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1.
《广东海洋大学学报》2015,(3)
采用复相乳液法,以乙基纤维素为包囊材料,明胶溶液为保护液制取微胶囊,对副溶血弧菌噬菌体(Vibrio parahaemolyticus phage)进行固定化,制备噬菌体微胶囊。结果显示,乙基纤维素质量浓度为30 g/L,明胶质量浓度为20 g/L,搅拌速度为600 r/min,时间30 min,副溶血弧菌噬菌体悬液与乙基纤维素溶液的体积比为1∶3时,所得微胶囊有较好的噬菌体缓释性能,综合评价指数最高。对方斑东风螺(Babylonia areolata)饲以混有噬菌体微胶囊的饵料,当饵料中噬菌体微胶囊质量分数为1.0 g/kg时,与对照组比较,东风螺肠道宿主菌平均减少96%,水体中宿主菌减少72%,差异均有统计学意义(P0.05);以黏附剂按1.5 g/kg的剂量将噬菌体微胶囊黏附于对虾饵料,并投喂凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei),对虾肠道的宿主菌比对照组平均减少86%,水体中宿主菌比对照组减少68%,差异均有统计学意义(P0.05)。微胶囊可有效控制宿主弧菌的在养殖体系的浓度,减少养殖动物弧菌病的产生。 相似文献
2.
副溶血弧菌噬菌体衣壳蛋白的组成分析及其主组分的分离纯化 总被引：1，自引：0，他引：1
<正>目前,针对传统抗生素治疗细菌感染中出现的耐药性及药物残留等问题,亟需寻找一种新型的替代药物。噬菌体对治疗病原菌感染的多种优越性,成为抗菌新药研究开发的新热点和理想材料。对噬菌体的溶菌机制[1-3]以及实践应用[4-6]等已有较多报道。笔者主要对副溶血弧菌噬菌体衣壳蛋白的组成进行了初步研究,并用SDS-PAGE电泳法分离纯化了其主要组分,为制备该蛋白质的抗体,建立副溶血弧菌噬菌体的免疫学检测方法奠定基础。 相似文献
3.
研究了海水网箱养殖海域弧菌数量变化、种类组成及其相关因素,探讨弧菌数量的变化与鱼病的关系。结果表明:网箱内水体弧菌数量为390~230 mL-1,平均为20.6×102mL-1,网箱外水体为130~1450 mL-1,平均为530 mL-1,非养殖对照海区为10~390 mL-1,平均为190 mL-1。养殖海区弧菌数量呈现明显的季节性变化,尤其是网箱水体,对照海区只在9月数量较高,其他时间变化不大。平均数量网箱内大于网箱外,网箱外大于对照海区。水体中出现的弧菌种类有河流弧菌Vibrio fluvialis,创伤弧菌Vibrio vulnifgicus,霍乱弧菌Vibrio cholerae,副溶血弧菌Vibrio parahaemolyticus,溶藻弧菌Vibrio alginolyticus,美人鱼弧菌Vibrio damsela,拟态弧菌Vibriomimicus和好利斯弧菌Vibrio hollisae,美人鱼弧菌、溶藻弧菌和霍乱弧菌占有较大优势。弧种数量与海水温度、盐度及营养盐有相关性,但其相关性因不同种和不同点而不同。检测期间,网箱养殖鱼类无明显流行病发生,但弧菌的高峰期明显与报道的鱼病高峰期相吻合。 相似文献
4.
对凡纳滨对虾注射浓度为1×105、1×106、1×107mL-1的溶藻弧菌悬液,在注射后4、12、24、48、72和120 h于腹血窦取血,测定其血清中一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)含量,以及一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物岐化酶(SOD)活力。结果表明,注射溶藻弧菌后,凡纳滨对虾血清中NO含量及NOS活力显著高于对照组,且NOS活力最大值出现时间较NO早;而SOD活力先升高后下降,MDA含量在SOD活力开始下降后逐渐升高,说明一氧化氮系统对凡纳滨对虾感染的溶藻弧菌有清除作用,并能在一定程度上对损伤过程中生成的氧自由基产生作用。 相似文献
5.
