五种鲤科鱼类生长激素cDNA的克隆和序列分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

于辉  李华  颜其贵  林涛  冯婷  冯迎春 《广东海洋大学学报》2008,28(4)

通过RT-PCR方法,以草鱼、鳙鱼、鲫鱼、鲤鱼、齐口裂腹鱼等5种鲤科重要经济鱼类的垂体总RNA为模板扩增出其生长激素(fish growth hormone,fGH)的完整ORF序列,并克隆到pMD18-T载体上,命名为pMD-1(草鱼)、pMD-2(鳙鱼)、pMD-3(鲫鱼)、pMD-4(鲤鱼)、pMD-5(齐口裂腹鱼)。测序结果显示,ORF序列其长度均为633 bp。序列分析表明,所有ORF序列均以ATG为起始密码,以TAG为终止密码,编码210个氨基酸残基,推导的生长激素前体由22个氨基酸的信号肽和188个氨基酸的成熟肽组成。同源性分析表明,草鱼、鳙鱼、鲤鱼、鲫鱼和齐口裂腹鱼的fGH同源性在93.3%~99.5%之间。  相似文献   

钝顶螺旋藻基因组质粒文库的构建及其在获得功能基因上的应用          下载免费PDF全文

田李  张晓雯  秦松 《海洋科学》2008,32(6):55-60

利用改良的SDS法提取钝顶螺旋藻基因组DNA，经Sau3AI酶切，回收1～2kb大小的片段，与BamHI（Sau3AI的同尾酶）酶切并去磷酸化后的pBR322质粒载体相连接，转入大肠杆菌（Escherichia coli）Top10细胞，构建了螺旋藻基因组质粒文库。根据pBR322载体上多克隆位点两侧序列设计锚定引物，根据丝状蓝藻丝氨酸／苏氨酸激酶（STK）保守序列设计简并引物，以螺旋藻质粒文库为模板，“巢式”扩增出了STK基因部分序列。螺旋藻基因组质粒文库的构建为功能基因研究提供了极大方便。  相似文献   

海洋微微型真核生物分子多样性的研究方法     

汪岷  江雪娇 《中国海洋大学学报(自然科学版)》2009,39(4)

微微型真核生物在海洋中广泛存在,是初级生产力的重要贡献者,也是微食物环的重要组成部分.由于微微型真核生物形体微小且不同种类缺乏明显形态学特点,故而难以利用电镜等传统方法精确研究其系统发生关系和种类组成.运用分子生物学技术直接对微微型真核生物种类组成进行研究已成为微微型真核生物多样性研究的重要方法.本文概述了目前世界范围内的微微型真核生物分子多样性研究进展以及我国在该领域中的研究状况.综述了微微型真核生物分子多样性研究中常用的靶标基因,包括18S rDNA和ITS序列等真核生物保守基因及psbA和rbcL等功能基因;常用的分子生物学方法,如克隆文库构建、DGGE/TGGE、PCR-RFLP/T-RFLP、FISH、宏基因组等;以及目前研究方法中存在的一些问题.  相似文献   

七鳃鳗鸟嘌呤转移因子Vav2分子克隆、表达及系统发育分析研究     

韩英伦  李军  徐磊  马庆华  勾萌  逄越  刘欣  李庆伟 《海洋学报(英文版)》2017,36(12):24-30

鸟嘌呤转移因子Vav2为Vav家族成员,其在Ras-related GTP酶活性调节过程中发挥重要作用。本文首次从七鳃鳗体内克隆并表达出七鳃鳗Vav2分子（Lj-Vav2）。系统发育分析结果阐明,Lj-Vav2为脊椎动物Vav2基因家族的直系同源基因。进化动力学分析指明,CH结构域、DH结构域、PH结构域、C1结构域、SH3结构域、SH2结构域贯穿于脊椎动物Vav2家族的进化历程。实时定量PCR结果表明,Lj-Vav2分布于七鳃鳗心脏、肾脏、髓样组织、肝脏、鳃以及类淋巴细胞中,同时经过LPS刺激后淋巴细胞中Lj-Vav2的表达水平呈现明显上调趋势。综上,Lj-Vav2在七鳃鳗体内免疫防御过程中发挥重要作用。此外,我们的研究将为今后更好地阐明Lj-Vav2生物学功能奠定坚实的物质基础。  相似文献   

