对虾WSSV人工感染螯虾及其检测   总被引：13，自引：0，他引：13  

莫照兰  雷质文  杨冰  黄倢  张培军 《海洋科学》2002,26(3):43-46

用对虾白斑综合症病毒（WSSV）人工感染淡水克氏原螯虾（Procambarus clarkii),感染组螯虾3-6d内全部死亡,核酸探针点杂交两次检测感染螯虾的鳃、胃、血淋巴,阳性检出率分别为92%（92%）,89%（86%）,81%（75%）,对照为11%（3%）,3%（5%）,0（0）;光镜下可观察到感染螯虾的胃、鳃组织的靶细胞核肿大,嗜酸性着染,电镜下病变组织细胞核可见形态大小与WSSV一致的病毒粒子;病毒核酸原位杂交两次检测感染螯虾的胃、鳃、阳性检出率均为100%,对照阳性检出率均为0。结果表明：对虾WSSV可感染淡水克氏原螯虾,病毒核酸原位杂交是一种敏感特异的病毒检测方法。  相似文献   

套式PCR检测斑节对虾白斑症病毒(WSSV)   总被引：1，自引：0，他引：1  

谢数涛  何建国  杨晓明  吕玲  江静波 《中国海洋大学学报(自然科学版)》2001,31(2):220-224

解剖患白斑症斑节对虾的鳃组织 ,制备成不同稀释倍数的模板 ,对其进行白斑症病毒 (WSSV)的 PCR扩增 ,结果显示所建立的套式 PCR的灵敏度大约为一步 PCR的 10 4 倍 ;对感染病毒后不同时期的斑节对虾进行 PCR检测 ,发现感染早期经一步 PCR检测为 WSSV阴性的样品 ,套式 PCR的检测结果为阳性 ;对发病虾塘中的几种甲壳类动物进行 PCR检测 ,发现经一步 PCR检测为阴性的长臂虾、秉氏厚蟹和褶痕相手蟹等宿主 ,套式 PCR的检测结果为阳性。表明所建立的 WSSV套式 PCR检测法较普通的一步 PCR有更大的应用价值和意义  相似文献   

白斑综合症病毒(WSSV)的实验室检测技术   总被引：2，自引：0，他引：2  

雷质文  黄倢  寇运同  鲍蕾  林修光  战文斌 《海洋湖沼通报》2002,(2):52-56

主要依据90年代关于对虾病毒病的资料，就病原学检测、血清学检测以及基因组检测技术在WSSV感染检测的应用进行了比较系统的综述。  相似文献   

中国明对虾caspase 基因的克隆与表达分析   总被引：2，自引：0，他引：2  

宋光年  金松君  张继泉  相建海 《海洋科学》2010,34(12):1-7

利用细胞凋亡来清除多细胞器官受损伤或有害的细胞,为动物发育过程中保持机体平衡起到关键作用。为了研究细胞凋亡在甲壳类动物应对病毒感染后所起到的作用,作者利用同源克隆技术获得了中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)caspase基因(FcCasp)的cDNA序列,并分析了该基因在对虾受到白斑综合症病毒(white spot syndrome virus,简称WSSV)刺激后的表达变化规律。结果表明,该基因的cDNA含有954个核苷酸,编码317个氨基酸,具有caspase家族典型的QACRG五肽蛋白酶活性位点(190-194氨基酸)。对注射了WSSV的中国明对虾FcCasp的表达进行分析,在5个时间点取其肝胰脏样本,经real-time PCR检测发现,WSSV刺激3 h后,对虾肝胰脏中FcCasp的表达呈现显著性上调,说明FcCasp的表达与WSSV感染密切相关,提示FcCasp基因与细胞凋亡相关。  相似文献   

对虾白斑综合征病毒VP28基因在大肠杆菌中的表达     

许雅香  朱玉芳  许梓荣  沈卫德  杜华华 《海洋科学》2005,29(11):31-33

在已构建重组质粒pGEM—vp28的基础上,通过NcoⅠ,HindⅢ双酶切质粒pGEM—vp28和表达载体质粒pET-30a,分别获得携带限制性内切酶粘性末端的vp28基因片段和表达载体质粒片段,两片段经T4DNA连接酶连接获得了重组表达质粒pET30a—vp28,将此重组质粒导入表达宿主菌Escherichia coli BL21中,用IFIG诱导表达4h后,其表达产物在SDS—PAGE和Western blot中的显示的特异性条带大小约27ku,与预期的大小相近。  相似文献   

用ELISA检测中国对虾的白斑综合症病毒(WSSV)   总被引：8，自引：0，他引：8  

汪岷  戴继勋  张士璀  包振民  李红岩  王馗 《海洋学报》2000,22(2):132-136

随着对虾养殖业的发展,对虾疾病越来越受到人们的关注,尤其对虾病毒性疾病已成为各国学者研究的焦点之一。由于没有有效的抗病毒药物,早期预防就显得更为重要,而这依赖于快速、敏感的诊断方法。酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)是1972年由Engvall等在酶免疫试验(enzyme immunoassay,EIA)的基础上发展起来的。目前,在病毒等疾病有关的抗原抗体系统的定性或定量测定领域内已被广泛应用。本文通过病毒纯化,免疫新西兰兔,获得多克隆抗血清,并对抗体进行纯化、酶标记,建立了双抗体夹心直接ELISA的检测方法。  相似文献   