溶藻弧菌疫苗对凡纳滨对虾免疫功能的影响 总被引：3，自引：0，他引：3
应用溶藻弧菌疫苗饲喂凡纳滨对虾,测定了弧菌疫苗对凡纳滨对虾免疫指标的影响以及 疫苗的免疫保护作用。结果发现,投喂弧菌疫苗后,溶菌活力在12～20d内迅速增强,在20d时 活力达到最高,VF1组高于VF2和VF3组,但VF2和VF3之间差异不显著;凝集效价在投喂后的 第8天开始升高,在14d时达到最高,实验组的凝集活力均高于对照组,但实验组之间无明显的差 异;而超氧化物歧化酶(SOD)活力和溶血活力变化不明显。以每克饲料含疫苗细胞1.0×109、 1.0×108和1.0×107个的浓度投喂,对凡纳滨对虾的免疫保护率分别为66.7%、46.7%和13.3%。 可见弧菌疫苗对凡纳滨对虾的免疫保护率随疫苗浓度的增大而升高。 相似文献
6.
【目的】研究复方中草药对虹鳟(Oncorhynchus mykiss)肝脏免疫功能及肠道免疫相关基因的影响。【方法】将红枣提取物、山药提取物和黄芪提取物按照质量比1∶1∶1混合,分别按质量分数0(对照)、0.3%、0.6%和1.2%添加到虹鳟基础饲料中,饲喂体长7.6~8.9 cm的虹鳟幼鱼56 d。用副溶血弧菌(Vibrio parahemolyticus)对幼鱼进行攻毒试验(5.48×106 cfu/尾),4 d后,取其肝脏和肠道,测定肝脏的生理生化指标,用半定量PCR及荧光定量PCR测定肠道免疫相关基因的表达。【结果】与对照组比较,肝脏的总抗氧化能力(T-AOC)显著升高(P<0.05),溶菌酶(LZM)水平极显著升高(P<0.01),酸性磷酸酶(ACP)、过氧化氢酶(CAT)活性显著降低(P<0.05),碱性磷酸酶(ALP)活性极显著降低(P<0.01),0.6%剂量组的丙二醛(MDA)极显著降低(P<0.01),而SOD无显著差异(P>0.05);各复方中草药组肠道的肿瘤坏死因子(TNF-α)及1.2%剂量组转化生长因子-β(TGF-β)转录水平极显著降低(P<0.01),0.3%和0.6%剂量组的补体3(C3)转录水平显著升高(P<0.05)。【结论】复方中草药(红枣+山药+黄芪)可提高感染副溶血弧菌的虹鳟非特异性免疫功能。 相似文献
7.
以红笛鲷Lutjanus sanguineus弧菌病的主要病原菌——溶藻弧菌Vibrio alginolyticus为抗原制备兔抗血清,以辣根过氧化酶标记的羊抗兔血清为酶标二抗,建立了酶联免疫吸附试验检测技术。通过棋盘滴定法测定,得出溶藻弧菌菌悬液的最佳工作浓度为5×108mL-1,兔抗溶藻弧菌血清的最佳稀释度为1∶16000,酶标羊抗兔抗体的最佳稀释度为1∶2000。应用本实验建立的间接双抗体夹心法对红笛鲷进行现场检测,患病红笛鲷特异性抗体的检出率为70%,外观健康红笛鲷的检出率为20%。结果表明,本实验所建立的酶联免疫吸附试验(ELISA)检测法可以用于红笛鲷弧菌病的血清流行病学研究,而且可以检测出隐性感染状态下的红笛鲷。 相似文献
8.
