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中华乌塘鳢(Bostrychus sinensis) GPx7和GPx8基因的克隆、表达与酶活性分析
引用本文:丁浪,夏立萍,沈斌,张建设.中华乌塘鳢(Bostrychus sinensis) GPx7和GPx8基因的克隆、表达与酶活性分析[J].海洋与湖沼,2022,53(3):697-709.
作者姓名:丁浪  夏立萍  沈斌  张建设
作者单位:浙江海洋大学 国家海洋设施养殖工程技术研究中心 浙江舟山 316022
基金项目:国家自然科学基金项目,42106101号。
摘    要:中华乌塘鳢(Bostrychus sinensis)属于广盐广温、低氧耐受性强、药用价值高的鱼类,为我国东南沿海重要养殖对象。谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPx)是生物体内重要的抗氧化酶,能够清除过氧化氢防止机体生物膜氧化受损,研究中华乌塘鳢GPx基因对其养殖及海洋生态研究具有重要意义。利用分子克隆技术获得了中华乌塘鳢GPx7和GPx8(分别命名为BsGPx7和BsGPx8)的cDNA序列。BsGPx7编码186个氨基酸,含有2个半胱氨酸(Cys56和Cys85)催化位点;BsGPx8编码210个氨基酸,含有1个半胱氨酸(Cys109)催化位点。利用RT-PCR方法研究了BsGPx7、BsGPx8基因在中华乌塘鳢组织中的分布表达,以及不同浓度镉离子(7.5,15,30 mg/L)胁迫下BsGPx7、BsGPx8基因的表达量变化。结果显示,BsGPx7和BsGPx8在组织中呈泛在性表达,其中肝脏的表达量最高,其次是鳃和皮肤。不同浓度的镉离子胁迫下,BsGPx7基因在鳃和皮肤中的表达量均显著上调(P<0.05),BsGPx8基因在肝脏、鳃和皮肤中的表达量均显著上调(P<0.05)。成功构建了原核表达载体,表达并纯化获得了BsGPx7重组蛋白(rBsGPx7)。对rBsGPx7在不同温度和pH条件下的酶活性进行了测定,表明rBsGPx7在35℃和pH 8条件下酶活性最高。综上提示,BsGPx7与BsGPx8参与了机体对抗镉离子诱导的氧化应激的过程,可能在抗氧化防御中起一定作用。

关 键 词:谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)  中华乌塘鳢(Bostrychus  sinensis)  镉离子  基因表达  酶活性
收稿时间:2021/11/5 0:00:00
修稿时间:2021/11/30 0:00:00

MOLECULAR CLONING, EXPRESSION AND ENZYMATIC ACTIVITITY ANALYSES OF GPx7 AND GPx8 FROM CHINESE BLACK SLEEPER (BOSTRYCHUS SINENSIS)
DING Lang,XIA Li-Ping,SHEN Bin,ZHANG Jian-She.MOLECULAR CLONING, EXPRESSION AND ENZYMATIC ACTIVITITY ANALYSES OF GPx7 AND GPx8 FROM CHINESE BLACK SLEEPER (BOSTRYCHUS SINENSIS)[J].Oceanologia Et Limnologia Sinica,2022,53(3):697-709.
Authors:DING Lang  XIA Li-Ping  SHEN Bin  ZHANG Jian-She
Institution:National Engineering Research Center for Marine Aquaculture, Zhejiang Ocean University, Zhoushan 316022, China
Abstract:
Keywords:glutathione peroxidase (GPx)  Chinese black sleeper (Bostrychus sinensis)  Cd2+  gene expression  enzymatic activity
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