| 雨生红球藻虾青素合成关键酶的原核表达及纯化 |
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| 引用本文： | 丛晓梅,臧晓南,王振东,卫雪红,昝佳伟.雨生红球藻虾青素合成关键酶的原核表达及纯化[J].海洋湖沼通报,2022(6):49-56. |
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| 作者姓名： | 丛晓梅 臧晓南 王振东 卫雪红 昝佳伟 |
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| 作者单位： | 中国海洋大学海洋生物遗传育种教育部重点实验室 |
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| 基金项目： | 山东省优秀中青年科学家科研奖励基金(BS2012HZ017)； |
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| 摘 要： | 雨生红球藻是天然虾青素的重要来源，在胁迫条件下积累虾青素含量能达到细胞干重的5%。八氢番茄红素合成酶(PSY)、β-胡萝卜素酮化酶(CRTW)和β-胡萝卜素羟化酶(CRTZ)是雨生红球藻虾青素合成的关键酶，本研究分别以雨生红球藻的DNA和cDNA为模板，克隆了这三个基因，并构建不同的原核表达载体pET-24a-crtw,pET-24a-crtz,pET-24a-psy。转化大肠杆菌Rosetta感受态，经IPTG诱导后，SDS-PAGE和western blotting结果显示三种重组蛋白都能够正常表达，利用6×His标签对重组蛋白进行纯化能得到相对单一的条带，相对于纯化前目的条带明显加深。ELISA检测重组菌株E.coli RZ,E.coli RW,E.coli RP中的酶活性分别为3.0,10.5,10.0 IU/L,纯化后酶活性显著提高，分别为125.5,124.7,118.0 IU/L。本研究获得了这三种酶的活性重组蛋白，为其功能分析和抗体制备奠定了基础。
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| 关 键 词： | 雨生红球藻 八氢番茄红素合成酶 β-胡萝卜素酮化酶 β-胡萝卜素羟化酶 原核表达 蛋白纯化 ELISA检测 |
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