从马氏珠母贝(Pinctada martensii)插核部位蘸取组织液分离弧菌,研究插核手术前后室内休养3 d时伤口部位弧菌类型的变化,比较使用不同小片和珠核处理液对手术伤口部位弧菌类型的影响。形态和生理生化特征分型和鉴定结果显示,插核前和休养期贝样上分离的优势弧菌类型无明显差异,只是休养期弧菌的分离频率有所下降;从术后不同处理组的马氏珠母贝伤口上均分离得到7个类型弧菌,弧菌所属的种类也一致,而从未插核的对照组相应部位上只分离到4个类型弧菌,除未分离到副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)外,对照组与两个处理组贝样上分离到的弧菌种类基本上一致。 相似文献
9.
根据创伤弧菌(Vibrio vulnificus)的溶细胞毒素基因序列和哈氏弧菌(Vibrio harveyi)的toxR基因序列,分别设计并合成两对特异性引物,通过PCR反应条件优化,测试两种菌的特异性和敏感性,建立双重PCR方法,同时快速检测V.vulnificus和V.harveyi。结果表明:纯培养V.vulnificus和V.harveyi的检测灵敏度分别是12 cfu/mL和18 cfu/mL,与无乳链球菌、海豚链球菌、副溶血弧菌及美人发光杆菌无交叉反应;此PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性,具快速、高效等优点,对细菌V.vulnificus和V.harveyi诊断与防治具有较好的临床应用性。 相似文献
10.
采用溶藻弧菌ATCC17749菌体作为抗原免疫新西兰大白兔,制备兔抗溶藻弧菌多克隆抗体;利用柠檬酸钠还原氯金酸法制备胶体金及胶体金-抗体结合物,并将其喷涂在玻璃纤维膜上冷冻干燥;在硝酸纤维素膜上包被兔抗溶藻弧菌多克隆抗体和羊抗兔IgG分别作为检测线和控制线;将处理后的玻璃纤维素膜、硝酸纤维膜、样品垫及吸水纸组装成双抗夹心试纸条,并对试纸条灵敏度、特异性、稳定性进行评价。结果表明,制备的兔抗溶藻弧菌多克隆抗体的效价可达1∶512 000;胶体金溶胶的最佳制备条件为:加入1.8 mL 10 mg/mL的柠檬酸三钠,500 W微波炉中火加热10 min;试纸条检测线和质控线的抗体最佳包被量分别为8.0 mg/mL和1.0 mg/mL;试纸条检测灵敏度为1×106cfu/mL,特异性试验显示,试纸条与哈氏弧菌、副溶血弧菌、霍乱弧菌、拟态弧菌、美人鱼弧菌、弗氏弧菌、河流弧菌、创伤弧菌等8株菌无交叉反应;稳定性试验表明,试纸在4℃干燥条件下能稳定保存5个月以上。制备的溶藻弧菌多克隆检测试纸条可灵敏、较特异地检测源自病鱼的溶藻弧菌,整个检测过程可在10 min内完成,适用于溶藻弧菌的快速检测。 相似文献
11.
Cloning, expressing, and hemolysis of tdh, trh and tlh genes of Vibrio parahaemolyticus 总被引：1，自引：0，他引：1
Vibrio parahaemolyticus (VP) is one of the pathogenic vibrios endangering net-cage cultured Pseudosciaena crocea,Fennerpenaeus chinensis, and shellfish in coastal areas of China. Several types of hemolysins produced by Vp have been characterized as major virulence factors.They are thermostable direct hemolysin (TDH),TDH-related hemolysin (TRH) and thermolabile hemolysin (TLH). In this study, we cloned tdh, trh, and tlh genes from the genome DNA of VP by polymerase chain reaction (PCR).We ligated the three genes into prokaryotic expression vector pET-28a (+),and transformed the recombinant plasmids into Es-cherichia coli BL21 (DE3). The expression of recombinant proteins was induced by isopropyl-β-D-thiogalacto-pyranoside (IPTG). The recombinant proteins were expressed in a form of inclusion bodies and thus purified with Ni-NTA affinity chromatography. Western blotting results showed that recombinant proteins,TDH, TRH and TLH, could be recognized by rabbit anti-VP serum. The three purified proteins were renatured by gradient dialysis.The renatured proteins exhibited hemolytic activity except for TLH in the presence of phosphatidylcholine. These results not only are helpful for better understanding these genes’ functions under a single factor level, but also provide evidence for VP vaccine engineering. 相似文献
12.
