白斑综合症病毒(WSSV)囊膜蛋白VP28基因的克隆及在蓝藻中表达载体的构建   总被引：4，自引：0，他引：4       下载免费PDF全文

张春莉  施定基  黄倢  张海霞  彭国宏 《海洋科学》2003,27(2):72-76

用蔗糖密度梯度离心法分离纯化白斑综合症病毒（WSSV）。设计并合成引物，提取WSSV中国株的基因组DNA作为模板，通过PCR，扩增克隆出VP28基因，利用BamHI和EcoRI切点将VP28基因插入克隆载体pUC19 的多克隆位点上，得到VP28基因的重组克隆质粒，对其进行双向DNA测序。测序结果表明，该基因含有615个核苷酸，与GenBank中已有不同来源的WSSV的序列片段同源性为100％。利用BamHI切点将VP28的基因插入到穿梭表达载体启动子PpsbA的下游，EcoRI酶切鉴定，得到正向连接的可在蓝藻表达的重组穿梭表达载体，命名为pRL-VP28。  相似文献   

条斑紫菜孢子体与配子体光合系统Ⅱ(PSⅡ)稳定性研究     

柳葵葵  张海霞  Verena Linhar  Hartmut Michel  彭国宏 《海洋科学》2007,31(10):25-28

膜蛋白是生物领域研究中的热点和难点。在光合作用研究中,对于藻类个体发育过程中光合膜蛋白结构和功能的变化所知甚少,其中的一个限制因素是能否纯化得到大量高活性的稳定且均一的光合膜蛋白。作者从条斑紫菜(Porphyra yezoensis)孢子体和配子体中分离纯化得到光合系统(PSⅡ)复合物,并研究了其完整性和放氧活性。结果表明,孢子体和配子体的PSⅡ复合物,在4℃条件下保存比在-80℃下保存放氧活性高,稳定性高。配子体PSⅡ复合物,在-80℃保存第6天就已经没有放氧活性,而孢子体PSⅡ复合物仍有放氧活性。对4℃下保存的PSII复合物进行分子筛柱层析,室温吸收光谱测定以及放氧活性测定,发现随着放氧活性逐渐降低,蛋白大分子有聚合现象。室温吸收光谱表明经过长期的保存,吸收峰向短波长方向偏移,叶绿素易降解成为脱镁叶绿素  相似文献   

温度、光强和pH对条斑紫菜孢子体和配子体类囊体膜上光系统活性的影响   总被引：1，自引：1，他引：1  

梁军  张海霞  Guenter Fritzsch  Hartmut Michel  彭国宏 《海洋科学》2005,29(9):14-18

光合作用研究中，对于个体发育过程中类囊体膜蛋白结构和功能的变化所知甚少，其中的一个限制因素是能否纯化得到大量高活性的稳定且均一的膜蛋白。作者以条斑紫菜（Porphyra yezoensis）2个不同发育阶段（孢子体和配子体）作为研究对象，分离得到了孢子体和配子体的类囊体膜．在不同的温度、光强和pH下，对其类囊体膜上的光系统活性进行了研究。结果表明，孢子体和配子体的PSⅠ活性均随温度和光强的升高而呈现一个先升高后降低的趋势，在温度18℃，光强为2320lx时具有最高的PSⅠ活性。而孢子体乖配子体的PSll活性随温度和光强的变化趋势不明显，孢子体PSⅡ活性在温度18℃，光强为2320lx时最高，配子体PSⅡ活性在温度13℃，光强为2800lx时最高。孢子体PSⅠ在酸性条件下较活跃，在pH5．4时具有最高的PSⅠ活性，配子体PSⅠ在碱性条件下较活跃，PSⅠ活性在pH10．4时最高；孢子体PSⅡ活性随pH的升高呈现一个先升高后降低的趋势，配子体PSⅡ活性随pH变化趋势不明显，但都在pH8．0处活性最高。  相似文献