60nm,用组织匀浆感染鲫鱼囊胚细胞系(CGB)可稳定地观察到典型的细胞病变,用患病鱼组织匀浆液人工感染异育银鲫的死亡率高达100%,荧光定量PCR检测到该病毒可感染多器官,其中以脾脏中病毒含量最高,其次是脑,肝脏中最少。本研究可为CyHV-2的诊断防控及疫苗研制提供资料。  相似文献   

海洋有害藻华研究进展   总被引：3，自引：0，他引：3  

林森杰  姬南京  罗昊 《海洋与湖沼》2019,50(3):495-510

浮游植物不仅是食物链的基础环节,也在生物地球化学循环中起着重要作用。然而,某些种类在一定条件下会过度增殖富集形成有害藻华(因造成水色变为红、绿、褐、金等颜色,所以俗称为赤潮、绿潮、褐潮、金潮等),结果严重影响当地经济、海洋生态系统、全球生物地球化学循环甚至人类健康。近年来,随着水体富营养化、全球气候变化等现象加剧,有害藻华(Harmful Algal Bloom,HAB)的暴发规模和频次呈逐年增加趋势,且相关研究已成为环境生态学领域的热点。本文主要以典型海洋HAB生物为线索,从物种分布、生物监测、主要影响因素、分子机制及防治等方面概述了近十年HAB的主要研究进展,总结了现有研究的优点和不足,并对未来HAB研究做了相关展望。近十年的研究进展主要体现在:(1)不断有新的HAB物种被发现或鉴定,HAB藻类系统分类也不断被更新;(2)鉴定、检测方法包括DNA分析、生物传感器研发应用等有较大改进;(3)藻类毒素生物合成通路的研究有一定进展;(4)在HAB生态学与海洋学研究持续发展的基础上,分子机制及现代组学发展较迅速。然而, HAB发生的关键环境诱因和生物学(特别是生化与分子)机制仍然不是很清楚,缺乏一个可用来预测HAB暴发的关键因子。笔者认为,一方面是因为HAB的复杂性、种类及生态系统的特异性,另一方面是研究缺乏系统性与完整性。因此未来有必要加强对每一个重要的HAB原因种开展系统、持续的研究,类似于生物科学领域里的模式种研究,并且有必要开展综合性的研究,如实验室单种培养、中尺度模拟及现场生态研究相结合,整合现代组学、传统生理生态学和现场实时连续观测等技术。  相似文献   

ATS藻板与自然礁石上藻群生物多样性的比较     

王欢欢  谭斯尹  王慧  杜虹  侯涛  陈贤建  黎俊珺  黄莹 《热带海洋学报》2019,38(1):43-48

ATS(algal turf scrubber)系统是一种利用潮间带藻类高效去除富营养化水体中氮(N)、磷(P)元素的水质净化系统, 藻类是支持整个系统最重要的组成部分, 其群落结构与水质净化效果密切相关。该研究基于Illumina MiSeq平台的高通量测序技术对海水水族缸的ATS系统中藻板样品和自然礁石上的藻类进行多样性分析。18S rDNA研究结果表明, ATS系统中经筛选得到藻类优化序列21390条, 其中对丝藻属Antithamnion占主要地位, 占序列总数的22.79%, 其次19.07%序列归入斜纹藻属Psammodictyon; 宋井、展南亭、后宅3个地区的藻类经筛选分别得到88435、87129、106458条优化序列, 主要为分枝色指藻属Chroodactylon、宽果藻属Mastocarpus和日本马泽藻属Mazzaella。ATS系统和自然环境样品共有的优势藻为骨条藻属Skeletonema和仙菜属Ceramium。本实验在研究ATS系统与自然礁石上的藻类群落相似性的同时, 深入探究了其群落结构的差异性, 为进一步优化ATS系统的功能提供了理论依据。  相似文献   