腹腔注射恩诺沙星和氟苯尼考对红笛鲷血清IgM含量的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
以20mg·kg-1恩诺沙星和氟苯尼考分别腹腔注射红笛鲷,通过间接酶联免疫吸附实验法(ELISA)测定红笛鲷血清IgM的含量,研究恩诺沙星与氟苯尼考对红笛鲷血清IgM含量的影响。结果显示:健康红笛鲷血清中IgM抗体的含量为3.591±0.314mg·mL-1,注射后,恩诺沙星组增加至4.234±0.013mg·mL-1,第3周后恢复至初始水平,而氟苯尼考组则降低至2.538±0.214mg·mL-1,第5周仍未恢复至初始水平。可见,恩诺沙星可提高红笛鲷血清中抗体IgM的含量,而氟苯尼考则降低鱼体血清中抗体IgM的含量,且影响时间也较长。 相似文献
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ZHANG Zhengbin* LI Peifeng and LIU Chunying Institute of Marine Chemistry Ocean University of China Qingdao P.R.China 《中国海洋大学学报(英文版)》2006,5(3):239-242
1Introduction NOisadiffusible,gaseousfreeradicalthatplaysimportantrolesinanimalsandplants.Itfunctionsin diseaseresistance,abioticstress,celldeath,respira tion,senescence,rootdevelopments,germinationandhormoneresponses.Itisanunusualsignalinthatitis areactive,lipophilicandvolatilefreeradicalthatcanbecytotoxic.ThewidespreadbiologicalsignificanceofnitricoxidewasrecognizedbySciencein1992whichnamedthefreeradicalNO‘Moleculeoftheyear’,andin1998theNobelPrizeinPhysiologyandMedicinewasawardedforwor… 相似文献
14.
探索含CpG基序的未甲基化寡脱氧核苷酸(ODNs)对鱼类的免疫调节,将人工合成的鱼免疫刺激剂寡脱氧核苷酸序列1670(含一个CpG基序)、1670-D(含两个CpG基序)加入到离体培养的异育银鲫的头肾巨噬细胞和外周血白细胞中,采用MTT法测定其对鲤外周血白细胞增殖的影响,NBT还原法和Griess试剂显色法测定对头肾巨噬细胞的呼吸爆发的影响。结果显示,1670可显著(浓度为20.0μg·mL-1)或极显著(浓度为0.1、1.0、10.0μg·mL-1)提高异育银鲫巨噬细胞的氧呼吸爆发活性,但对氮呼吸爆发活性和外周血白细胞的增殖无显著作用;1670-D可显著(浓度为0.1μg·mL-1)或极显著(浓度为1.0、10.0、20.0μg·mL-1)增强异育银鲫巨噬细胞的氧呼吸爆发活性和外周血白细胞的增殖,且可极显著(浓度为1.0、10.0、20.0μg·mL-1)提高异育银鲫巨噬细胞的氮呼吸爆发活性。表明特定序列、特定作用剂量的CpG-DNA可增强体外培养的异育银鲫巨噬细胞和外周血白细胞的非特异性免疫应答。 相似文献
15.
