近江牡蛎i-型溶菌酶基因分析及温度对基因表达的影响   总被引：2，自引：0，他引：2  

许友卿  吴卫君  丁兆坤  潘志忠  何为  吴铁军  陈秀荔  李咏梅  蒋伟明 《热带海洋学报》2012,(6):69-75

溶菌酶是机体先天免疫系统中一个重要的效应分子,参与机体多种免疫反应。本研究克隆了近江牡蛎Crassostrea hongkongensis i-型溶菌酶的保守cDNA序列,并探讨其在不同组织的表达、不同温度对其表达的影响。结果表明,近江牡蛎i-型溶菌酶保守cDNA序列长634 bp,包含一个长420 bp开放阅读框,编码139个氨基酸;其蛋白序列具有典型的i-型溶菌酶特征,包含特定氨基酸残基序列CL(E/L/R/H)C(I/M)C、部分高度保守序列SCG(P/Y)FQI和酶活性中心位点(Glu34、Asp45、Ser48、Trp61);另外,还发现一个新的氨基酸保守序列HNGGPRGC。i-型溶菌酶基因在近江牡蛎消化腺、肌肉、鳃、外套膜、唇瓣等5种组织的表达量以消化腺最高,鳃次之,肌肉最低。i-型溶菌酶基因的表达与温度相关,水温20—25℃,其表达量比较稳定;水温6℃或13℃,表达量都呈下降趋势;在27℃,表达量在整个实验过程都维持一个相对高的水平;在34℃,其表达量在第12小时达到最高,第48小时后急剧下降;表明温度可影响i-型溶菌酶基因表达,从而调节其免疫功能和对外环境的应激反应。  相似文献   

克隆选择算法的线状要素图形简化模型     

马潇雅  郭庆胜 《地球信息科学学报》2012,14(6):698-703

 线状要素作为占据地图图形80%以上的地图目标,其自动概括是制图综合的一个重要内容。线状要素图形简化是其制图综合的一个主要手段。本研究以克隆选择算法的基本原理,分析对线状要素数据进行压缩时图形简化的约束条件,顾及线状要素的几何精度和形状特征,设计相应的编码机制、变异机制和亲和度函数,提出一种新的线状要素图形自动简化模型。同时,结合不可行解修复机制,提高图形简化的精度。最后,将该模型与道格拉斯算法、遗传算法的简化结果作对比,实验表明,在相同的几何精度内,文中提出的线状要素图形简化模型,在保持线状要素图形形状方面表现更佳。  相似文献   

中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)血淋巴中凝血蛋白的分离纯化、鉴定及 cDNA 片段克隆、 组织表达谱分析     

王宝杰  刘梅  蒋克勇  张国范  王雷 《海洋与湖沼》2012,43(1):154-159

采用层析技术、N末端氨基酸序列分析及同源基因克隆等技术对中国对虾中国对虾血淋巴中的凝血蛋白(CP)进行了研究。结果表明,纯化的CP约为380kDa,其亚基的分子量约为190kDa,说明该蛋白是由两个相同的亚基组成的同源二聚体;中国对虾CP的N末端氨基酸序列与凡纳滨对虾、保罗美对虾具有100%的相似性,与其它对虾的也具有很高的相似性;获得了CP基因518bp的cDNA片段,分析表明该基因序列与其它虾类CP基因序列的具有很高的同源性;CP基因的组织表达谱分析发现心脏和表皮是该基因主要的合成表达部位。  相似文献   

青虾(Macrobrachium nipponense)Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制因子基因全长cDNA的克隆及表达   总被引：2，自引：0，他引：2  

