| 罗非鱼罗湖病毒RT-PCR检测方法的建立及初步应用 |
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| 引用本文： | 雷燕,肖洋,赵振峰,唐绍林,黎建斌,陈福艳.罗非鱼罗湖病毒RT-PCR检测方法的建立及初步应用[J].广东海洋大学学报,2019(3). |
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| 作者姓名： | 雷燕 肖洋 赵振峰 唐绍林 黎建斌 陈福艳 |
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| 作者单位： | 广州利洋水产科技股份有限公司;广州金水动物保健品有限公司;广西水产科学研究院广西遗传育种与健康养殖遗传重点试验室 |
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| 摘 要： | 【目的】建立快速检测罗非鱼罗湖病毒(Tilapia Lake Virus,Ti LV)的RT-PCR方法。【方法】参照GenBank中罗非鱼罗湖病毒全基因序列,依据其假定蛋白基因片段3设计合成1对特异性扩增引物,提取罗湖病毒RNA,逆转录成cDNA,进行PCR扩增,通过优化扩增条件和扩增体系,建立快速检测罗非鱼罗湖病毒的RT-PCR方法。用该方法对自然感染罗湖病毒发病的罗非鱼样品进行RT-PCR扩增。【结果】RT-PCR扩增得到与试验设计相符的499 bp的特异性目的条带,而对健康罗非鱼、野生罗非鱼及其他病毒对照组的扩增结果均为阴性。测序比对结果表明,该方法检测结果准确,最低可检测出约10fg/mL的质粒DNA,具有较好的特异性和较高的敏感性。用该方法对332份临床样品进行RT-PCR检测,其中36份样品扩增出特异性的目的条带,经测序比对,检测结果正确。【结论】建立的检测方法可用于TiLV的检测。
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| 关 键 词： | 罗非鱼 罗湖病毒 快速检测 RT-PCR |
Development and Application of a RT-PCR Assay of Tilapia Lake Virus |
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