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泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)病原霍乱弧菌(Vibrio cholerae)PCR 与LAMP检测方法的比较研究
引用本文:张晓君,白雪松,毕可然,许加涛,秦 蕾,阎斌伦.泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)病原霍乱弧菌(Vibrio cholerae)PCR 与LAMP检测方法的比较研究[J].海洋与湖沼,2013,44(1):209-214.
作者姓名:张晓君  白雪松  毕可然  许加涛  秦 蕾  阎斌伦
作者单位:淮海工学院海洋学院 江苏省海洋生物技术重点实验室 连云港222005
基金项目:江苏省水产三新工程重大项目资助, DY2012-3-7 号; 中央财政支持地方高校发展专项资金资助, CXTD16 号; 江苏高校优势学科建设工程项目资助, 2011
摘    要:采用分子生物学方法,以霍乱弧菌lolB为靶基因设计特异性引物,进行了霍乱弧菌的PCR和环介导等温核酸扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测技术研究,并对它们的特异性、灵敏性和实际应用进行了比较.结果表明,所建立的PCR检测霍乱弧菌的方法最低检测限为4.0× 103 CFU/ml; LAMP检测方法在65℃下恒温扩增60min,检测限为4.0×101 CFU/ml,反应产物加入荧光染料SYBR Green Ⅰ后反应液呈现明显的绿色;以温和气单胞菌、副溶血弧菌、鳗弧菌及美人鱼弧菌为对照菌株,检测结果均为阴性;霍乱弧菌人工染菌的8种水产品进行PCR及LAMP检测,结果均为阳性,而未染菌组均为阴性;PCR及LAMP检测霍乱弧菌的方法均具有灵敏度较高、特异性强等优点,且LAMP检测霍乱弧菌的方法灵敏度是PCR方法的100倍,更适合于养殖现场检测的推广使用.

关 键 词:霍乱弧菌  PCR  LAMP  特异性  灵敏性
收稿时间:2012/3/21 0:00:00
修稿时间:2012/5/25 0:00:00

COMPARISON BETWEEN PCR AND LAMP METHODS FOR THE DETECTION OF VIBRIO CHOLERAE ISOLATED FROM DISEASED MISGURNUS ANGUILLICAUDATUS
ZHANG Xiao-Jun,BAI Xue-Song,BI Ke-Ran,XU Jia-Tao,QIN Lei and YAN Bin-Lun.COMPARISON BETWEEN PCR AND LAMP METHODS FOR THE DETECTION OF VIBRIO CHOLERAE ISOLATED FROM DISEASED MISGURNUS ANGUILLICAUDATUS[J].Oceanologia Et Limnologia Sinica,2013,44(1):209-214.
Authors:ZHANG Xiao-Jun  BAI Xue-Song  BI Ke-Ran  XU Jia-Tao  QIN Lei and YAN Bin-Lun
Institution:College of Ocean, Key Laboratory of Oceanic Biotechnology of Jiangsu, Huaihai Institute of Technology;College of Ocean, Key Laboratory of Oceanic Biotechnology of Jiangsu, Huaihai Institute of Technology;College of Ocean, Key Laboratory of Oceanic Biotechnology of Jiangsu, Huaihai Institute of Technology;College of Ocean, Key Laboratory of Oceanic Biotechnology of Jiangsu, Huaihai Institute of Technology;College of Ocean, Key Laboratory of Oceanic Biotechnology of Jiangsu, Huaihai Institute of Technology;College of Ocean, Key Laboratory of Oceanic Biotechnology of Jiangsu, Huaihai Institute of Technology
Abstract:
Keywords:Vibrio cholerae  PCR  LAMP  Specificity  Sensitivity
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