培育密度和投饵量对长牡蛎壳黑选育品系幼虫生长存活及附着变态的影响     

种金豆  李琪  王涛 《中国海洋大学学报(自然科学版)》2019,(2):21-29

为探究长牡蛎(Crassostrea gigas)壳黑选育品系规模化繁育适宜的培育密度和投饵量,本研究以长牡蛎野生群体幼虫为对照组,分析了不同培育密度(3、7和15个/mL)和不同初始投饵量(0.4、0.8和1.6×10~3cells·ind^-1·d^-1)对长牡蛎壳黑选育品系幼虫生长、存活及附着的影响。研究显示,培育密度和投饵量对长牡蛎幼虫的生长速率、存活率和附着率有显著交互作用(P<0.05)。在培育密度3和7个/mL实验组,长牡蛎幼虫生长速率随投饵量增加而显著增大(P<0.05),并在培育密度7个/mL、投饵量1.6×10~3cells·ind^-1·d^-1实验组达到最大值。而在培育密度15个/mL实验组,投饵量增加对长牡蛎幼虫的生长速率无显著影响(P> 0.05)。且在培育密度15个/mL、投饵量1.6×10~3cells·ind^-1·d^-1实验组长牡蛎壳黑品系幼虫存活率和附着率最低。但在培育密度15个/mL实验组长牡蛎壳黑选育品系幼虫的壳高始终高于野生群体幼虫。且除投饵量0.4×10~3cells·ind^-1·d^-1实验组外,长牡蛎壳黑选育品系幼虫生长速率、存活率和附着率均高于野生群体幼虫。研究结果表明,长牡蛎壳黑选育品系幼虫最适培育条件为培育密度7个/mL、投饵量1.6×10~3cells·ind^-1·d^-1,增加投饵量可促进长牡蛎幼虫生长,但过高的培育密度会与投饵量产生拮抗作用,抑制幼虫生长,不利于幼虫存活和附着。与长牡蛎野生群体相比,壳黑选育品系幼虫能适应更高的培育密度环境,在饵料充足的条件下,其幼虫的生长、存活及附着性状均优于野生群体。  相似文献   

Identification of dissolved and particulate carbonyl compounds produced by marine harmful algal bloom species     

SHANG Lixia  HU Zhangxi  TANG Yingzhong 《海洋湖沼学报（英文）》2019,(5):1566-1581

Carbonyl compounds, especially polyunsaturated aldehydes (PUAs), are increasingly reported as teratogenic to grazers and deleterious to phytoplankton. While PUAs have been considered to be mainly produced by diatoms after cell wounding, little is known about whether microalgae other than diatoms, particularly harmful algal bloom (HAB)-forming species, produce carbonyl compounds. In this study, we analyzed the carbonyl compounds from eight common HAB-forming species ( Akashiwo sanguinea , Karenia mikimotoi , Karlodinium venefi cum , Margalefi dinium polykrikoides , Prorocentrum donghaiense , P . minimum , Scrippsiella trochoidea , and Heterosigma akashiwo ) using gas chromatography-mass spectrometry in full scan and selected ion monitoring (SIM) modes. Our results show a ubiquitous presence of carbonyl compounds in both dissolved and particulate forms in all species we examined. In the full scan mode, 133 chromatographic peaks were detected from 51 samples altogether. Both the varieties of carbonyl compounds and their quantities were algal species dependent, although most of the carbonyl compounds could not be fully identifi ed according to the mass spectral database only due to the unavailability of enough standards for all analytes. Aided with nine standards in SIM mode, we further identifi ed and quantifi ed all nine aldehydes (2-methyl-2-pentenal, trans-2-nonenal, cis-6-nonenal, 2,6-dimethyl-5-heptenal, trans-2-hexenal, trans-2- decenal, 2,4-heptadienal, trans-trans-2,4-octadienal, and trans-trans-2,4-decadienal). Four of these nine aldehydes were detected in particulate form, which confi rmed that trans-2-nonenal could be produced by K . mikimotoi , Karl . venefi cum , P . donghaiense , P . minimum , S . trochoidea , and H . akashiwo , 2,4-heptadienal and trans-trans-2,4-decadienal by A . sanguinea , M . polykrikoides , and S . trochoidea , and trans, trans-2,4- octadienal by S . trochoidea , respectively. We proved that some dinofl agellate and raphidophyte species could contribute to the pool of carbonyl compounds including PUAs in a marine ecosystem. Some carbonyl compounds, particularly those in high cell quota and/or dissolved concentration, may be related to fi shkilling or allelopathy which needs further identifi cation and quantifi cation.  相似文献