张响  乔慧  傅洪拓  吴滟  龚永生  蒋速飞  熊贻伟 《海洋与湖沼》2012,43(6):1292-1298

采用RACE技术,首次从青虾精巢中克隆得到KSPI基因全长cDNA。青虾KSPI基因cDNA全长890bp,包括80bp的5′UTR,546bp的3′UTR和编码87个氨基酸残基的264bp开放阅读框。预测蛋白包含1个保守的Kazal型结构域(CⅠX5CⅡX(6)VCⅢX(5)TYXNXCⅣX6CⅤX12CⅥ),结构域中P1活性位点为苏氨酸残基。应用MEGA4.1软件对青虾与已报道的虾类共15种KSPI氨基酸序列进行系统进化分析,结果表明,青虾KSPI与同样来源于精巢的罗氏沼虾KSPI进化关系最近聚为一支,其它虾类来源于肝胰腺和血细胞的KSPI聚为另外两支。采用定量PCR技术分析其组织分布,结果显示,KSPI基因在精巢、心脏和卵巢中有较高表达,其中精巢表达水平极高,并与心脏和卵巢表达差异分别达到显著(P<0.05)和极显著(P<0.01)水平,其它组织表达较弱。  相似文献   

曼氏无针乌贼(Sepiella maindroni)ALSM基因的克隆及序列分析     

周超  郭宝英  刘慧慧  吴常文 《海洋与湖沼》2012,43(4):837-844

采用RT-PCR和RACE技术分离、克隆得到曼氏无针乌贼肝脏ALSM(Astacin-like squid metalloprotease)基因。序列分析表明,ALSM cDNA序列全长1418bp,其包括53bp的5’端非翻译区,1290bp阅读框以及含有poly(A)信号AATAAA的75bp3’端非翻译区,阅读框编码429个氨基酸残基。推导蛋白的相对分子质量为48916.31Da,等电点为7.978。ALSM氨基酸序列的同源性分析显示,不同进化地位动物的ALSM氨基酸序列都具有较高的同源性。系统发生树分析发现,曼氏无针乌贼ALSM首先与金乌贼、莱氏拟乌贼、长枪乌贼及太平洋褶柔鱼的ALSM-Ⅰ亚型聚类,再与其ALSM-Ⅱ及ALSM-Ⅲ亚型聚类。生物信息学分析表明,ALSM编码的蛋白为一种亲水性的分泌蛋白。这些结果对进一步研究ALSM的结构与功能以及从基因调控角度探索曼氏无针乌贼在养殖条件下生物学特性变化机理具有重要意义。  相似文献   

鲈鱼FBP基因的克隆和表达分析          下载免费PDF全文

童彩环  钱云霞  郑伟贤  韩柳 《海洋学研究》2012,30(4):78-83

果糖-1,6-二 磷酸酶(fructose-1,6-bisphosphatase,FBP, EC 3. 1.3.11)可催化果糖-1,6-二磷酸水解成果糖-6-磷酸和无机磷酸盐,是糖异生途径中的关键酶之一。本研究运用SMART RACE技术从鲈鱼Lateolabrax japonicus肝脏中分离克隆了FBP基因的全长cDNA序列,该基因全长1 357 bp,其中5’非翻译区和3’非翻译区分别为42 bp和301 bp,开放阅读框为1 014 bp,共编码337个氨基酸。蛋白质分子量约为36.7 kD,理论pI为6.90。氨基酸序列分析表明,鲈鱼FBP与其它动物的肝脏型FBP相似性很高,与裸盖鱼、彩虹胡瓜鱼、斑马鱼、异育银鲫和大西洋鲑的肝脏型FBP的同源性分别为94.3%,90. 8%,89.3%,88.1%和84.1%。系统发育分析显示,鲈鱼FBP与其它鱼类的肝脏型FBP成簇后再与哺乳动物的肝脏型FBP聚成一支,然后才与哺乳动物的肌肉型FBP汇成簇。同时用RT-PCR分析了FBP基因在鲈鱼肝脏、肌肉、心脏、眼、肠、肾脏、脂肪、脾脏、鳃和大脑等10个组织的表达,结果表明FBP仅在肝脏、肾脏和肠这3个组织中有较高的表达,与糖异生发生组织基本一致,因此推测该FBP属于肝脏型。  相似文献   

Molecular Cloning and Expression ofPoIR2, a Novel Gene Involved in Immune Response in Japanese Flounder （Paralichthys olivaceus）     

