基于FIASCO技术的合浦珠母贝微卫星标记分离与筛选研究   总被引：4，自引：0，他引：4       下载免费PDF全文

曲妮妮  龚世园  黄桂菊  童金苟  喻达辉 《热带海洋学报》2010,29(3)

用FIASCO(Fast Isolation by AFLP of Sequences Containing Repeats)技术开展了合浦珠母贝Pinctada fucata基因组微卫星标记的分离与筛选研究.合浦珠母贝基因组DNA经限制性内切酶MseI酶切后与接头连接, 用生物素标记的(CA)15探针与其杂交, 然后用磁珠富集、洗脱获得单链目的片段, 经PCR扩增后形成双链, 最后进行克隆转化, 构建微卫星富集文库.挑选克隆用探针引物(CA)15 和载体引物进行第2次筛选, 获得阳性克隆357个, 测序结果表明, 297个克隆(83.2%)含有微卫星序列, 包括479个微卫星DNA结构域.其中完美型微卫星有370个(77.3%), 非完美型95个(19.8%), 复合型14个(2.9%).合成引物49对, 有31对(63%)扩增出目的产物, 其中9 对在种群中(n=32)具有扩增多态性, 其多态信息含量PIC值在0.375―0.809之间, 平均为0.536;等位基因数在2―9个之间, 平均为4.889个;观测杂合度介于0.200―0.600之间, 平均为0.415;期望杂合度的变化范围为0.454―0.844, 平均为0.598.表明FIASCO技术适合于合浦珠母贝微卫星标记的分离与筛选.  相似文献   

合浦珠母贝基因组微卫星富集文库的构建与分析     

油九菊  范嗣刚  黄桂菊  郝博飞  陈飞飞  喻达辉 《海洋科学》2015,39(10):8-14

采用生物素标记的(AC)_(15)探针和磁珠富集法构建合浦珠母贝(Pinctada fucata)基因组DNA微卫星富集文库。随机挑选2097个克隆进行筛选,得到483个候选克隆(23.03%),对其中135个阳性克隆测序分析发现122个克隆含有微卫星重复单元(90.37%)。进一步通过序列比对,最终得到65个具有特异微卫星序列的阳性克隆(53.28%),其中包含85个微卫星DNA结构域,其中完美型(perfect)70个,占82.36%;非完美型(imperfect)7个,占8.24%;混合型(compound)8个,占9.41%,重复次数主要分布在5~20(95.74%),平均重复次数为7.83,(AC/GT)n重复所占比例最高(75.53%)。基于微卫星两端的侧翼序列,利用Primer Premier 5.0设计引物,获得11对具有多态性的微卫星引物。本研究为开展合浦珠母贝分子育种及资源评价分析提供了基础资料。  相似文献   

盐度和pH对合浦珠母贝（Pinctada fucata）耗氧率和排氨率的影响   总被引：2，自引：0，他引：2  

刘建业  喻达辉  李金碧 《海洋与湖沼》2011,42(4):603-607

采用实验生态学方法,对3种规格的合浦珠母贝在不同盐度和pH下的耗氧率和排氨率进行了研究。结果表明,盐度对合浦珠母贝的耗氧率和排氨率有极显著影响（P〈0．01）。在盐度21—36的范围内,耗氧率和排氨率均随盐度的升高而降低,且单位体重耗氧率、排氨率随其个体的增大而变小;pH对合浦珠母贝的耗氧率有极显著影响（P〈0．01）...  相似文献   

合浦珠母贝精子激活机制的初步研究   总被引：2，自引：0，他引：2  

喻达辉  江世贵 《热带海洋》1999,18(2):5-10

分别用氨海水、不同盐度的氨海水、Ｎａ＾＋、Ｋ＾＋,Ｃａ＾２＋、Ｍｇ＾２＋的氯化物及Ｎａ＾＋,Ｋ＾＋的硝酸盐和ＮＨ４Ｃｌ,ＮＨ４ＮＯ３,（ＮＨ４）２ＳＯ４和（ＮＨ４）２ＣＯ４为激活剂,对人工解剖获得的合浦珠母贝Ｐｉｎｃｔａｄａ ｍａｒｔｅｎｓｉｉ精子进行激活,实验结果表明,合浦珠母贝业郛的细胞膜离子通道这闸门控制类型,其激活途径主要是通过ＮＨ４或ＨＣＧ类激素开启该闸门,发生Ｎａ和Ｃｌ的交换,使精子细  相似文献   

