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为了研究大黄鱼(Pseudosciana crocea)peroxiredoxin Ⅳ(Lyc-Prx Ⅳ)在细胞内的抗氧化功能,构建了表达大黄鱼Prx Ⅳ的重组质粒p CMV-Lyc-Prx Ⅳ,瞬时转染人胚肾细胞(HEK-293T),利用Western blotting方法检测转染后的细胞样品中Lyc-Prx Ⅳ的表达情况,并通过测定细胞内过氧化氢浓度来评价Lyc-Prx IV的体内抗氧化作用.结果显示,Lyc-Prx Ⅳ可在转染重组质粒p CMV-Lyc-Prx Ⅳ的HEK-293T细胞中表达,且细胞中A560处的吸光值在转染后6、12、24 h后分别为0.154、0.116以及0.162,而瞬时转染空载体p CMV后细胞样品在A560处的吸光值在转染后一直稳定在0.260左右,说明细胞中过氧化氢的浓度在转染后6、12、24 h时明显低于瞬时转染空载体p CMV细胞中的过氧化氢浓度(p〈0.01).表明Lyc-Prx Ⅳ在生物体内可以分解过氧化氢,参与生物体内氧化还原状况的调控.  相似文献   
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IFN-γ是哺乳动物的一个关键免疫调节因子,通过特异性地结合IFN-γ受体1(IFNGR1)和IFN-γ受体2(IFNGR2)组成的异源四聚受体复合物,来发挥其生物学功能.目前,在鱼类中已经克隆出IFNGR1基因的2个亚型:细胞因子受体家族B 13(CRFB13)和细胞因子受体家族B17(CRFB17).本研究从大黄鱼(Larimichthys crocea)中克隆得到了一个CRFB13基因(Lyc CRFB13),其开放阅读框全长1 158个核苷酸,编码由385个氨基酸组成的1个蛋白.Lyc CRFB13蛋白具有典型的II型细胞因子受体特征,包括1个信号肽、1个胞外的FN III-like结构域,1个单次跨膜结构域,以及胞内的JAK1和STAT1结合位点.氨基酸序列分析表明鱼类的CRFB13都具有JAK1和STAT1结合位点.系统进化分析表明鱼类的2种IFNGR1,CRFB13和CRFB17形成2个独立的分支,Lyc CRFB13和鱼类的CRFB13聚在一起,与雀鲷(Stegastes partitus)CRFB13的亲缘关系最近.组织分布显示Lyc CRFB13为组成型表达,在大黄鱼鳃中的表达量最高,而在小肠中的表达量最低.Poly(I:C)刺激后,大黄鱼鳃和头肾中CRFB13的mRNA转录水平都显著升高.此外,poly(I:C)和LPS还能够诱导大黄鱼头肾白细胞中Lyc CRFB13的表达,这些结果表明Lyc CRFB13可能在大黄鱼抗病毒、抗细菌免疫反应中发挥重要作用.  相似文献   
4.
以流行性造血器官坏死病毒(EHNV)中的主衣壳蛋白基因保守区序列作为扩增靶序列,设计合成了一对特异性引物,应用快速的模板制备方法和优化PCR扩增条件,建立了EHNV病毒PCR快速检测技术,并开发成简便、快速、实用的检测试剂盒.该试剂盒的检测灵敏度相当于31个病毒粒子,模板制备时间约30 min,约4 h即可得到准确的结果;且无非特异性扩增带,适用于由EHNV病毒感染的鱼类苗种和水产品的检疫及水质环境的监测.  相似文献   
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