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溶藻弧菌dtd基因的克隆及原核表达条件优化
引用本文:陈立明,;庞欢瑛,;简纪常,;吴灶和.溶藻弧菌dtd基因的克隆及原核表达条件优化[J].广东海洋大学学报,2014(3):52-57.
作者姓名:陈立明  ;庞欢瑛  ;简纪常  ;吴灶和
作者单位:[1]广东海洋大学水产学院,广东湛江524088; [2]广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室,广东湛江524088; [3]广东省教育厅水产经济动物病害控制重点实验室,广东湛江524088; [4]仲恺农业工程学院,广东广州510225
基金项目:国家科技支撑计划(2012BAD17802);广东省自然科学基金(B12121)
摘    要:根据NCBI数据库中已发表的溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)全基因组序列合成一对特异性引物,应用聚合酶链式反应(PCR技术)扩增溶藻弧菌HY9001菌株dtd基因,将其定向克隆到原核表达载体pET-32a构建重组表达质粒pET-DTD,并对其进行诱导温度、诱导时间、诱导IPTG浓度等条件的优化,最后探究其纯化时最佳咪唑洗脱浓度。结果表明:DTD蛋白成功表达,且其以包涵体的形式存在,在诱导温度37℃、IPTG浓度0.1 mmol/L条件下诱导5 h表达量最高,纯化最佳咪唑洗脱浓度为150 mmol/L。

关 键 词:溶藻弧菌  dtd  基因克隆  原核表达  条件优化
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