| 大黄鱼β-actin 抗体的制备与组织表达谱分析 |
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| 引用本文： | 董 乐,姚丽梅,戴聪杰,张 乐,黄苹苹,王建颖.大黄鱼β-actin 抗体的制备与组织表达谱分析[J].海洋科学,2014,38(12):22-28. |
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| 作者姓名： | 董 乐 姚丽梅 戴聪杰 张 乐 黄苹苹 王建颖 |
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| 作者单位： | 泉州师范学院 化学与生命科学学院，近海资源生物技术福建省高校重点实验室，福建 泉州 362000 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(31272679); 福建省高校服务海西建设重点项目(A101); 福建省生物学省级重点学科建设项目(zdxk); 泉州市科技计划重点项目(2013Z126) |
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| 摘 要： | 为探讨大黄鱼(Larimichthys crocea)β-actin基因(Lc Actb)作为内参基因进行相关研究的可行性,从转录和翻译水平研究其组织表达谱,作者以大黄鱼肝脏为材料,扩增Lc Actb的开放阅读框序列,并将其亚克隆至原核表达载体p ET32a(+)。酶切、测序结果表明,p ET32a-Lc Actb构建成功。将p ET32a-Lc Actb转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行优化表达,表达蛋白经纯化后进行Western blotting验证;原核表达结果表明,IPTG可诱导一个分子量约45 ku的特异蛋白,且主要以包涵体的形式存在,优化表达条件为:28℃、0.4mmol/L IPTG、200 r/min诱导表达5 h。用表达蛋白作为抗原,免疫新西兰白兔制备抗Lc Actb的多克隆抗体;用纯化的多抗进行Western blotting的结果表明,获得了特异性的Lc Actb抗体;通过实时荧光定量RT-PCR检测大黄鱼多种组织m RNA的表达,其次,制备了多种组织匀浆蛋白,使用纯化的抗体进行Western blotting分析,结果显示,Lc Actb在大黄鱼成体各组织中转录和翻译水平的表达差异均不显著,可做为研究大黄鱼成体组织中其他基因表达和翻译水平的内参标准。
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| 关 键 词： | 大黄鱼(Larimichthys crocea) beta-肌动蛋白 原核表达 抗体 组织表达谱 |
| 收稿时间： | 2014/2/23 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2014/9/22 0:00:00 |
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