Effects of different enzymatic hydrolysis methods on the bioactivity of peptidoglycan in Litopenaeus vannamei     

宋晓玲  张悦  韦嵩  黄倢 《中国海洋湖沼学报》2013,31(2):374-383

The effects of different hydrolysis methods on peptidoglycan(PG) were assessed in terms of their impact on the innate immunity and disease resistance of Pacific white shrimp,Litopenaeus vannamei.PG derived from Bifidobacterium thermophilum was prepared in the laboratory and processed with lysozyme and protease under varying conditions to produce several different PG preparations.A standard shrimp feed was mixed with 0.05% PG preparations to produce a number of experimental diets for shrimp.The composition,concentration,and molecular weight ranges of the soluble PG were analyzed.Serum phenoloxidase and acid phosphatase activity in the shrimp were determined on Days 6-31 of the experiment.The protective activity of the PG preparations was evaluated by exposing shrimp to white spot syndrome virus(WSSV).Data on the composition of the PG preparations indicated that preparations hydrolyzed with lysozyme for 72 h had more low-molecular-weight PG than those treated for 24 h,and hydrolysis by protease enhanced efficiency of hydrolysis compared to lysozyme.SDS-PAGE showed changes in the molecular weight of the soluble PG produced by the different hydrolysis methods.Measurements of serum phenoloxidase and acid phosphatase activity levels in the shrimp indicated that the PG preparations processed with enzymes were superior to the preparation which had not undergone hydrolysis in enhancing the activity of the two serum enzymes.In addition,the preparation containing more low-molecular-weight PG enhanced the resistance of the shrimp to WSSV,whereas no increased resistance was observed for preparations containing less low-molecular-weight PG.These findings suggest that the immunity-enhancing activity of PG is related to its molecular weight and that increasing the quantity of low-molecular-weight PG can fortify the effect of immunity enhancement.  相似文献   

白斑综合症病毒囊膜蛋白VP28单链抗体的酵母表面展示及其抗病毒特性的初步研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

施泓  阮灵伟 《台湾海峡》2012,31(3):368-374

白斑综合症病毒(white spot syndrome virus,WSSV)是对虾养殖业中危害最大的病原微生物之一,对对虾养殖业造成了巨大的经济损失,但目前尚无有效防治手段.本研究从WSSV囊膜蛋白VP28免疫的小鼠细胞中分别扩增到重链可变区基因和轻链可变区基因,大小为351 bp和342 bp.两基因序列通过Linker序列连接后,构建到酵母表面载体pYD1中,得到重组质粒pYD1-vp28scfv.将该重组质粒在酿酒酵母EBY100中诱导表达,通过免疫荧光实验发现,重组蛋白VP28scFv在酿酒酵母EBY100表面实现展示.进一步通过结合实验表明该展示蛋白具有WSSV的结合活性.本研究在结合酿酒酵母可作为饲料添加剂的特性基础上,对WSSV囊膜蛋白VP28单链抗体的抗病毒特性进行了应用,从而为WSSV的防治提供了新思路.  相似文献   

A new ALF from Litopenaeus vannamei and its SNPs related to WSSV resistance     

刘敬文  于洋  李富花  张晓军  相建海 《中国海洋湖沼学报》2014,32(6):1232-1247

  相似文献   

凡纳滨对虾4种血蓝蛋白亚型的特征分析     

徐景祥  阮灵伟  李桢  余小曼  李色东  施泓  徐洵 《海洋学报(英文版)》2015,34(2):36-44

血蓝蛋白是对虾体内的氧运输蛋白,占血浆中蛋白含量的95%以上.研究表明,它参与了许多生理功能,包括蛋白储运,渗透压调节,蜕皮过程以及骨架形成等等.近年来的研究表明,血蓝蛋白还参与了对虾的先天性免疫反应,具有酚氧化酶,抗菌肽、抗病毒等相关生物活性.本研究从凡纳滨对虾中克隆获得了血蓝蛋白L亚基LvHcL,并对其基因组织结构进行了分析.该基因具有丰富的多态性,含有多个SNP位点.研究中发现该基因亚基至少存在4种亚型,其中一种亚型缺失第二个外显子,仅含有2个外显子.对各个亚型的转录水平分析表明,抗病对虾在病毒感染刺激下,各个亚型的转录水平均会被诱导提高.而普通对虾在病毒感染刺激下,各个亚型的转录水平则被抑制.研究结果表明,血蓝蛋白参与了对虾的抗病毒免疫反应.这些结果不仅有助于深入了解对虾血蓝蛋白的免疫学特点,也有助于促进对无脊椎动物抗病毒免疫机制的认识.  相似文献