钝顶螺旋藻部分原生质体及单细胞的制备与培养   总被引：21，自引：0，他引：21  

秦松  王希华  童顺  曾呈奎 《海洋与湖沼》1995,26(1):109-112

于1992年1月-1994年4月，进行超声波处理方法制备钝顶螺旋藻部分原生质体以作为基因工程受体，以及制备单细胞用于固体平板克隆化培养的研究。研究结果表明：超声波以20kHz频率、15W功率作用30s，可使藻丝体断裂成15．0±1．6个细胞长度；延长作用时间，至2－6个细胞长度时，细胞壁结构遭到破坏，形成部分原生质体；继续作用，可形成少量原生质体和大量单细胞。断裂藻丝体、部分原生质体、单细胞以及原生质体均可涂布于固体培养基上再生或生长。以一定密度涂布单细胞与原生质体，能够形成彼此分开的单个克隆，可用于筛选及遗传分析。本文提供了一种节省溶菌酶的制备螺旋藻透性体的方法，超声波作用利于外源基因的导入，而涂布培养利于进一步的筛选和形成克隆。  相似文献   

海带雌性原生质体的分离与培养     

秦松  王希华  童顺  曾呈奎 《海洋与湖沼》1995,26(S1):126-129

于1993年1月 - 1993年4月，为了制备遗传性纯一的基因工程受体，用酶法从海带雌配子体单性生殖系分离雌性单倍体原生质体。从皱纹盘鲍消化腺及消化器官提取出鲍酶，在25°C下、1％（W／V）的鲍酶与2％（W／V）的纤维素酶（Onozuka R－10）合用能有效解离单细胞和原生质体。海带雌性原生质体经2d培养再生了细胞壁。  相似文献   

ISOLATION OF PLASMID FROM THE BLUE-GREEN ALGA SPIRULINA PLATENSIS   总被引：2，自引：0，他引：2  

秦松  童顺  张培军  曾呈奎 《中国海洋湖沼学报》1993,(3)

CCC plasmid was isolated from an economically important blue-green alga- Spirulina platensis (1.7×106 dalton from the S6 strain and 1.2×106 dalton from the F, strain) using a rapid method based on ultrasonic disruption of algal cells and alkaline removal of chromosomal DNA. The difference in the molecular weight of the OOC DNAs from the two strains differing in form suggests that plasmid may be related with the differentiation of algal form. This modified method, which does not use any lysozyme, is a quick and effective method of plasmid isolation, especially for filamentous blue-green algae.  相似文献   

红藻真江离质粒的发现   总被引：2，自引：1，他引：2  

秦松  童顺 《海洋与湖沼》1994,25(4):349-352,T002

于１９９２年４月－１９９３年４月，用液氮研磨－苯酚／氯仿抽提－异丙醇沉淀的方法提取青岛沿海产紫菜，真江离，龙须菜，海膜４种红藻的总ＤＮＡ；利用Ｈｏｅｃｈｓｔ－ＣｓＣｌ密度梯度超离心法将叶绿体ＤＮＡ与核ＤＮＡ分开。对抽取的叶绿体ＤＮＡ梯度组分电泳结果表明，真江离样品出现质凿的电泳条带。以透射电镜观察到闭合环状ＤＮＡ图像；分子杂交结果显示，真江离质粒与其叶绿体ＤＮＡ之间没有同源性，而与核ＤＡＮ之间有一  相似文献   

中国科学院海洋研究所海藻分子生物学与基因工程研究进展     

王希华  严小军  童顺  武建秋  秦松  曾呈奎 《海洋科学》1995,19(1):18-19

海藻分子生物学从生物大分子的角度研究海藻的个体发育与系统发育，从分子水平上揭示海藻起源、进化及其生命现象、生命过程的规律、本质以及机理。中心法则是其主要研究思想。以基因的复制和突变演绎遗传、变异与进化；以基因的表达与调控解释代谢、分化与发育。用操作分子的手段研究、揭示生物学规律。海藻基因工程是在分子生物学理论基础上，通过重组ＤＮＡ技术人工构建栽培海藻新品种，以及实现海藻天然产物的基因工程生产［１］曾呈奎等在１９９０年召开的国际盐田生物技术研讨会上提出了海藻生物技术的概念是有目的地利用以及定向改造…  相似文献   

用基因枪将GUS基因导入褐藻细胞中表达   总被引：18，自引：2，他引：18  

秦松  张健  李文斌  王希华  童顺  孙勇如  曾呈奎 《海洋与湖沼》1994,25(4):353-356

于１９９３年１１月－１９９４年２月，用高压氦气式基因枪，将ＰＨ１２２１质粒装有ＧａＭＶ ３５Ｓ启动子，ＧＵＳ基因以及ｎｏｓ的３＇调控区导入海带和裙带菜组织切块中。４８ｈ后，在海带假根细胞和裙带菜中肋部叶片细胞中检测到ＧＵＳ基因的表达。实验表明，微粒子轰击法是外源基因导入大型褐藻的一个有效途径。ＧａＭＶ ３５Ｓ启动子能够驱动外源基因在海洋藻类中的表达，可作为藻类基因工程的启动元件。  相似文献   

钝顶螺旋藻质粒的电镜观察及杂交研究   总被引：4，自引：2，他引：4  

秦松  童顺  崔武  李亚菲  王希华  武建秋  吴光耀  张培军  曾呈奎 《海洋与湖沼》1994,25(5):560-563

于１９９２年６月－１９９３年４月，对钝顶螺旋藻质粒进行透射电镜观察及分子杂交研究。结果表明，利用层分子膜展开技术，能够观察到超螺旋以及闭合环形的质粒图象；Ｓ６质粒大小的平均值约为２．０ｋｂ，与电泳检测的结果稍有出科。斑点杂交结果表明，不同形态藻株Ｓ６、Ｆ３、Ｆ３弯与Ｆ３直质粒之间具有一定同源性，与染色体ＤＮＡ之间均显示同源性。对钝顶螺旋藻质粒的进一步研究将推动其基因工程育种的开展。  相似文献   

红藻真江篱质粒的发现     

秦松  童顺  崔武  王希华  李亚非  吴光耀  张培军  曾呈奎 《海洋与湖沼》1994,25(4):349-352

于1992年4月一1993年4月，用液氮研磨-苯酚／氯仿抽提-异丙醇沉淀的方法提取青岛沿海产紫菜、真江蓠、龙须菜、海膜4种红藻的总DNA；利用Hoechst－CsCl密度梯度起离心法将叶绿体DNA与核DNA分开。对抽取的叶绿体DNA梯度组分电泳结果表明，真江蓠样品出现质粒的电泳条带。以透射电镜观察到闭会环状DNA图像（周长平均值为4.3×10－7m，约为1．3kb）；分子杂交结果显示，真江蓠质位与其叶绿体DNA之间没有同源性，而与核DNA之间有一定同源性。  相似文献