大黄鱼(Larimichthys crocea)IL-10基因的克隆与表达分析     

郑维兵  慕鹏飞  丁连帅  杨思司  敖敬群  艾春香  陈新华 《海洋学报》2017,39(4):50-60

白细胞介素10(Interleukin 10,IL-10)是一种抗炎细胞因子,可以抑制机体免疫反应。本研究经过分析大黄鱼基因组数据库发现了IL-10同源基因,并对其cDNA编码区序列和基因组DNA序列进行了克隆分析。大黄鱼IL-10(LycIL-10)基因由5个外显子和4个内含子构成,其序列全长1 869bp,其开放阅读框(ORF)长555bp,编码184个氨基酸,其N端的22个氨基酸残基为预测的信号肽,成熟肽由162个氨基酸残基组成,包含了脊椎动物IL-10标志性保守序列。LycIL-10的氨基酸序列同其他已知物种的IL-10氨基酸序列的一致性为26.49%~77.01%。Real-time PCR分析发现LycIL-10在检测的组织中为组成型表达,在脾脏和肌肉中转录水平相对较高。三联灭活细菌疫苗和聚肌苷酸胞苷酸(poly(I∶C))刺激后,大黄鱼头肾和脾脏中LycIL-10mRNA的转录水平会显著升高,表明LycIL-10可能参与抑制大黄鱼由细菌和病毒引起的炎症反应。  相似文献   

基于改进的遗传算法边坡稳定性分析方法及其应用     

何朋朋  姚磊华  汤荣贵 《地质灾害与环境保护》2007,18(1):100-104

在遗传算法和瑞典条分法的基础上,提出了对边坡临界滑裂面的搜索方法及其最小安全系数的求解方法.文中利用安全系数的倒数作为目标函数,可行域根据实际边坡的尺寸和经验给出,而且在计算过程中根据目标函数值进行调节,逐步缩小搜索空间,使搜索效率提高.算法中利用了十进制遗传算法的改进操作优体克隆操作和子体优生操作,提高了搜索的速度和精度.  相似文献   

把克隆动物送进厨房     

《发现．图形科普》2003,(1):14-17

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快速恢复系统的优化方法     

周斌 《陕西气象》2002,(4):45-46

当系统频繁死机或遭受病毒攻击而不能启动时 ,需要重新安装 WINDOWS操作系统并重新安装声卡、显卡、打印机、扫描仪等各种设备 ,是项又耗时 ,又枯燥的事情。当重要文档被误删时 ,某个目录不能使用时 ,需要重新输入文档 ,重新安装被损坏的目录。使用克隆软件可简化这些工作。克隆软件可以恢复庞大的操作系统 ,能很快恢复被误删的文档或目录。 Drive image pro是克隆软件中的优秀软件。1　系统备份前的准备工作　　首先要确保硬盘上的系统软件、打印机的驱动、扫描仪的驱动安装调试好 ,确保正确无误 ;其次 ,用正版杀毒软件对硬盘上的系统…  相似文献   

污水处理系统中活性污泥细菌多样性研究   总被引：2，自引：0，他引：2  

姜昕  马鸣超  李俊  鲁安怀  钟佐燊 《地学前缘》2008,15(6)

采用分子生物学手段16S rDNA克隆文库方法对北京高碑店污水处理厂回流污泥中的细菌进行了多样性研究。结果表明,活性污泥系统中细菌群落具有高度多样性,所有克隆子分属5个不同的细菌类群,优势细菌类群为变形菌(proteobacteria),占克隆文库的76.7%;细菌类群优势依次为β-变形菌类群(β-proteobac-teria,占39.8%)、不可培养菌类群(uncultured bacteria,占22.33%)、γ-变形菌类群(γ-proteobacteria,占20.15%)、α-变形菌类群(α-proteobacteria,占6.79%)和δ-变形菌类群(δ-proteobacteria,占4.85%);活性污泥中起硝化作用的主要是亚硝化单胞菌(Nitrosomonas sp.,占1.94%)和硝化螺旋菌(uncultured Nitrospirae bacterium,占11.65%),由于这2种硝化菌自身生长缓慢,难以与异养细菌竞争,以致其在文库中的比例较低;而作为反硝化细菌的陶厄氏菌属在文库中的比例却高达27.18%,可见该活性污泥具有较强的反硝化能力;克隆文库中还发现了少量的玫瑰单胞菌属(占4.85%),推测它的存在和有机磷的降解有关。  相似文献   

口虾蛄高血糖激素基因全长cDNA的克隆及表达分析     

刘海映  张秀芹  隋宥珍  李宏俊  邢坤  姜玉声  杨贵福  陈雷  张娜 《海洋学报》2016,38(6):98-109

本文首次采用RACE技术获得口虾蛄(Oratosquilla oratoria)眼柄部高血糖激素(crustacean hyperglycemic hormone,CHH)基因cDNA全长序列,共2 421 bp,5'UTR长度为180 bp,3'UTR 为1 821 bp,开放阅读框(ORF)长420 bp,编码139个氨基酸。预测蛋白二级结构α-螺旋23.74%,延伸链占23.02%,无规则卷曲占53.24%,预测分子量为15.47 kD,等电点(pI)为7.049。CHH成熟肽包含6个CHH家族中位置保守的Cys残基,C端为GK,推断为ES型CHH基因。聚类分析表明:口虾蛄CHH和十足目CHH聚为同一个分支的两亚群,具有较近的亲缘关系。荧光定量PCR分析结果表明,CHH基因在肠中表达量最高,在眼柄、触角中有较高的表达量,在肌肉中表达量相对较低,在卵巢中表达最低,而在精巢中不表达。  相似文献