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基因芯片技术在病原菌检测领域展现出良好的前景,本文依托水产病原菌基因检测芯片的检测体系,以水产常见病原弧菌的hsp60、toxR基因检测探针为研究对象,系统研究不同点样液配方、寡核苷酸探针浓度、荧光标记物质浓度、杂交温度、杂交时长对芯片杂交效果的影响,并进行相应优化。结果表明,杂交温度为60℃、杂交时长为2h、探针浓度为1μmol/L、Cy3标记的随机引物的用量为150pmol时,芯片的经济性、灵敏度、检测效率达到均衡;以0.1mol/L磷酸氢二钠和25%二甲基亚砜混合溶液作为点样液,效果较好。优化后的芯片对4种弧菌的检测没有出现交叉杂交现象,探针特异性达到100%;对溶藻弧菌全基因组DNA检测灵敏度为10fg,高出PCR方法约2个数量级。 相似文献
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中国北方养殖牙鲆的淋巴囊肿病一般发生在水温较低的10～12月,之后随水温的升高肿瘤脱落、出现自愈现象.搞清自愈机理.是有效抑制和减少淋巴囊肿病的重要科学内容.本文研究了不同饲育水温下健康和患淋巴囊肿病牙鲆细胞因子的表达变化,仞步探讨了细胞因子在肿瘤自愈中的作用.通过模拟养殖中的水温变化,采用荧光定量PCR(re-al-time fluorescence quantitative PCR)技术.检测了14,18,22和26℃下牙鲆肝、脾、头肾组织中6种细胞因子(白细胞介素1β(1L-1β)、Mx蛋白(Mx)、肿瘤坏死因子(TNF)、肿瘤坏死因子受体(TNFR)、趋化因子(IL-8)和趋化因子受体(IL-8R))表达变化.结果表明.患病牙鲆肝、脾、头肾组织中的IL-8、IL-8R、Mx、IL-1β、TNF和TNFR-1表达量随温度升高而显著升高;健康牙鲆上述细胞因子的表达基本未出现随温度升高而显著上升的现象.本试验结果响应了养殖水温升高肿瘤脱落的现象,提示上述细胞因子在淋巴囊肿病自愈过程中可能发挥了抗病毒作用. 相似文献
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Lymphocystis disease causes serious economic losses in the fish farming industry. The causative agent of the disease is Lymphocystis disease virus China (LCDV-cn), which has a wide range of hosts. Based on competitive quantitative PCR technology, we established a method to quantify the LCDV-cn in tissue. Results demonstrate that the average amount of LCDV-cn in the peripheral blood of infected flounder with evident tumors is about 106virions/ml while the average amount in those flounder with no evident tumor but cultured with the flounder with evident tumor is about 104virions/ml. No virus was found in the negative samples of flounder. 相似文献
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III型分泌系统(type III secretion system,T3SS)是副溶血弧菌主要的毒力因子之一,能传递与致病有关的毒性因子来发挥病原菌的毒性,而温度是影响细菌基因表达等生命活动的关键生态因子。本文以ATCC17802和JA21作为实验菌株,分别提取其RNA,在不同温度和温度应激条件下,以pvuA为内参基因,以副溶血弧菌T3SS1的vcrD1、vopS、vopD1和T3SS2的vscC2β、vcrD2β、vopP2β作为目的基因,运用荧光定量PCR(RT-PCR)技术检测T3SS相关基因的表达下,用ΔΔCt法计算基因表达差异。结果表明:副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)ATCC17802菌株的T3SS1基因在16℃表达量最高,T3SS2基因在25℃表达量最高。副溶血弧菌JA21菌株的T3SS1基因和T3SS2基因均在25℃表达量最高。2株副溶血弧菌从不同的培养温度转入到应激温度37℃后,T3SS1和T3SS2基因的表达量均被显著诱导,并表现出时间依赖性,呈现先升高后降低的趋势。这为进一步探究环境因素与副溶血弧菌致病力的关系提供了科学依据。 相似文献
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ＩＮＴＲＯＤＵＣＴＩＯＮＴｈｅｒｅｃｅｎｔｙｅａｒｓ’ｒａｐｉｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｔｈｅｍａｒｉｎｅｆｉｓｈｃｕｌｔｕｒｅｉｎｄｕｓｔｒｙｉｎＣｈｉｎａｈａｓｂｒｏｕｇｈｔａｂｏｕｔｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｖｉｒａｌｄｉｓｅａｓｅｓｉｎｔｈｅｉｎｄｕｓｔｒｙａｓｓｈｏｗｎｂｙｔｈｅｎｏｔａｂｌｙｆｒｅｑｕｅｎｔｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅｏｆｄｉｓｅａｓｅｓｏｒｄｅａｔｈｓｏｆｔｈｅｍａｒｉｃｕｌｔｕｒｅｄｆｉｓｈ .Ｅｌｅｃｔｒｏｎｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｈｅａｆｆ… 相似文献
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为研究日本囊对虾(Marsupenaeusjaponicus)耐高亚硝酸盐的分子调控机制,利用新一代高通量Illumina测序技术,对日本囊对虾在高亚硝酸盐胁迫下的肝胰腺进行转录组测序,通过对高质量序列的拼接组装以及功能基因的注释和分类,发掘与耐高亚硝酸盐相关性状的候选基因。实验结果表明:①10个文库共获得920785608个净读本,数据量为6.48G~7.34G。②Q30>93.07%。利用 Trinity软件组装后获得 46308条单基因簇,N50为1833bp。③与对照组相比,高亚硝酸盐组分别识别出593、606、1089、497和988个差异表达基因。④对 DEGs进行功能注释,得到与免疫和代谢相关的通路和基因。⑤采用 qPCR 对随机选择的9个差异基因(DPD、ABCH、ProPOb、ACADL、CYP2J、PAT4、BHMT、CLEC 和PEPCK)在高亚硝酸盐胁迫下的表达情况进行检测,其表达量与转录组测序技术(RNASequencing,RNA-seq)趋势一致。本研究结果丰富了对虾cDNA 数据库的信息,为日本囊对虾在高亚硝酸盐胁迫下的分子机制研究奠定了基础。 相似文献
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从山东近海海域沉积物的微生物筛选中获得了一株高产胞外黑色素的菌株QJNY82,通过对该菌株菌落形态特征观察、生理生化检验及16S rDNA序列测定,初步确定该菌株为发光杆菌属细菌.通过对菌株QJNY82的胞外产物进行红外光谱分析,得到该细菌的胞外产物为黑色素,纯化后的黑色素的红外光谱图与标准黑色素（SIGMA）的红外光谱图一致,且该细菌所产黑色素的理化性质与标准黑色素具有一致性.该海洋菌株具有产黑色素速度快,产量高且不需要L-酪氨酸诱导的特点,而且经L-酪氨酸诱导后,可显著提高菌株QJNY82胞外黑色素的产量,在L-酪氨酸的含量为0.75 g/dm3、盐度为30、pH值为8.0、温度为28℃的条件下,菌株黑色素产量是未加L-酪氨酸的3.5倍,其产量达1.325g/dm3.鉴于菌株QJNY82具有产黑色素的特性,将成为发光杆菌属的一个新的菌种资源. 相似文献
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