南海海洋农牧化研究的现状与研究设想   总被引：5，自引：0，他引：5  

黄巧珠  喻达辉 《广东海洋大学学报》1999,19(2):76-80

  相似文献   

pH对4种鲷鱼精子活力的影响     

黄巧珠  区又君  喻达辉  李加儿  江世贵 《广东海洋大学学报》1999,(3)

用不同 ｐＨ 的海水对真鲷（Ｐａｇｒｏｓｏｍ ｕｓ ｍ ａｊｏｒ）、平鲷（Ｒｈａｂｄｏｓａｒｇｕｓ ｓａｒｂａ）、黑鲷（Ｓｐａｒｕｓｍ ａｃｒｏｃｅｐｈａｌｕｓ）和黄鳍鲷（Ｓ．ｌａｔｕｓ）精子进行激活实验。结果表明,四种鲷鱼精子对ｐＨ 的适应范围较广,其最适ｐＨ 值与其生态习性相关。  相似文献   

基因转移技术简介     

喻达辉 《广东海洋大学学报》2000,20(3):80-86

  相似文献   

合浦珠母贝精子的实验生物学初步研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

喻达辉  陈竞春  苏天风  朱海  江世贵 《热带海洋学报》1998,(1)

用光镜观测了海水盐度、pH、温度和激素对合浦珠母口Pinctadafucata精子的激活及运动情况的影响。结果表明,在pH为8．0的自然海水（盐度为30）中,精子不被激活,在pH为9．0—11．5的范围内80％以上的精子能被激活,其中在pH为10．0时的激活率最高,精子活力最强。在pH为9．5的条件下,观察了精子在盐度为10—45范围内的精子活力。在盐度为15—45范围内精子都能被激活,其中在盐度为30左右激活率最高,精子活力最强。同时发现,氢氧化钠没有激活作用。合浦珠母贝精子对温度的适应性很强,在15—40℃内精子激活率都很高。绒毛膜促性腺激素（HCG）也可激活,在浓度为500IU·ml~-1时激活率最高,而促黄体素释放激素A_2（LHRH-A_2）则没有激活作用。  相似文献   

盐度胁迫对香港牡蛎部分生化指标的影响   总被引：1，自引：0，他引：1  

佘智彩  贾真  彭业韶  喻达辉 《海洋科学》2019,43(3):40-45

为探究盐度胁迫下香港牡蛎(Crassostrea hongkongensis)生化指标的变化规律,了解盐度适应过程中牡蛎的代谢机制,本研究以盐度0、8、16、32、40为胁迫盐度,以正常海水(盐度24)为对照,开展香港牡蛎对盐度胁迫的响应研究。结果显示,各实验盐度组糖原含量在盐度胁迫0～8 h内下降,且盐度胁迫幅度越大糖原含量降幅越大,胁迫8 h后则无明显的变化规律。腺苷酸激活的蛋白激酶(AMPK)、组蛋白/蛋白去乙酰化酶(SIRT1)和Na~+/K~+-ATP酶活力的变化规律相似:在0～8 h内,各实验组酶活力均急剧下降(SIRT1上升);8～48 h内,酶活力上升;48～120 h内,酶活力逐渐趋于平稳状态,总体表现为盐度越高,酶活力越强,并与胁迫前有明显差异,且盐度胁迫幅度越高,差异越明显。总抗氧化能力(T-AOC)总体表现出高盐胁迫下随时间的增加而升高,低盐胁迫下随时间的增加而降低,且盐度胁迫幅度越大,T-AOC活力的变化幅度越大。实验结果初步表明,香港牡蛎糖原含量与渗透压调节存在一定的关系,AMPK、SIRT1、Na~+/K~+-ATP酶活力及T-AOC均与渗透压调节密切相关,且在高盐胁迫下随时间的增加而升高,低盐胁迫下随时间的增加而降低。  相似文献   

合浦珠母贝精子激活机制的初步研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

喻达辉  江世贵  陈竞春  苏天凤 《热带海洋学报》1999,18(2)

分别用氨海水、不同盐度的氨海水、Na~ ,K~ ,Ca~2 ,Mg~(2 )的氯化物及Na~ ,K~ 的硝酸盐和NH_4Cl,NH_4Cl,NH_4NO_3,（NH_4）_2SO_4和（NH_4）_2CO_4为激活剂,对人工解剖获得的合浦珠母贝Pinctadamartensii精子进行激活。实验结果表明,合浦珠母贝精子的细胞膜离子通道为闸门控制类型。其激活途径主要是通过NH~ _4或HCG类激素开启该闸门,发生Na~ 和Cl~-的交换,使精于细胞获得或释放能量而激活。pH太低则会影响它们的激活作用。  相似文献