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1.
三种鳜鱼(Siniperca)生长激素基因的克隆及序列比较   总被引:4,自引:1,他引:3  
采用长片段PCR及T-A克隆技术,从基因组DNA成功克隆翘嘴鳜、大眼鳜和斑鳜含完整阅读框的生长激素(Growth Hormone,GH)基因DNA全序列,翘嘴鳜序列全长5548bp,大眼鳜序列全长5483bp,斑鳜序列全长5789bp,提交GenBank数据库后获得注册号分别为EF205280、EF205281、EF441623。三种鳜鱼GH基因均由六个外显子、五个内含子组成;均在第二内含子中相同位置发现“AG”微卫星重复序列;均在第三内含子末端发现一处剪接位点序列的相邻重复。三种GH基因在第一、二、三内含子处存在碱基长度差异。序列间差异主要表现为邻近序列的重复、DNA片段的缺失或插入及单核苷酸多态性(SNP)。翘嘴鳜与大眼鳜GH基因编码氨基酸序列完全相同,两者与斑鳜序列在第150位有一个氨基酸残基差异。采用MEGA软件对三种鳜鱼GH基因DNA序列及编码氨基酸序列分别构建UPGMA系统发育树,结果表明,在系统发育中,斑鳜可能最先从共有祖先物种中分化出来。  相似文献
2.
鳜(Siniperca chuatsi)、大眼鳜(Siniperca kneri)、斑鳜(Siniperca schezeri)为鳜属中3种主要经济鱼类,具有较近的亲缘关系和相似的生活习性,但生长性状差异较大.为探索3种鳜鱼生长差异与基因差异间联系,以野生群体为材料,采用PCR扩增、电泳及测序等方法,对生长发育相关基因生长激素(GH)基因进行了多态性检测与分析.在第一内含子、第二内含子前段、第二内含子中段微卫星序列及第三内含子中均检测到多态性.各区域共检测到25种长度类型,其中4种为鳜与大眼鳜共有长度类型,3种为鳜、大眼鳜与斑鳜共有长度类型,其余18种为各物种特有长度类型.各区域长度类型共组成14种单倍型,无种间共有单倍型.序列长度差异主要由重复序列及DNA片段的插入或缺失形成.在第1内含子3'端-6位与第3内含子5'端+16位各发现一处靠近剪接位点的序列差异.根据多态性检测结果构建系统发育树,鳜与大眼鳜先聚为一枝.本研究可为进一步确认鳜鱼GH基因差异与生长性状间联系,并利用基因差异进行鳜鱼种质资源保护及分子育种奠定基础.  相似文献
3.
本文探讨牛磺酸在鲫鱼生长、肠道细胞增殖分化以及蛋白质消化吸收相关基因的表达等方 面的作用。试验以480 尾[初始体质量(29.07±0.19)g]鲫鱼(Carassius auratus)为研究对象, 随机分成6 组, 每组设定4 个重复, 每个重复有鱼20 尾。鲫鱼基础饲料中添加的牛磺酸的剂量分别是0.0、1.0、 2.5、4.0、6.0 以及9.0 g/kg, 以0.0 g/kg 添加组为对照组, 试验持续8 周。结果表明: (1) 牛磺酸对鲫 鱼有促生长作用, 6.0 g/kg 添加组的鱼的增重率, 特定生长率, 蛋白质效率, 饲料系数等都显著高于 对照组(P<0.05).(2) 牛磺酸能促进肠绒毛的生长, 降低隐窝深度。(3) 牛磺酸提高了鲫鱼血清中T3、 T4 的含量, 添加6.0 g/kg 时显著高于对照组, 且此时血清尿素氮浓度显著低于对照组和其它处理组 (P<0.05).(4) 氨肽酶N(APN)、小肽转运蛋白(PepT1)、基因系尾型同源盒基因(CDX2)、L-氨基酸转 运载体蛋白(LAT2)等基因的相对表达量随牛磺酸剂量增加而上调, 6.0 g/kg 时显著高于对照组和其它 实验组(P<0.05).由此可见, 适量添加牛磺酸能影响鲫鱼生长、肠道细胞增殖及蛋白消化吸收相关基 因的表达。  相似文献
4.
根据自行分离的翘嘴鳜微卫星序列(GenBank登录号:DQ789247-DQ789306)设计并合成20对微卫星引物,对鳜属鱼类4个物种即翘嘴鳜、大眼鳜、斑鳜和暗鳜共80个个体进行了物种鉴定分析.结果表明,20对微卫星引物共检测到293个等位基因,大小在80-301bp之间.它们在4个物种中的多态性位点百分率分别为90%、75%、85%和85%,累积个体识别率和非父排除率均达到0.9999,属于高识别力的微卫星遗传标记系统,可以用来进行鳜属鱼类物种的鉴定分析.UPGMA聚类分析表明,翘嘴鳜与暗鳜之间亲缘关系最近,可归属于第Ⅰ类;大眼鳜为第Ⅱ类;斑鳜独自为第Ⅲ类.本研究可为鳜属鱼类的分类及进化关系、群体遗传结构分析等提供理论支持,为野生原种鳜类遗传多样性的监测和评估以及鳜类优良的种质资源得到合理保护和开发利用奠定基础.  相似文献
5.
