转基因微藻作为新型生物反应器的研究进展     

刘红涛  鲁照明  侯桂琴  李慎柯  王建民  薛乐勋 《海洋通报》2006,25(1):75-83

转基因微藻作为生物反应器生产生物活性物质已成为基因工程研究的热点之一。目前以转基因微藻作为生物反应器的技术并不十分成熟,然而许多科研人员及生物医药公司将微藻作为新型生物反应器生产有用的外源蛋白。本文对微藻生物反应器构建中的有效核转化方法的建立、转基因微藻中所用的启动子、筛选标记、稳定表达等问题进行了综述,同时介绍了目前转化成功的以及未来可能转化成功的有潜在应用价值的微藻。  相似文献   

转“全鱼”溶菌酶基因大菱鲆的研究   总被引：7，自引：0，他引：7  

纪伟  张培军 《海洋科学》2004,28(5):8-14

用大西洋条鳕(Macrozoarces americanus)抗冻蛋白启动子opAFP promoter和牙鲆(Paralichthys olivaceus)c型溶菌酶基因构建“全鱼”溶菌酶基因元件opAFP—ly，首次应用电脉冲精子介导法将该基因片段导入到大菱鲆(Scophthalmus maximus)受精卵内，获得原代转基因大菱鲆。先后采用单因子方法和正交实验方法，重复实验确定了最适导入条件：脉冲电压为400V／cm，脉冲次数为5，脉冲宽度为25ms，外源DNA浓度为50mg/L。利用最适导入条件，实现基因元件大规模转移。采用PCR技术对1月龄的原代转基因大菱鲆仔鱼的染色体DNA进行分析，结果表明外源基因的整合率可达28％。  相似文献   

藻类基因启动子结构与功能研究进展     

张学成  郭楠  宋晓金 《中国海洋大学学报(自然科学版)》2008,38(3):404-412

启动子是基因表达调控重要的顺式元件,其结构与功能的研究成为分子生物学的研究热点之一.本文介绍了植物基因启动子的研究方法与概况,重点综述了藻类基因启动子的研究现状,以及本实验室对节旋藻藻蓝蛋白基因启动子的研究情况,并就启动子研究在基因工程中的应用价值和存在问题进行了讨论.  相似文献   

真鲷（Pagrus major）vasa基因5′端启动子克隆及表达载体构建          下载免费PDF全文

林帆  刘清华  李军  隋娟  肖志忠  徐世宏  马道远  肖永双 《海洋与湖沼》2011,42(2):186-192

采用染色体步移（Genome walking）的方法克隆了真鲷vasa基因5′侧翼序列,采用生物信息学方法分析潜在的顺式作用元件,并与斑马鱼核心启动子进行比对,在此基础上构建了绿色荧光蛋白表达载体。序列分析结果显示：克隆得到的真鲷vasa基因5′侧翼序列序列长度为2762bp,其中包括TATA-box、CAAT-box...  相似文献   

杜氏盐藻叶绿体ATP合酶α亚单位基因启动子的克隆及初步功能分析     

谷辉辉  冯书营  潘卫东  李杰  薛乐勋 《海洋科学》2011,35(9):18-23

采用DraⅠ,EcoRⅤ,PvuⅡ,ScaⅠ,SmaⅠ和StuⅠ六种内切酶消化杜氏盐藻（Dunaliella salina）叶绿体基因组DNA,与相应DNA接头连接,构建成无载体连接的盐藻叶绿体Genome Walker DNA文库。利用长距离PCR（long distance-polymerase chain rea...  相似文献   

TYLCV-CHI侵染诱导的抗病毒 GFP标记的载体构建     

Chen Gang 《中国海洋大学学报(自然科学版)》2000,30(Z1):19-24

以CTAB法提取含有番茄黄化曲叶病毒TYLCV-CHI病原的烟草曲 叶病烟草DNA为模板,扩增该病毒外壳蛋白启动子序列,克隆到pGEM7Z载体上,在启动子下 游连接上能表达毒素蛋白的RNase基因和终止子NOS,最终将构建的基因转移到带有绿色荧光 蛋白GFP的植物表达载体上,构建了通过病毒侵染后激发病毒外壳蛋白启动子从而表达毒素 基因,产生毒素杀死病毒防止感染继续扩散的自我保护机制的基因工程植物表达载体。  相似文献   

