牙鲆RAG2 基因的质粒构建和体外原核表达     

王先磊  谭训刚  张培军  徐永立 《海洋科学》2012,36(9):59-63

将牙鲆(Paralichthys olivaceus)RAG2 cDNA序列插入到体外表达质粒pProEXTM HT,在大肠杆菌(Escherichia coli) BL-21中进行体外表达,分析了诱导时间和 IPTG 浓度对重组蛋白产生量的影响,确定了最佳诱导条件为:诱导时间为3 h, IPTG诱导浓度0.2 mmol/L.本研究同时对RAG2重组蛋白的可溶性进行确认,并利用BD TALONTM 金属亲和柱纯化了RAG2蛋白.本研究结果为进一步深入研究RAG2蛋白的生物学功能奠定了良好的基础.  相似文献   

饲料中添加L-肉碱对牙鲆幼鱼生长、生化组成及血液指标的影响   总被引：1，自引：0，他引：1  

高小强  田青杰  石洪玥  姜志强 《广东海洋大学学报》2012,(1):39-46

研究0、300、600、900、1 200、1 500 mg/kg 6个L-肉碱添加水平对牙鲆(Paralichthys olivaceus)幼鱼生长、生化组成和血液指标的影响。结果表明:添加量为1 200 mg/kg的处理组牙鲆幼鱼的增重率和特定生长率显著提高,饲料系数显著降低(P<0.05);随着饲料中L-肉碱含量的增加,肝指数呈现下降趋势,且在添加量为900~1 500 mg/kg时,各组较对照组差异显著(P<0.05);饲料中添加L-肉碱显著降低各实验组脏体比(P<0.05),而对各处理组间存活率和肥满度均无影响(P<0.05);肌肉和肝脏中的脂肪含量与L-肉碱添加量呈负相关,当添加量为1 200~1 500 mg/kg时,较对照组差异显著(P<0.05);肌肉中的蛋白含量与L-肉碱添加量呈正相关,但各组差异不显著(P<0.05);饲料中添加L-肉碱降低血清中的谷草转氨酶、胆固醇、甘油三酯和尿素氮含量,且添加量1 200 mg/kg组各指标含量均显著低于对照组(P<0.05);各处理组的血糖含量较对照组均有所增加,其中1 200 mg/kg组血糖含量较对照组提高41.6%(P<0.05);血清中总蛋白和低密度脂蛋白均随着L-肉碱添加量的增加而呈下降趋势,高密度脂蛋白却得以提升,但差异均不显著(P<0.05)。分析认为,在本实验条件下,饲料中添加L-肉碱可促进牙鲆幼鱼生长,且降脂效果显著。建议L-肉碱最适添加量为1 200 mg/kg。  相似文献   

Molecular Cloning and Expression ofPoIR2, a Novel Gene Involved in Immune Response in Japanese Flounder （Paralichthys olivaceus）     

Shuo Li  Chunmei Li  Xubo Wang  Yanan Wang  Zhipeng Liu  Teng Zhai  Quanqi Zhang 《中国海洋大学学报(英文版)》2010,9(1):59-64

A novel immune-related gene was expressed in Japanese flounder (Paralichthys olivaceus) injected with Vibrio anguillarum. The complete cDNA contained a 169 bp 5’UTR, a 336 bp open reading frame (ORF) encoding 111 amino acids and a 556bp 3’UTR. Six exons and five introns were identified in the PoIR2 gene. Blastp similarity comparison showed its encoding protein had 50% similarity to Danio rerio neuromedin S (NMS), but further alignment indicated they did not have NMS C-terminal conservational signature domain. So it was not defined as an NMS homologue. Protein structure analysis indicated it had a 26aa signal peptide and was a secretory pathway protein. RT-PCR demonstrated that the expression of PoIR2 was quickly induced and drastically increased in liver, kidney, spleen, gills, intestine, heart, and skeletal muscle after infected with V. anguillarum. These results indicated that the PoIR2 might play some important role in Japanese flounder immune response system. This gene was named PoIR2 (P.olivaceus immune-related gene 2, GenBank accession number: EU224372). The mature PoIR2 peptide was expressed in BL21(DE3) pLysS using pET-32a(+) vector and a great part of the recombinant mature peptide existed as soluble type.  相似文献   

