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| Thermus aquaticus DNA连接酶的连接特性研究 | |
| 摘 要： | 为进一步研究Thermus aquaticus(Taq)DNA连接酶的作用机理、开发以DNA连接作为关键步骤的新生物技术,本文以含有超稳定发卡结构的DNA(带有11nt长的单链部分)和另一条单链DNA为连接底物,研究了片段长度、反应温度、连接位点的结构特性、聚乙二醇(Polyethylene glycol,PEG)的添加等对连接的影响,探讨了Taq DNA连接酶的连接特性。连接结果显示:单链DNA的3’端同发卡结构I底物相连的连接率,比单链DNA的5’端同发卡结构II底物相连的连接率更高;可以连接的最短单链DNA片段的长度为6nt;在20~65℃范围内,一般连接率随温度升高而升高。在连接时,由2条底物通过互补配对形成的复合体的热稳定性对连接率影响不大,一般在连接温度远远高于该复合体的熔点(Melting Temperature,Tm)时仍有很高的连接率。在70或75℃时,虽然连接率有所降低,但仍然可以连接9nt的单链DNA片段。研究还发现,在片段连接上,PEG 6000对较难连接的片段(6~7nt)有促进作用,对容易连接的片段(8~10nt)促进作用不显著,甚至有一定抑制作用。 |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ | |