| 单环刺螠转录因子基因Sp8的克隆、原核表达和重组蛋白纯化 |
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| 引用本文： | 史晓丽,刘晓龙,张立涛,张志峰.单环刺螠转录因子基因Sp8的克隆、原核表达和重组蛋白纯化[J].中国海洋大学学报(自然科学版),2013(5):52-58. |
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| 作者姓名： | 史晓丽 刘晓龙 张立涛 张志峰 |
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| 作者单位： | 中国海洋大学海洋生物遗传育种教育部重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(31072191)资助 |
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| 摘 要： | 转录因子Sp是一类广泛存在的锌指蛋白超家族成员,可与某些基因的上游调控序列结合,参与基因的转录调控。本研究采用同源克隆和RACE技术,获得单环刺螠的Sp8的全长cDNA,该序列长1 913bp,开放阅读框1 521bp,编码506个氨基酸;将其开放阅读框cDNA克隆到原核表达载体pET28a中,并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,在37℃条件下,经1mmol/L IPTG诱导表达4h,获得以包涵体形式存在的重组蛋白pET28a-SP,使用8mol/L尿素溶解包涵体,并通过镍离子金属螯合柱纯化获得重组蛋白,SDS-PAGE分析该蛋白的分子量约为50kD。Sp8蛋白体外表达的成功将为研究单环刺螠相关基因的转录调控打下基础。
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| 关 键 词： | 单环刺螠 Sp8 转录因子 克隆 原核表达 |
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