The variation in Arctic sea ice has significant implications for climate change due to its huge influence on the global heat balance. In this study, we quantified the spatio-temporal variation of Arctic sea ice distribution using Advanced Microwave Scanning Radiometer(AMSR-E) sea-ice concentration data from 2003 to 2013. The results found that, over this period, the extent of sea ice reached a maximum in 2004, whereas in 2007 and 2012, the extent of summer sea ice was at a minimum. It declined continuously from 2010 to 2012, falling to its lowest level since 2003. Sea-ice extent fell continuously each summer between July and mid-September before increasing again. It decreased most rapidly in September, and the summer reduction rate was 1.35 × 10~5 km~2/yr, twice as fast as the rate between 1979 and 2006, and slightly slower than from 2002 to 2011. Area with 90% sea-ice concentration decreased by 1.32 × 10~7 km~2/yr, while locations with 50% sea-ice concentration, which were mainly covered by perennial ice, were near the North Pole, the Beaufort Sea, and the Queen Elizabeth Islands. Perennial Arctic ice decreased at a rate of 1.54 × 10~5 km~2 annually over the past 11 years. 相似文献
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LIU Yang LI Guiyang MO Zhaolan CHAI Zihan SHANG Anqi and MOU Haijin 《中国海洋大学学报(英文版)》2014,13(1):163-168
The bacteriophage P13 that infects Klebsiella serotype K13 contains a heat-stable depolymerase capable of effective degradation of exopolysaccharide(EPS) produced by this microorganism. In this study, the titer of phage P13, initially 2.0 × 107 pfu mL-1, was found increasing 20 min after infection and reached 5.0 × 109 pfu mL-1 in 60 min. Accordingly, the enzyme activity of depolymerase approached the maximum 60 min after infection. Treatment at 70℃ for 30 min inactivated all the phage, but retained over 90% of the depolymerase activity. Addition of acetone into the crude phage lysate led to precipitation of the protein, with a marked increase in bacterial EPS degradation activity and a rapid drop in the titer of phage. After partial purification by acetone precipitation and ultrafiltration centrifugation, the enzyme was separated from the phage particles, showing two components with enzyme activity on Q-Sepharose Fast Flow. The soluble enzyme had an optimum degradation activity at 60℃ and pH 6.5. Transmission electron microscopy demonstrated that the phage P13 particles were spherical with a diameter of 50 nm and a short stumpy tail. It was a double-strand DNA virus consisting of a nucleic acid molecule of 45976 bp. This work provides an efficient purification operation including thermal treatment and ultrafiltration centrifugation, to dissociate depolymerase from phage particles. The characterization of phage P13 and associated EPS depolymerase is beneficial for further application of this enzyme. 相似文献
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异育银鲫气单胞菌病原菌鉴定和药敏试验 总被引：1，自引：0，他引：1
从患病异育银鲫体内分离到5株可疑菌株,经API 20NE细菌生化鉴定,YCS07-03和YZ07-11株鉴定率为99.2%和99.3%。注射感染中5×108 CFU.mL-1剂量组表现出较强的致病性,12 d死亡率100%。菌株在营养肉汤培养液中呈均匀混浊状;在营养琼脂平皿中呈灰白色半透明菌落;在血琼脂培养基中呈光滑灰白色菌落,YZ07-11株出现透明的β溶血环;在TCBS培养基呈黄色菌落;在SS和麦康凯培养基中形成无色透明的扁平菌落。经负染电镜观察,菌株两端圆,呈直杆状,无芽孢,极生单鞭毛,菌株大小(短径×长径)分别为1.53μm×2.71μm和0.80μm×2.12μm。菌株经生化实验鉴定为温和气单胞菌(Aeromonas sobria)和嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)。试验结果表明:菌株对丁胺卡那霉素、头孢噻肟、庆大霉素、左氟沙星、复合磺胺、氟嗪酸、洛美沙星、复方新诺明、链霉素和新霉素均产生高度敏感;对万古霉素为中度敏感;氨苄青霉素、羧苄青霉素、强力霉素和青霉素产生耐药。 相似文献