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逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测5种养殖石斑鱼的神经坏死病毒 总被引：2，自引：0，他引：2
神经坏死病毒(Nervous necrosis virus)是导致多种海水鱼类神经性病害的致病原。发病及死亡的石斑鱼除了表现神经异常症状外，无明显的临床病症，体表及内脏组织也未发现明显病变及寄生虫感染。2003年4～8月，应用逆转录聚合酶链式反应(RT—PCR)技术从福建南部人工养殖的5种石斑鱼即紫石斑鱼(Epinephelus lanceolatus)、马拉巴石斑鱼(E．malabaricus)、青石斑鱼(E.awoara)、赤点石斑鱼(E.akaara)和云纹石斑鱼(E．moara)中检出5个神经坏死病毒分离株。检测了76份石斑鱼样品，这些石斑鱼NNV病毒的平均感染率约为90％。对这些病毒的RT—PCR产物421bp核酸进行了测序和序列分析，其相同的序列超过99％。将这些序列与GenBank的石斑鱼(Epinephelus spp．)神经坏死病毒相关基因序列作比较，同源性在97％以上。对神经坏死病毒在石斑鱼体内的分布也进行了分析，在脑和眼组织的检出率最高，部分病鱼的肝、脾和肾组织也能检出病毒。结合流行病学特征，可确认神经坏死病毒为该传染病的主要致病原。RT—PCR方法是检测NNV等病原的一种理想的诊断方法。 相似文献
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根据包纳米虫（Bonamia sp.）SSU rDNA和派琴虫（Perkinsus sp.）ITS rDNA的保守区序列,设计特异性引物和Taqman MGB探针,建立了同时检测上述两种贝类原虫的双重实时荧光PCR方法.该方法可检测到包纳米虫基因的446拷贝质粒,以及派琴虫基因的171拷贝质粒,具有较高的灵敏度.以10倍系列稀释的包纳米虫阳性标准品质粒和派琴虫阳性标准品质粒为模板,测得该方法的定量标准曲线相关系数分别为0.999和1.000,显示出很好的扩增效率.同时该方法与尼氏单孢子虫（Haplosporidium nelsoni）、沿岸单孢子虫（H.costale）等其他贝类原虫,以及副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus）、迟缓爱德华氏菌（Edwardsiella tarda）和鮰爱德华氏菌（E.ictaluri）等海水养殖常见致病菌之间无交叉反应,表现出较高的特异性.福建莆田的湄州湾、平海湾、兴化湾等地采集的296份贝类临床样本的检测证明,该方法是一种有效的快速检测鉴定上述2种贝类原虫的方法,具有良好的灵敏度和特异性,可广泛应用于海洋贝类原虫感染情况调查,以及贝类疫病检疫监控等领域. 相似文献
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