鲈鱼FBP基因的克隆和表达分析          下载免费PDF全文

童彩环  钱云霞  郑伟贤  韩柳 《海洋学研究》2012,30(4):78-83

果糖-1,6-二 磷酸酶(fructose-1,6-bisphosphatase,FBP, EC 3. 1.3.11)可催化果糖-1,6-二磷酸水解成果糖-6-磷酸和无机磷酸盐,是糖异生途径中的关键酶之一。本研究运用SMART RACE技术从鲈鱼Lateolabrax japonicus肝脏中分离克隆了FBP基因的全长cDNA序列,该基因全长1 357 bp,其中5’非翻译区和3’非翻译区分别为42 bp和301 bp,开放阅读框为1 014 bp,共编码337个氨基酸。蛋白质分子量约为36.7 kD,理论pI为6.90。氨基酸序列分析表明,鲈鱼FBP与其它动物的肝脏型FBP相似性很高,与裸盖鱼、彩虹胡瓜鱼、斑马鱼、异育银鲫和大西洋鲑的肝脏型FBP的同源性分别为94.3%,90. 8%,89.3%,88.1%和84.1%。系统发育分析显示,鲈鱼FBP与其它鱼类的肝脏型FBP成簇后再与哺乳动物的肝脏型FBP聚成一支,然后才与哺乳动物的肌肉型FBP汇成簇。同时用RT-PCR分析了FBP基因在鲈鱼肝脏、肌肉、心脏、眼、肠、肾脏、脂肪、脾脏、鳃和大脑等10个组织的表达,结果表明FBP仅在肝脏、肾脏和肠这3个组织中有较高的表达,与糖异生发生组织基本一致,因此推测该FBP属于肝脏型。  相似文献   

近江牡蛎i-型溶菌酶基因分析及温度对基因表达的影响   总被引：2，自引：0，他引：2  

许友卿  吴卫君  丁兆坤  潘志忠  何为  吴铁军  陈秀荔  李咏梅  蒋伟明 《热带海洋学报》2012,(6):69-75

溶菌酶是机体先天免疫系统中一个重要的效应分子,参与机体多种免疫反应。本研究克隆了近江牡蛎Crassostrea hongkongensis i-型溶菌酶的保守cDNA序列,并探讨其在不同组织的表达、不同温度对其表达的影响。结果表明,近江牡蛎i-型溶菌酶保守cDNA序列长634 bp,包含一个长420 bp开放阅读框,编码139个氨基酸;其蛋白序列具有典型的i-型溶菌酶特征,包含特定氨基酸残基序列CL(E/L/R/H)C(I/M)C、部分高度保守序列SCG(P/Y)FQI和酶活性中心位点(Glu34、Asp45、Ser48、Trp61);另外,还发现一个新的氨基酸保守序列HNGGPRGC。i-型溶菌酶基因在近江牡蛎消化腺、肌肉、鳃、外套膜、唇瓣等5种组织的表达量以消化腺最高,鳃次之,肌肉最低。i-型溶菌酶基因的表达与温度相关,水温20—25℃,其表达量比较稳定;水温6℃或13℃,表达量都呈下降趋势;在27℃,表达量在整个实验过程都维持一个相对高的水平;在34℃,其表达量在第12小时达到最高,第48小时后急剧下降;表明温度可影响i-型溶菌酶基因表达,从而调节其免疫功能和对外环境的应激反应。  相似文献   