Distribution and expression in vitro and in vivo of DNA vaccine against lymphocystis disease virus in Japanese flounder(Paralichthys olivaceus)   总被引：1，自引：0，他引：1  

郑风荣  孙修勤  刘洪展  吴兴安  钟楠  王波  周国栋 《中国海洋湖沼学报》2010,(1)

Lymphocystis disease,caused by the lymphocystis disease virus (LCDV),is a significant worldwide problem in fish industry causing substantial economic losses.In this study,we aimed to develop the DNA vaccine against LCDV,using DNA vaccination technology.We evaluated plasmid pEGFP-N2-LCDV1.3 kb as a DNA vaccine candidate.The plasmid DNA was transiently expressed after liposome transfection into the eukaryotic COS 7 cell line.The distribution and expression of the DNA vaccine (pEGFP-N2-LCDV1.3kb) were also ana...  相似文献   

Histological study on the skin of Japanese flounder <Emphasis Type="Italic">Paralichthys olivaceus</Emphasis>     

ZHUJie ZHANGXiumei GAOTianxiang 《中国海洋大学学报(英文版)》2005,4(2):145-151

Histological development of Japanese flounder Paralichthys olivaceus larval skin and ultrastructural difference of skin between reared normal and malpigmented Japanese flounder were studied with light microscopy (LM) and transmission electron microscopy (TEM). The results show that the skin develops slowly before the metamorphosis, while at the onset of metamorphosis, the skin develops quickly and becomes complete in structure till about 50d after being hatched. Ultrastructural observation on the normal and malpigmented skins shows that the iridophore and melanophore are adjacent to each other. Profile and structure of the two kinds of pigmcnt cells are more complete in the skin of normal ocular side than in the skin of pigmented blind side. The ultrastructure of typical chloride cell was observed in the skin of Japanese flounder larvae for the first time.  相似文献   

牙鲆芳香化酶Cyp19a多克隆抗体制备及其应用     

舒畅  王丽娟  邹聪聪  邹玉霞  王国玉  吴志昊  李泽  尤锋 《海洋科学》2022,46(11):83-93

芳香化酶Cyp19a在鱼类性别决定和性别分化中起关键作用,通过调控体内雌、雄激素的转化来影响鱼类性别表型形成。为深入研究Cyp19a在牙鲆(Paralichthys olivaceus)性腺分化和发育过程中的表达规律及作用机制,本文从牙鲆cDNA中克隆获得1557bp的cyp19a基因编码序列,并成功构建了原核重组表达质粒。经体外重组与纯化获得较高纯度的重组Cyp19a蛋白;以此作为抗原免疫兔子,制备多克隆抗体。用间接酶联免疫吸附剂测定(ELISA)技术检测抗血清效价,评估其免疫原性。结果表明免疫结束后得到的抗体血清效价超过了1∶50000,且纯化后抗体具有较好活性。Western Blot(WB)检测结果表明Cyp19a兔多抗可以特异性识别牙鲆重组Cyp19a蛋白和内源性Cyp19a蛋白。蛋白水平的雌雄性腺差异表达分析显示,牙鲆Cyp19a蛋白在卵巢中高表达,在精巢中微量表达。利用Foxl2和Dmrt1重组蛋白处理牙鲆性腺分化期幼鱼可分别显著上调和下调Cyp19a的表达(P<0.05)。综上所述,本研究成功制备了牙鲆Cyp19a多克隆抗体并进行了应用,为深入研究牙鲆等鱼类性别分化机制提供有力工具。  相似文献   

褐牙鲆、夏鲆及其杂交子代核型与DAPI 带型分析     

隋娟  马道远  肖志忠  徐世宏  肖永双  武宁宁  刘清华  李军 《海洋科学》2014,38(3):69-74

为了深入剖析褐牙鲆与夏鲆杂交后代的染色体结构,本研究利用秋水仙素-低渗-空气干燥法制备胚胎染色体和DAPI(4’,6’-diamidino-2-phenylindole)荧光染色的方法,对褐牙鲆(Paralichthys olivaceus)、夏鲆(Paralichthys dentatus)及其正反交子代胚胎细胞的染色体组型和染色质的分布进行了研究。结果表明,褐牙鲆、夏鲆及其正交子代(褐牙鲆♀×夏鲆♂)染色体组均含有48条端部着丝粒染色体,染色体组型公式均为2n=48t,组内染色体长度分布连续,三者核型相似。反交子代(夏鲆♀×褐牙鲆♂)为46条端部着丝粒染色体,比亲本及正交子代少了两条染色体。DAPI荧光染色显示,褐牙鲆1号染色体中的一条染色体有较明显的次缢痕,夏鲆及正反交子代染色体中未见明显次缢痕。褐牙鲆与正交子代染色体着色较为均一,而夏鲆与反交子代着丝粒区域亮度明显增强。  相似文献   

