抑制性消减杂交技术结合cDNA MICROARRAY技术在中国明对虾WSSV感染后差异表达基因研究上的应用   总被引：1，自引：1，他引：0  

王兵  桂朗  李富花  相建海 《海洋与湖沼》2008,39(5):455-461

以中国明对虾WSSV感染6h的头胸部组织为实验材料,提取总RNA分别进行正反向抑制性PCRcDNA消减杂交,消减杂交后的PCR产物经纯化并克隆到T载体,进而转化成正反向消减文库。消减文库库容分别为:正向库,3.7×104;反向库,1.2×104。利用消减文库的克隆构建了cDNA表达谱芯片,共有1536个靶点,其中正、反向文库各768个。使用该cDNA芯片对WSSV感染后6h的对虾组织进行了表达谱分析,对其中80个出现明显表达调控变化的阳性克隆进行了测序。结果显示,在WSSV感染后6h,病毒基因开始大量表达,而宿主糖酵解,嘌呤、嘧啶代谢以及精氨酸代谢等代谢途径的关键基因出现明显下调。这表明病毒已在宿主体内大批量复制并开始抑制宿主代谢。病毒上调表达的WSV482可能与病毒毒力的增强有关,而宿主蛋白的管家基因如Actin,EFα的下调表达提示:在利用基因表达技术研究WSSV病毒的实验中,管家基因的选择要十分慎重。此外,根据作者已有的研究结果,TPI基因是比较好的候选管家基因。而WSV414、WSV215和WSV482是对WSSV进行RNA干涉实验较好的候选靶标基因。  相似文献   

昆虫围食膜结构与功能概述及其对对虾WSSV 病防治研究的启示     

桂朗  王兵  王丽燕  李富花  相建海 《海洋科学》2012,36(4):126-131

围食膜(Peritrophic matrix,PM)是无脊椎动物肠道内包围摄入食物的一种特殊结构,是由几丁质纤维网在黏附于其上的蛋白质(围食膜蛋白)相互作用下形成的半通透性膜状结构[1]。已发现的围食膜有两种类型,即I型和II型[2]。I型围食膜是由中肠上皮细胞分泌并覆盖于整个中肠表面;II型则由贲门附近的细胞分泌,随着取食产生,包在食物表面并随着消化废物排出体外[3]。类似于脊椎动物消化道的黏液层,它是中肠上皮细胞和食物之间的一个物理屏  相似文献