采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术, 从鳜脑垂体总RNA 中扩增生长激素(GH)成熟肽基因, 将成熟生长激素的cDNA 定向克隆到表达载体pET-32a(+), 并转入大肠杆菌BL21(DE3)中。结果表明, 鳜生长激素(GH)基因含开放阅读框(ORF)615 个核苷酸, 编码204 个氨基酸, 蛋白分子量为23kDa, 等电点为7.07, 其中酸性氨基酸占10.78%, 碱性氨基酸占12.74%, 疏水氨基酸为占44.12%, 极性氨基酸占32.35%。在IPTG 终浓度1.0mmol/L、温度37℃和培养时间4h 的最佳诱导表达条件下, 鳜生长激素基因(GH)在大肠杆菌中获得高效表达, 重组菌体裂解物经SDS-PAGE 可检测到分子量约为43kDa 的鳜生长激素与硫氧还蛋白(Thioredoxni, Trx)融合蛋白, 其表达量约占菌体总蛋白58%。Western 印迹分析也证实含6×His 标签的重组融合蛋白能够很好地与抗6×His 单抗发生反应。本研究为下一步鳜生长激素基因(GH)的生物学功能及应用奠定了基础。  相似文献
6.
采用 RT-PCR 和 RACE 技术克隆鲫鱼 slc7A8 基因的全长 cDNA 序列, 对基因序列用生物软件对基因进行生物信息分析, 用 Real-time PCR 方法检测基因在组织中的 mRNA 表达丰度。结果表明, 鲫鱼 slc7A8cDNA 全长为 2709bp, 包含 195bp 的 5′UCR 序列, 921bp 的 3′UCR 序列, 1593bp 开放阅读框, 编码 530 个氨基酸序列; 鲫鱼与斑马鱼基因同源性和编码氨基酸同源性分别为 88.9%和95.5%, 而与其他动物分别在 70.1%—74.8%和 80.6%—82.1%之间; 预测编码蛋白的分子量为57719.84, 等电点为 4.8, 对其结构预测显示该蛋白具有与哺乳动物十分相似的 12 个螺旋跨膜结构, 跨膜区氨基酸高度保守, 不同动物间的同源性都在 92.2%以上; Real-time PCR 检测鲫鱼组织中的mRNA 表达丰度高低顺序为前肠、中肠、脑、后肠、肌肉、肾、鳃、心、肝脏。  相似文献
7.
目的:对胃复方进行急性毒性实验研究,观察其安全性。方法:将实验小鼠按体质量随机分为2组,采用最大给药量法测定小鼠口服胃复方的最大耐受量,给药组24h内2次以最大浓度、最大体积的中药胃复方给予小鼠灌胃,对照组小鼠灌服等剂量蒸馏水,观察记录2组小鼠一般情况及死亡情况,对主要脏器进行病理组织学检测。结果:给药组小鼠一般情况良好,无1例死亡。与对照组比较,体质量变化差异无统计学意义(P>0.05);主要脏器病理组织学检测未见明显异常;最大给药量为221.7g生药/kg,相当于60kg成人临床推荐剂量的127倍。结论:胃复方无明显毒性,在规定剂量下用药是安全可靠的。  相似文献
8.
目的:考察不同灭菌方法用于天麻首乌片原生药粉的灭菌效果及灭菌对目标成分天麻素、阿魏酸及二苯乙烯苷含量的影响。方法:分别采用湿热、微波、75%乙醇流通蒸汽、60Co辐照4种灭菌方法对天麻首乌片中原生药粉进行灭菌处理,测定灭菌前后原生药粉的微生物限度;采用高效液相色谱法测定灭菌前后天麻素、阿魏酸和二苯乙烯苷的含量。结果:微生物限度检测结果显示,上述4种灭菌方法的灭菌率依次分别为99.21%、95.24%、77.78%、99.21%;目标成分检测结果表明,60Co辐照灭菌对天麻素、阿魏酸和二苯乙烯苷含量影响最小,其次是75%乙醇流通蒸汽灭菌,而微波和湿热2种灭菌方法对天麻素、阿魏酸和二苯乙烯苷含量的影响最大。结论:综合灭菌效果及对有效成分的影响,天麻首乌片原生药粉灭菌方法建议选用60Co辐照灭菌。  相似文献
9.
本研究以鲫鱼(Carassius auratus)为研究对象,采用巢式PCR和RACE技术克隆鲫鱼半胱亚磺酸脱酸酶CSAD基因c DNA序列,并且利用实时荧光定量PCR检测了CSAD m RNA在鲫鱼不同组织和昼夜节律中的相对表达水平,同时还研究了牛磺酸对鲫鱼肠道CSAD m RNA表达的影响。结果表明:(1)鲫鱼CSAD基因c DNA序列包含186bp的5?UTR序列,675bp的3?UTR序列,1503bp开放阅读框,编码500个氨基酸。同源性分析表明,鲫鱼和鲤鱼的同源性为97.2%。系统发育分析表明,鲫鱼与鲤鱼之间的亲缘关系最接近,置信度为100。经预测,其编码的蛋白质的分子量和等电点分别为56.82k Da和5.77;(2)Ca CSAD m RNA在肌肉、心脏、肠道及肝脏中的表达水平较高,在脑和鳃组织中的相对表达量较低;(3)鲫鱼肠道CSAD m RNA的相对表达量在6:00am点时最高,9:00pm点时相对表达量最低;(4)鲫鱼CSAD的相对表达丰度随着牛磺酸添加量的增加而逐渐下降。本研究结果不仅有助于理解鲫鱼CSAD基因的分子特征,同时将为进一步研究鱼类CSAD营养调控功能提供理论依据。  相似文献
10.
海洋无人自主观测装备作为海洋观探测的一种不可替代的高科技先进装备和新兴装备,是海洋观探测装备摇篮中的新生命、新领域的开拓者。基于海洋无人观测装备提高海洋移动观测能力是未来构建立体、连续、实时水下观测网络的重要技术手段,将会对未来海洋观探测的方式产生深远影响。基于国内外海洋无人观测装备发展与应用现状分析,对我国海洋无人观测装备发展的主要问题和差距进行了思考,并对海洋无人观测装备未来的发展应用进行了展望。  相似文献
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