石油污染地下水中细菌分子生态学研究          下载免费PDF全文

郝春博王广才  董建楠张倩 蔡五田 《地学前缘》2009,16(4):389-400

采集了某废弃炼油厂的石油污染地下水样品,提取水中微生物总DNA,构建细菌16S rDNA克隆文库,并通过16S rDNA序列的系统发育分析,对样品中的细菌种群多样性以及群落结构进行了研究。结果表明,文库中阳性克隆的16S rDNA序列分属11个细菌类群,分别为Betaproteobacteria(381％),Alphaproteobacteria(353％),Gamaproteobacteria(51％),Deltaroteobacteria(52％),Bacteroidetes(40％),Verrucomicrobia(25％),Epsilonproteobacteria(19％),Nitrospira(13％),Planctomycetes(13％),Candidate Division OD1(13％),Unclassified Bacteria(38％)。在这一生态系统中,Betaproteobacteria和Alphaproteobacteria类细菌占据主导地位,二者所占比例均在三分之一以上。群落中最主要的降解菌是噬氢菌属(Hydrogenophaga)和鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas)细菌,它们在文库中所占比例达239％和195％。该石油污染地下水样品中细菌与许多其他已知的降解菌亲缘关系较近,如Sulfuricurvum kujiense、Trichlorobacter thiogenes、Rhodoferax ferrireducens以及红细菌属(Rhodobacter)、甲基单胞菌属(Methylomonas)和涅瓦菌属(Nevskia)细菌等。此外,文库中克隆的16S rDNA序列与许多类似的污染场地中发现的环境克隆相似性很高,如煤焦油污染的地下水、苯污染的地下水、原油污染的土壤、溴甲烷和氯甲烷污染的土壤、抗生素生产废水以及活性污泥等,证明该石油污染地下水中有大量降解菌群的存在。石油污染物的种类对降解菌群的组成有一定的选择作用。  相似文献   

Molecular Cloning and Expression ofPoIR2, a Novel Gene Involved in Immune Response in Japanese Flounder （Paralichthys olivaceus）     

Shuo Li  Chunmei Li  Xubo Wang  Yanan Wang  Zhipeng Liu  Teng Zhai  Quanqi Zhang 《中国海洋大学学报(英文版)》2010,9(1):59-64

A novel immune-related gene was expressed in Japanese flounder (Paralichthys olivaceus) injected with Vibrio anguillarum. The complete cDNA contained a 169 bp 5’UTR, a 336 bp open reading frame (ORF) encoding 111 amino acids and a 556bp 3’UTR. Six exons and five introns were identified in the PoIR2 gene. Blastp similarity comparison showed its encoding protein had 50% similarity to Danio rerio neuromedin S (NMS), but further alignment indicated they did not have NMS C-terminal conservational signature domain. So it was not defined as an NMS homologue. Protein structure analysis indicated it had a 26aa signal peptide and was a secretory pathway protein. RT-PCR demonstrated that the expression of PoIR2 was quickly induced and drastically increased in liver, kidney, spleen, gills, intestine, heart, and skeletal muscle after infected with V. anguillarum. These results indicated that the PoIR2 might play some important role in Japanese flounder immune response system. This gene was named PoIR2 (P.olivaceus immune-related gene 2, GenBank accession number: EU224372). The mature PoIR2 peptide was expressed in BL21(DE3) pLysS using pET-32a(+) vector and a great part of the recombinant mature peptide existed as soluble type.  相似文献   

长白山小天池和长白瀑布水体典型样本的细菌多样性比较     

张修源  苗雨雁  顾政权  刘风香 《世界地质》2017,36(2):632-642

水体中微生物对环境的改变有着敏感的响应。16S rRNA基因克隆文库可以同时反映标本中的细菌种类和各种细菌的相对比例。本研究构建环境样品16S rRNA基因的克隆文库,解析长白山小天池入水口和长白瀑布下水潭两个典型水体样本中的细菌种属多样性特征,并探讨其与水体性质的关系。小天池文库共获得89条16S rRNA基因序列,分别属于10个类群,其中Betaproteobacteria是主要类群(占总数的23.6%)。长白瀑布文库共获得88条序列,分别属于8个类群,以Betaproteobacteria为主要类群(占总数的35.2%)。Bacteroidetes、Betaproteobacteria、Alphaproteobacteria和Gammaproteobacteria是两个样本共有的优势类群,而Deltaproteobacteria、Acidobacteria和Armatimonadetes只在小天池入水口处检出。长白瀑布水潭中的细菌群落多样性明显偏低,种群均匀度指数也较低,但两样本的地理距离极短,认为人类活动可能是导致这种差异的原因。  相似文献   

黄鳍鲷生长激素cDNA的分子克隆和序列分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

张殿昌  江世贵等 《广东海洋大学学报》2002,22(4):62-65

  相似文献   

Development of an enzyme-linked immunosorbent     

Renyan LIU Bingjun CHEN Yubo LIANG Daoyan XU Bing LIANG 《中国地球化学学报》2006,25(B08):217-218

