| 海洋交替单胞菌（Alteromonas sp. Y-389）普鲁兰酶基因的异源表达与酶学性质分析 |
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| 引用本文： | 魏家强,高志远,陈颢.海洋交替单胞菌（Alteromonas sp. Y-389）普鲁兰酶基因的异源表达与酶学性质分析[J].海洋科学进展,2019,37(4). |
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| 作者姓名： | 魏家强 高志远 陈颢 |
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| 作者单位： | 自然资源部 第一海洋研究所,山东 青岛,266061;自然资源部 第一海洋研究所,山东 青岛,266061;自然资源部 第一海洋研究所,山东 青岛,266061 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究计划——超深渊生物群落及其与关键环境要素的相互作用机制研究;海洋公益性行业科研专项——基于海洋微生物发酵的新产品开发技术研究与应用 |
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| 摘 要： | 以海洋交替单胞菌(Alteromonas sp. Y-389)的基因组为模板,设计普鲁兰酶基因的引物并进行PCR扩增。将目的基因连接到载体pET-28a(+)后进行测序并进行生物信息学分析。结果显示,基因的开放阅读框全长4 347 bp,编码1 449个氨基酸的普鲁兰酶,为Ⅰ型普鲁兰酶,有4个保守的结构域,属于糖苷水解酶家族13;将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3),成功诱导出了可溶性的目标蛋白;随后对其酶学性质进行测定与分析,结果表明,该酶的比活力为54.53 U/mg,其最适的反应温度为35℃,最适pH为6.0,Na~+和Mn~(2+)对该酶的活性具有明显的促进作用,而Cu~(2+),Zn~(2+)与Fe~(2+)对其活性的抑制作用比较明显;其酶学参数K_m和V_(max)分别为3.12 mg/mL,228.8 U/mg,将为今后的规模化生产提供数据支持。
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| 关 键 词： | Alteromonassp. 普鲁兰酶 克隆与表达 酶学性质 |
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