| 孔石莼(Ulva pertusa)LAMP-LFD快速检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 周前进,陈先锋,蔡怡,段丽君,段维军,苗亮,陈炯.孔石莼(Ulva pertusa)LAMP-LFD快速检测方法的建立[J].海洋与湖沼,2016,47(2):380-389. |
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| 作者姓名： | 周前进 陈先锋 蔡怡 段丽君 段维军 苗亮 陈炯 |
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| 作者单位： | 宁波大学海洋学院 宁波 315211,宁波大学海洋学院 宁波 315211;宁波检验检疫科学技术研究院 宁波 315012,宁波大学海洋学院 宁波 315211,宁波检验检疫科学技术研究院 宁波 315012,宁波检验检疫科学技术研究院 宁波 315012,宁波大学海洋学院 宁波 315211,宁波大学海洋学院 宁波 315211 |
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| 基金项目： | 国家星火计划项目, 2014GA701007号; 浙江省重大科技专项重点社会发展项目, 2013C03045-1号; 宁波市科技创新团队项目, 2015C110018号。 |
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| 摘 要： | 采用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)进行核酸扩增,凭借横向流动试纸条(lateral flow dipstick,LFD)完成扩增产物检测,建立了可快速检测孔石莼(Ulva pertusa)的LAMP-LFD方法。该方法首先在孔石莼的内转录间隔区序列(internal transcribed spacer,ITS)的8个种内保守区域设计6条特异性引物(上游内引物由生物素标记),进行由生物素标记的LAMP反应;同时,在两条外引物的有效扩增区段内设计1条异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记的探针,生物素标记的LAMP产物与FITC标记的探针特异性杂交后,在LFD上完成结果显示。优化后LAMP的反应条件为63°C反应50min,加上探针杂交与LFD检测共需60min。结果表明,利用该LAMP-LFD方法可特异性地检出孔石莼,对浒苔(Ulva prolifera)等9种常见藻类的检测均呈阴性。利用该方法最低可检测到3.04×10~(–2) pg/μL的孔石莼基因组DNA,是以LAMP外引物进行的常规PCR方法的1000倍。针对一定数量的实际样本的检测结果表明,LAMP-LFD方法与传统的形态学观察的结果一致。因此,本研究建立的孔石莼LAMP-LFD快速检测方法,具有特异性强、灵敏度高、操作简便等优点,有望成为我国东部沿海孔石莼快速检测和定期监测的有效技术手段。
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| 关 键 词： | 孔石莼 内转录间隔区 环介导等温扩增技术 横向流动试纸条 检测 |
| 收稿时间： | 2014/12/10 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2015/10/19 0:00:00 |
DEVELOPMENT OF A NOVEL LAMP-LFD METHOD FOR RAPID DETECTION OF ULVA PERTUSA |
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| ZHOU Qian-Jin,CHEN Xian-Feng,CAI Yi,DUAN Li-Jun,DUAN Wei-Jun,MIAO Liang and CHEN Jiong.DEVELOPMENT OF A NOVEL LAMP-LFD METHOD FOR RAPID DETECTION OF ULVA PERTUSA[J].Oceanologia Et Limnologia Sinica,2016,47(2):380-389. |
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| Authors: | ZHOU Qian-Jin CHEN Xian-Feng CAI Yi DUAN Li-Jun DUAN Wei-Jun MIAO Liang and CHEN Jiong |
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| Institution: | School of Marine Science, Ningbo University, Ningbo 315211, China,School of Marine Science, Ningbo University, Ningbo 315211, China;Academy of Inspection and Quarantine, Ningbo 315012, China,School of Marine Science, Ningbo University, Ningbo 315211, China,Academy of Inspection and Quarantine, Ningbo 315012, China,Academy of Inspection and Quarantine, Ningbo 315012, China,School of Marine Science, Ningbo University, Ningbo 315211, China and School of Marine Science, Ningbo University, Ningbo 315211, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Ulva pertusa internal transcribed spacer loop-mediated isothermal amplification lateral flow dipstick detection |
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