Shuo Li  Chunmei Li  Xubo Wang  Yanan Wang  Zhipeng Liu  Teng Zhai  Quanqi Zhang 《中国海洋大学学报(英文版)》2010,9(1):59-64

A novel immune-related gene was expressed in Japanese flounder (Paralichthys olivaceus) injected with Vibrio anguillarum. The complete cDNA contained a 169 bp 5’UTR, a 336 bp open reading frame (ORF) encoding 111 amino acids and a 556bp 3’UTR. Six exons and five introns were identified in the PoIR2 gene. Blastp similarity comparison showed its encoding protein had 50% similarity to Danio rerio neuromedin S (NMS), but further alignment indicated they did not have NMS C-terminal conservational signature domain. So it was not defined as an NMS homologue. Protein structure analysis indicated it had a 26aa signal peptide and was a secretory pathway protein. RT-PCR demonstrated that the expression of PoIR2 was quickly induced and drastically increased in liver, kidney, spleen, gills, intestine, heart, and skeletal muscle after infected with V. anguillarum. These results indicated that the PoIR2 might play some important role in Japanese flounder immune response system. This gene was named PoIR2 (P.olivaceus immune-related gene 2, GenBank accession number: EU224372). The mature PoIR2 peptide was expressed in BL21(DE3) pLysS using pET-32a(+) vector and a great part of the recombinant mature peptide existed as soluble type.  相似文献   

黄鳍鲷生长激素cDNA的分子克隆和序列分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

张殿昌  江世贵等 《广东海洋大学学报》2002,22(4):62-65

  相似文献   

Development of an enzyme-linked immunosorbent     

Renyan LIU Bingjun CHEN Yubo LIANG Daoyan XU Bing LIANG 《中国地球化学学报》2006,25(B08):217-218

The development of immunodetection method of 2, 2-Bis （4-chlorophenyl） acetic acid （DDA）, the decomposition product of organochlorine insecticide DDT, was performed in this study. DDA was conjugated with bovine serum albumin （BSA） and ovualbumin （OVA） for the use of immunogen to produce antibodies and coating ligands to measure the titration level of antibody and the displacement of free analytes. Evaluation of the antisera by antibody capture assay showed that the antibody titer of antisera raised against DDA-OVA was higher than 1 ： 80000. Using 5#PAb, an indirect competitive enzyme immunoassay was developed for measurement of DDA. The working range for quantitative measurement of DDA and the quantitative limit for DDA were estimated to be 2.5-2000 ng/mL and 2.5 ng/mL for seawater, 12.5 ng/g for shellfish, respectively.  相似文献   

绿鳍马面鲀ERα 基因部分cDNA 序列克隆及其表达研究     

赵梅琳  温海深  张冬茜  何峰  李吉方 《海洋科学》2014,38(5):81-88

雌二醇是与生殖相关的重要的性类固醇激素之一,它与雌激素受体相结合作用于靶器官从而发挥生物活性。为进一步阐明绿鳍马面鲀雌激素受体α(Estrogen receptorα,ERα)的生理功能提供了科学依据,同时也为其人工繁育提供一定的理论基础,作者利用简并引物扩增得到绿鳍马面鲀(Navodon septentrionalis)ERα部分cDNA序列,共1410bp,编码470个氨基酸。通过半定量RT-PCR技术分别检测了其在雌鱼、雄鱼中各组织的表达情况,结果表明ERα在雌鱼体内的表达较雄鱼更广泛,在雌鱼垂体、心脏和卵巢的表达量最高,在雄鱼的垂体、肝脏、肾脏、精巢也有较高的表达。采用实时定量RT-PCR技术,分析了ERα在性腺中的周年表达情况,卵巢中ERαmRNA在5月表达量最高,7月最低:精巢中在5月最低,9月最高。该项研究表明ERα与绿鳍马面鲀生殖周期存在密切关联,提示在性腺发育过程中发挥一定作用。  相似文献