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银鲳(Pampus argenteus)胰岛素样生长因子-I基因的克隆和表达分析
引用本文:朱晓芳,郭晓鸽,张鼎元,杨佳喆,徐善良,王丹丽.银鲳(Pampus argenteus)胰岛素样生长因子-I基因的克隆和表达分析[J].海洋与湖沼,2016,47(6):1221-1232.
作者姓名:朱晓芳  郭晓鸽  张鼎元  杨佳喆  徐善良  王丹丽
作者单位:宁波大学海洋学院 宁波大学应用海洋生物技术教育部重点实验室 宁波 315211,宁波大学海洋学院 宁波大学应用海洋生物技术教育部重点实验室 宁波 315211,宁波大学海洋学院 宁波大学应用海洋生物技术教育部重点实验室 宁波 315211,宁波大学海洋学院 宁波大学应用海洋生物技术教育部重点实验室 宁波 315211,宁波大学海洋学院 宁波大学应用海洋生物技术教育部重点实验室 宁波 315211,宁波大学海洋学院 宁波大学应用海洋生物技术教育部重点实验室 宁波 315211
基金项目:国家星火计划项目,2015GA701007号;浙江省自然科学基金项目,LY15C190003号;宁波市重大科技专项,2015C110003号。
摘    要:胰岛素样生长因子-I(Insulin-like growth factor-I,IGF-I)是影响脊椎动物生长、发育及代谢的重要调控因子。本研究采用RT-PCR和RACE技术,克隆了银鲳(Pampus argenteus)肝脏IGF-IcDNA序列,应用半定量RT-PCR、Real-time q PCR和原位杂交的方法检测了IGF-I的组织表达特性、在肝脏中的生长表达特性和IGF-I基因在肝脏中的定位。序列分析表明,IGF-I cDNA序列全长836bp,其5′非编码区128bp、3′非编码区92bp,开放阅读框(open reading frame,ORF)605bp,由此推导IGF-I前体蛋白由201个氨基酸组成;前体肽由信号肽、成熟肽、E肽三部分组成,其中信号肽59个氨基酸,成熟肽68个氨基酸,E肽74个氨基酸;成熟肽由B、C、A、D四个区域组成,E肽分析表明,银鲳IGF-I属Ea-4型。同源性比较结果表明,银鲳与同目鲈形目鱼类的IGF-I编码序列同源性较高,为83.52%—91.40%;与哺乳类、鸟类和爬行类的同源性较低。半定量RT-PCR和Real-time q PCR组织特异性表达结果显示,IGF-I m RNA在肝脏组织中的表达量最高,显著高于其它组织,肾脏、心脏、肌肉、脑、鳃、小肠、卵巢次之,嗅球、脾脏和胃中表达较低;半定量RT-PCR和Real-time q PCR不同生长阶段表达结果显示,IGF-I m RNA在30—50g肝脏组织中表达量最高(P0.05);IGF-I m RNA在肝脏中的原位杂交定位结果显示,在肝脏细胞中均有表达,阳性信号主要位于细胞质中,靠近细胞边缘处信号较强。

关 键 词:银鲳  胰岛素样生长因子-I基因  荧光定量  原位杂交
收稿时间:2016/6/30 0:00:00
修稿时间:2016/8/15 0:00:00

CLONG AND EXPRESSION ANAYSIS OF INSULIN-LIKE GROWTH FACTOR I GENE IN PAMPUS ARGENTEUS
ZHU Xiao-Fang,GUO Xiao-Ge,ZHANG Ding-Yuan,YANG Jia-Zhe,XU Shan-Liang and WANG Dan-Li.CLONG AND EXPRESSION ANAYSIS OF INSULIN-LIKE GROWTH FACTOR I GENE IN PAMPUS ARGENTEUS[J].Oceanologia Et Limnologia Sinica,2016,47(6):1221-1232.
Authors:ZHU Xiao-Fang  GUO Xiao-Ge  ZHANG Ding-Yuan  YANG Jia-Zhe  XU Shan-Liang and WANG Dan-Li
Institution:School of Marine Science, Key Laboratory of Applied Marine Biotechnology, Ministry of Education, Ningbo University, Ningbo 315211, China,School of Marine Science, Key Laboratory of Applied Marine Biotechnology, Ministry of Education, Ningbo University, Ningbo 315211, China,School of Marine Science, Key Laboratory of Applied Marine Biotechnology, Ministry of Education, Ningbo University, Ningbo 315211, China,School of Marine Science, Key Laboratory of Applied Marine Biotechnology, Ministry of Education, Ningbo University, Ningbo 315211, China,School of Marine Science, Key Laboratory of Applied Marine Biotechnology, Ministry of Education, Ningbo University, Ningbo 315211, China and School of Marine Science, Key Laboratory of Applied Marine Biotechnology, Ministry of Education, Ningbo University, Ningbo 315211, China
Abstract:
Keywords:Pampus argenteus  insulin-like growth factor-I gene  quantitative real-time PCR  in situ hybridization
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