The development of immunodetection method of 2, 2-Bis （4-chlorophenyl） acetic acid （DDA）, the decomposition product of organochlorine insecticide DDT, was performed in this study. DDA was conjugated with bovine serum albumin （BSA） and ovualbumin （OVA） for the use of immunogen to produce antibodies and coating ligands to measure the titration level of antibody and the displacement of free analytes. Evaluation of the antisera by antibody capture assay showed that the antibody titer of antisera raised against DDA-OVA was higher than 1 ： 80000. Using 5#PAb, an indirect competitive enzyme immunoassay was developed for measurement of DDA. The working range for quantitative measurement of DDA and the quantitative limit for DDA were estimated to be 2.5-2000 ng/mL and 2.5 ng/mL for seawater, 12.5 ng/g for shellfish, respectively.  相似文献   

牙鲆芳香化酶Cyp19a多克隆抗体制备及其应用     

舒畅  王丽娟  邹聪聪  邹玉霞  王国玉  吴志昊  李泽  尤锋 《海洋科学》2022,46(11):83-93

芳香化酶Cyp19a在鱼类性别决定和性别分化中起关键作用,通过调控体内雌、雄激素的转化来影响鱼类性别表型形成。为深入研究Cyp19a在牙鲆(Paralichthys olivaceus)性腺分化和发育过程中的表达规律及作用机制,本文从牙鲆cDNA中克隆获得1557bp的cyp19a基因编码序列,并成功构建了原核重组表达质粒。经体外重组与纯化获得较高纯度的重组Cyp19a蛋白;以此作为抗原免疫兔子,制备多克隆抗体。用间接酶联免疫吸附剂测定(ELISA)技术检测抗血清效价,评估其免疫原性。结果表明免疫结束后得到的抗体血清效价超过了1∶50000,且纯化后抗体具有较好活性。Western Blot(WB)检测结果表明Cyp19a兔多抗可以特异性识别牙鲆重组Cyp19a蛋白和内源性Cyp19a蛋白。蛋白水平的雌雄性腺差异表达分析显示,牙鲆Cyp19a蛋白在卵巢中高表达,在精巢中微量表达。利用Foxl2和Dmrt1重组蛋白处理牙鲆性腺分化期幼鱼可分别显著上调和下调Cyp19a的表达(P<0.05)。综上所述,本研究成功制备了牙鲆Cyp19a多克隆抗体并进行了应用,为深入研究牙鲆等鱼类性别分化机制提供有力工具。  相似文献   

深海热液区管状蠕虫Ridgeia piscesae中Ricin B-lectin型结构域基因的克隆与表达     

徐海鹏  阮灵伟  崔治中 《台湾海峡》2014,(4):525-530

作为一种重要的模式识别因子,凝集素在多个领域中均有着广泛的应用价值,因此,开发和利用新型凝集素将具有重要意义.本研究以生活在深海热液区极端环境条件下的管状蠕虫Ridgeia piscesae为材料,首次从管状蠕虫中克隆获得Ricin B-lectin基因rgal.序列分析表明,RGAL与已知序列的相似性较低,其含有2个Ricin B-lectin型结构域,并且该结构域具有该家族所特有的β-三叶草形三维结构.多方面的分析结果显示RGAL可能是一个新颖的凝集素蛋白.对RGAL进行了原核重组表达,并对其复性条件进行了摸索优化,成功获得了其可溶性表达产物,为后续RGAL的生物活性分析奠定了坚实的基础.  相似文献   

绿鳍马面鲀ERα 基因部分cDNA 序列克隆及其表达研究     

赵梅琳  温海深  张冬茜  何峰  李吉方 《海洋科学》2014,38(5):81-88

雌二醇是与生殖相关的重要的性类固醇激素之一,它与雌激素受体相结合作用于靶器官从而发挥生物活性。为进一步阐明绿鳍马面鲀雌激素受体α(Estrogen receptorα,ERα)的生理功能提供了科学依据,同时也为其人工繁育提供一定的理论基础,作者利用简并引物扩增得到绿鳍马面鲀(Navodon septentrionalis)ERα部分cDNA序列,共1410bp,编码470个氨基酸。通过半定量RT-PCR技术分别检测了其在雌鱼、雄鱼中各组织的表达情况,结果表明ERα在雌鱼体内的表达较雄鱼更广泛,在雌鱼垂体、心脏和卵巢的表达量最高,在雄鱼的垂体、肝脏、肾脏、精巢也有较高的表达。采用实时定量RT-PCR技术,分析了ERα在性腺中的周年表达情况,卵巢中ERαmRNA在5月表达量最高,7月最低:精巢中在5月最低,9月最高。该项研究表明ERα与绿鳍马面鲀生殖周期存在密切关联,提示在性腺发育过程中发挥一定作用。  相似文献