Isolation, cloning and sequencing of AFLP markers related to disease-resistance traits in Fenneropenaeus chinensis   总被引：1，自引：0，他引：1  

岳志芹  王伟继孔杰 戴继勋 《中国海洋湖沼学报》2005,23(4):442-447

Amplified fragment length polymorphisms （AFLP） technique was used to analyze the fingerprinting of four successive generations of Fenneropenaeus chinensis to reveal their disease-resistance traits. Some loci showed quite different genetic frequencies due to artificial selection, which implied that these fragments were putative markers related to the disease-resistance trait. We developed a simple and effective method to further characterize these AFLP fragments. Specific AFLP bands were cut directly from polyacrylamide gels, re-amplified, cloned and sequenced. Eight putative genetic markers were sequenced and their sizes ranged from 63 to 209 bp. The sequences were submitted to dbGSS （database of Genome Sequence Survey）; and the BLAST analysis showed low similarity to the function genes, indicating these markers were tightly linked to a disease-resistance trait but were not functional genes.  相似文献   

应用RAPD技术对裙带菜七个配子体克隆的遗传分析   总被引：5，自引：0，他引：5  

岳志芹  李大鹏  戴继勋 《海洋通报》2000,19(6):24-28

对裙带菜７个单克隆进行了ＲＡＰＤ分析,从２０个引物中筛选出１６个能产生稳定的扩增片段的引物,共产６４条扩增片段,其中５６条呈现多态,多态位点比例高达８７．５％,根据这些引物扩增的指纹图谱,计算了各材料之间的遗传距离（Ｄ）,并由此进行了聚类分析,结果显示,各品系之间的遗传距离在０．４４１９－０．７４２之间,裙带菜种内遗传变异丰富,其遗传距离与地理分布没有必然的联系。  相似文献   

锦鲤疱疹病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用   总被引：2，自引：0，他引：2  

范万红  刘荭  岳志芹  吕建强  何俊强  江育林 《中国海洋大学学报(自然科学版)》2007,37(5):785-788,722

研究建立并完善了Taqman实时荧光定量PCR检测锦鲤疱疹病毒（KHV）的方法。首先通过选取KHV病毒TK基因的保守序列（GenBank AB182940）,利用PRIMER EXPRESS 2.0设计引物和探针。其中Taqman探针的5’端标记FAM,3’端标记TAMRA。然后利用梯度稀释的阳性样品克隆质粒进行定量PCR反应,制作标准曲线,得到病毒拷贝数与Ct值的关系为：Ct=-3.45 lgX＋42.73（相关系数R2=0.989）。通过试验检测得到实时荧光定量PCR对KHV的灵敏度为32个病毒核酸拷贝数,同时,设计的引物和探针对于鱼类细胞系和其它鱼类病毒没有扩增反应,表现出较好的特异性。实验结果表明,实时荧光定量PCR检测KHV的方法,具有特异性好、灵敏度高的特点,可以缩短检测时间,提高检测速度,非常适合口岸进出口检验检疫的要求。  相似文献   

实时定量RT-PCR方法检测太平洋牡蛎中的诺沃克样病毒   总被引：1，自引：0，他引：1       下载免费PDF全文

岳志芹  汪俊  梁成珠  雷质文  高宏伟  徐彪  朱来华  薛长湖 《海洋科学》2008,32(8):1-4

建立了Taqman 实时定量RT-PCR方法检测诺沃克样病毒(Norwalk-like Virus,NLV)的方法,并对中国的牡蛎样品进行了分析.选取GⅡ型NLV的RNA聚合酶区域,利用Primer Express 2.0软件设计引物和探针,建立了定量RT-PCR反应体系.将含有NLV扩增片段的质粒10倍梯度稀释,作为标准品进行反应以确定检测灵敏度并制备标准曲线.结果表明,质粒密度在6×106,6×105,6×104,6×103,6×102,6×101,6个拷贝之间,共7个数量级的范围内,定量RT-PCR反应都有"S"型扩增曲线,检测灵敏度为6个拷贝.制备的标准曲线中,病毒拷贝数(X)与Ct值的关系为Ct = -3.36lg X 37.11,相关系数R2=0.998.对中国37批太平洋牡蛎(Crassostrea gigas Thunberg)样品进行了定量检测,有6批样品为阳性,并根据标准曲线测定了NLV的含量.  相似文献   

四种植物生长激素对海带雌配子体克隆生长发育的影响   总被引：3，自引：1，他引：2  

庄岩  戴继勋  崔竞进  潘洁  岳志芹 《中国海洋大学学报(自然科学版)》1999,(2)

以海带（Ｌａｍｉｎａｒｉａｊａｐｏｎｉｃａ）雌配子体克隆ＬＨ１０品系为材料,用４种植物生长激素：三十烷醇（ＴＡ）、２,４－二氯苯氧乙酸（２,４－Ｄ）、吲哚乙酸（ＩＡＡ）和腐植酸钠加以处理,对其生长发育进行了研究。结果表明,它们的最佳生长浓度分别为：ＴＡ,０．０１ｍｇ／Ｌ;２,４－Ｄ０．５ｍｇ／Ｌ;ＩＡＡ,０．５ｍｇ／Ｌ;腐植酸钠,０．５ｍｇ／Ｌ;最佳发育浓度分别为：ＴＡ,０．０１ｍｇ／Ｌ;２,４－Ｄ,１ｍｇ／Ｌ;ＩＡＡ,０．１ｍｇＬ－１;腐植酸钠,０．０５ｍｇ／Ｌ。该研究为加速配子体克隆的生长发育和育苗应用提供了实验依据  相似文献   

淋巴囊肿病毒实时定量PCR检测方法的建立和应用   总被引：2，自引：0，他引：2  

孙颖杰  周优  岳志芹  陈晓  梁成珠  应骏  王哲  汪东风 《中国海洋大学学报(自然科学版)》2009,39(2)

选取淋巴囊肿病毒(Lymphocystis disease virus,LCDV)主衣壳蛋白(MCP)基因保守序列,利用Primer Express2.0软件设计引物,通过优化反应条件,建立了SYBR GreenⅠ实时定量PCR的检测方法,并进行了敏感性、特异性分析.SYBR GreenⅠ实时定量PCR反应体系的最佳引物浓度为0.5 μmol/L,方法的检测限为30个病毒拷贝,扩增产物的Tm值为74.5 ℃.该方法对淋巴囊肿病毒有特异性,不能扩增流行性造血器官坏死病毒(EHNV)、虎纹蛙病毒(TFV)、蛙虹彩病毒(BIV)、新加坡石斑虹彩病毒(SGIV)、鳜鱼传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)及真鲷虹彩病毒(RSIV).对12份发病牙鲆鱼样品进行检测,均感染淋巴囊肿病毒;20份无临床症状的牙鲆经检测不含淋巴囊肿病毒.建立的LCDV的SYBR GreenⅠ实时定量PCR方法,具有成本低、特异、灵敏、快速等优点,可用于淋巴囊肿病毒的早期诊断.  相似文献