牙鲆多聚免疫球蛋白受体基因的克隆、表达及鉴定     

许国晶  绳秀珍  战文斌 《海洋与湖沼》2014,45(4):873-878

采用PCR扩增、构建重组高效表达载体的方法,进行了牙鲆多聚免疫球蛋白受体(pIgR)基因的克隆、原核表达研究,并利用SDS-PAGE、western-blot及ELISA方法对纯化的重组蛋白特性进行了分析。结果表明,PCR扩增出pIgR开放阅读框(ORF)基因全长为1005 bp,所构建的pET-32(a)-pIgR重组质粒经PCR和双酶切鉴定含有ORF全长基因。SDS-PAGE结果表明,表达的目的蛋白相对分子质量为58 kDa,与理论预期值一致,IPTG诱导6h后表达量趋于稳定,经亲和层析纯化得到高纯度的重组蛋白。Western-blot结果表明,重组pIgR能够与鼠抗His-tag单克隆抗体发生特异性反应;ELISA结果表明重组pIgR能够与牙鲆IgM发生特异性结合。本研究获得了纯化的重组pIgR,证明其具有IgM结合活性,为下一步研究牙鲆pIgR的转运机制及在黏膜免疫防御中的作用机理提供了分子基础。  相似文献   

渗透压、pH、葡萄糖及离子溶液对夏牙鲆精子激活及运动特征的影响     

王学颖  徐世宏  刘清华  李军 《海洋科学》2016,40(3):40-46

作者通过渗透压计分别测定各溶液的渗透压值,通过CASA精子分析系统,测定精子运动参数,分析、比较了渗透压、pH、葡萄糖及离子溶液对夏牙鲆(Paralichthys dentatus)精子激活及运动特征的影响。结果表明:夏牙鲆精子激活的渗透压范围为581~1260 mosm/kg;在特定的渗透压范围内(单位为mosm/kg),A组(581~650),B组(762~877),C组(931~1060),D组(1117~1260)中,与NaCl和KCl溶液相比较,葡萄糖溶液可以显著提高夏牙鲆精子激活后的运动率;在相对高渗条件下(1091~1180),经Ca Cl2400、EGTA400和无Ca~(2+)人工海水激活的夏牙鲆精子运动率存在显著差异;且夏牙鲆精子最适的激活p H范围是7~7.5。综上,激活剂的渗透压决定了夏牙鲆精子能否激活并显著影响了激活后精子的运动率,同时葡萄糖、外源Ca2+及p H均在一定程度上影响了精子的运动率。  相似文献   

牙鲆病原秦皇岛弧菌的血清型及荧光抗体检验     

陈翠珍  房海  张晓君  范莉 《海洋通报》2007,26(1):45-49

用分离于病(死)牙鲆(Paralichthys olivaceus L.)的一种新病原弧菌——秦皇岛弧菌(Vibrio qinhuangdaora sp.nov.)的代表菌株(HQ010712-1株),分别制备全菌(OK)及热处理(121℃作用1h)的菌体(O)免疫原,强化免疫接种家兔制备相应抗血清,对供试12株秦皇岛弧菌进行了血清型检定,结果表明均存在同种的K抗原和同种的O抗原(血清同源),其中O抗原具有强免疫原性、K抗原的免疫原性弱但具有强O凝集抑制作用;以相应OK抗血清为第一抗体,以标准的羊抗兔IgG荧光抗体为第二抗体,对12株秦皇岛弧菌的纯培养物及用代表菌株(HQ010712-1)人工感染病死牙鲆的肝组织进行了间接荧光抗体染色,结果显示了特异的荧光反应。  相似文献