裂殖壶菌pks2基因启动子序列扩增及其活性分析     

朱清  臧晓南  王振东  马帅 《中国海洋大学学报(自然科学版)》2023,(1):66-73

针对目前裂殖壶菌(Aurantiochytrium limacinum)基因工程相关研究中,对内源启动子的了解和利用仍处在初步阶段的现状,本研究从裂殖壶菌中产多不饱和脂肪酸的主要途径聚酮合酶(PKS)途径出发,利用热不对称交错PCR技术(TAIL-PCR),针对pks2基因扩增出了未知的5’端侧翼序列,初步分析得到pks2基因启动子序列,并分别在原核宿主大肠杆菌(Escherichia coli)与真核宿主酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中对启动子活性做进一步研究,发现了pks2基因启动子可以在大肠杆菌和酿酒酵母中有效启动绿色荧光蛋白的表达,而且pks2基因启动子相较于pks1、pks3基因启动子具有更高的启动活性,显现出了其作为启动子用于基因工程研究的可操作性。  相似文献   

不同品系节旋藻cpcB基因上游序列的克隆与分析     

卢永忠  王迪  张学成 《海洋科学进展》2007,25(3):326-331

采用体外克隆技术获得来自节旋藻6个品系的cpcB基因的257 bp的上游序列和217 bp的编码区序列,并和来自FACHB341的cpcB基因序列对应部分进行比较分析。结果表明,所获得的上游序列和编码区序列都有高度的保守性,而编码区所推导的氨基酸序列的保守性更高。启动子软件预测,在每一上游序列中都存在5条启动子序列,其中,FACHB439的启动子种类和结构与其他品系存在一定的差异。同时,FACHB439的翻译起始区mRNA二级结构与其他品系也有所不同。因此推测,在大多数品系节旋藻中藻蓝蛋白基因存在相同的表达调控机制,而品系FACHB439则可能存在一定程度的差异。  相似文献   

转录因子CREB对合浦珠母贝无定型碳酸钙结合蛋白启动子的调节作用     

《广东海洋大学学报》2020,(2)

【目的】研究无定型碳酸钙结合蛋白(ACCBP)基因的上游调控机制。【方法】以合浦珠母贝(Pinctada fucata)为研究对象,利用基因组步移技术克隆合浦珠母贝ACCBP基因(PfACCBP)的启动子。设计启动子截短实验,通过双荧光素酶标记法确定启动子与转录因子CREB的结合位点,定位启动子中的功能元件。克隆转录因子环腺苷效应元件结合蛋白(CREB),并通过共转染实验和凝胶迁移率分析检测启动子的相对转录活性。【结果】获得合浦珠母贝ACCBP基因的启动子序列,ACCBP启动子在HEK-293T细胞系中转录活性较高;该启动子上存在CRE元件,该元件可在转录过程中与CREB蛋白直接结合,大幅上调ACCBP启动子的转录效率。【结论】转录因子CREB可通过与ACCBP启动子上的CRE元件结合而增强转录活性的调控作用。  相似文献   

用显微注射方法分析牙鲆肌肉发育调节基因MyoD, Myf5的启动子序列          下载免费PDF全文

张玉青  谭训刚  张培军  孙威  徐芃  徐永立 《海洋科学》2008,32(3):31-35

克隆了牙鲆(Paralichthys olivaceus)肌肉发育调节基因MyoD和Myf5的启动子序列,分别为608 bp和1 073 bp。对序列进行分析发现MyoD和Myf5的启动子含有参与肌肉发育调控的基因的结合位点。将MyoD和Myf5的启动子连接到GFP载体上,构建了重组质粒MyoDP-GFP和Myf5P-GFP,并注射到一细胞或两细胞的斑马鱼胚胎中,对这两个基因的启动子进行了瞬时表达研究。结果表明,牙鲆MyoD和Myf5的启动子可以驱动绿色荧光蛋白特异地在斑马鱼肌肉纤维中表达,因此牙鲆608 bpMyoD和1073 bpMyf5的启动子包含着可以驱动MyoD和Myf5正常表达的必需元件,它们是肌肉特异的,并且可以跨物种行使其功能。  相似文献