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采用硫酸铵沉淀、离心超滤、DEAE—Sephadex A25、Sephadex G-100和Sephacryl S-300 HR柱层析等方法从海洋食藻性锈凹螺(Chlorostoma rustica)消化腺中分离纯化出一种褐藻胶裂解酶(Alginate lyase)，得到电泳纯酶制品，并对此酶的酶学性质进行了研究。结果表明：此褐藻胶裂解酶的分子量为28kD，反应的最适温度为40℃，具有热不稳定性，最适pH为7．0；酶的反应受多种离子的影响，Mn^2 、Co^2 和Cd^2 对此褐藻胶裂解酶活性具有明显的抑制作用，而Mg^2 、Zn^2 、Na^ 和K^ 则具有促进作用；采用透明圈法和底物法验证了此裂解酶对聚甘露糖醛酸和聚古洛糖醛酸的特异性，实验表明，此酶对聚古罗糖醛酸(Polyguluronate，PG)有特异性。 相似文献
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从白色噬琼胶菌(Agarivorans albus)QM38基因组中扩增到一段编码β-琼胶酶的DNA序列,命名为agaD02。序列相似性分析的结果表明,基因agaD02和弧菌Vibrio sp.JT0107及Vibrio sp.PO-303的琼胶酶基因具有同源性,其相似性程度分别为98.7%和97.4%,而同GenBank中的其他序列同源性很低。对此基因的序列进行了分析,结果表明,其开放阅读框长度为2 868 bp,编码的蛋白质包含955个氨基酸,在蛋白数据库中的编号为ABM90422,推测其分子质量为106 ku,等电点为4.87。利用网上数据库资源和生物学软件对预测的琼胶酶蛋白序列进行了同源性分析和结构分析。设计两端含酶切位点的特定引物,克隆agaD02基因,构建入表达载体pET24a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),转化后提取质粒进行酶切和电泳验证,转化后的大肠杆菌经诱导可产生胞外琼胶酶。 相似文献