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为探讨外源基因Δ6-去饱和酶与C20-延伸酶基因对肿瘤细胞增殖的抑制作用,本研究选取了微拟球藻(Nannochloropsis oculata)作为研究对象,对其Δ6-去饱和酶与C20-延伸酶基因进行了逆转录PCR扩增,并将获得的上述2个基因的编码区与真核表达质粒pEGFP-C3构建重组表达质粒,转染乳腺癌细胞MCF-7,以pEGFP-C3为对照,培养48h后,在荧光显微镜下观察转染细胞中的GFP荧光信号以判断重组质粒表达情况,荧光实时定量PCR分析转染细胞中外源基因的转录水平,MTT比色法检测外源基因对MCF-7细胞的增殖抑制程度,高效气相色谱检测转染细胞中多不饱和脂肪酸(Polyunsaturated fatty acids,PUFAs)的含量变化。结果表明2个外源基因均可在MCF-7细胞中表达,并能有效地抑制MCF-7细胞的增殖,改变MCF-7细胞中2种PUFAs的相对含量,且n-3PUFAs与n-6PUFAs的比值升高。推测过表达的Δ6-去饱和酶与C20-延伸酶可能通过改变乳腺癌细胞MCF-7细胞膜中PUFAs的相对含量,达到抑制乳腺癌细胞MCF-7增殖的效果。 相似文献
2.
A gene(NANOC-D6D) encoding a desaturase that removes two hydrogen atoms from fatty acids at delta 6 position was isolated from a cDNA library of Nannochloropsis oculata(Droop) D.J.Hibberd(Eustigmatophyceae).The unicellular marine microalga N.oculata synthesizes rich long chain polyunsaturated fatty acids(LCPUFAs),including eicosapentaenoic acid(20:5n-3,EPA).The deduced protein contains 474 amino acids that fold into 4 trans-membrane domains.The neighbor-joining phylogenetic tree indicates that NANOC-D6D is ... 相似文献
3.
We constructed and characterized a normalized cDNA library of Nannochloropsis oculata CS-179, and obtained 905 nonredundant sequences (NRSs) ranging from 431–1 756 bp in length. Among them, 496 were very similar
to nonredundant ones in the GenBank (E ≤1.0e-05), and 349 ESTs had significant hits with the clusters of eukaryotic orthologous groups (KOG). Bases G and/or C at
the third position of codons of 14 amino acid residues suggested a strong bias in the conserved domain of 362 NRSs (>60%).
We also identified the unigenes encoding phosphorus and nitrogen transporters, suggesting that N. oculata could efficiently transport and metabolize phosphorus and nitrogen, and recognized the unigenes that involved in biosynthesis
and storage of both fatty acids and polyunsaturated fatty acids (PUFAs), which will facilitate the demonstration of eicosapentaenoic
acid (EPA) biosynthesis pathway of N. oculata. In comparison with the original cDNA library, the normalized library significantly increased the efficiencies of random
sequencing and rarely expressed genes discovering, and decreased the frequency of abundant gene sequences. 相似文献
4.
为研究硅限制对三角褐指藻脂肪酸组成的影响,用不含硅的f/2人工海水培养基对处于生长指数末期的三角褐指藻进行了0、6、12、24、48h的硅限制并测定了其叶绿素a、叶黄素含量和脂肪酸组成。结果表明,硅限制对三角褐指藻叶绿素a和叶黄素含量无影响,对脂肪酸组成影响显著。硅限制显著增加了C14∶0、C16∶0、C16∶1、C16∶2、C20∶5(EPA)百分含量,但各脂肪酸响应硅限制的时间不同。C14∶0在硅限制24、48h显著增加,分别是对照组的1.33倍、1.41倍。C16∶0在硅限制6、48h显著增加,分别是对照组的1.12倍、1.19倍;C16∶1在硅限制48h显著增加,是对照组的1.16倍;C16∶2在硅限制24h显著高于对照组,是对照组的1.27倍;EPA在硅限制24h百分含量达到最大值21.86%,分别是0h和对照组的1.11倍、1.18倍。研究结果表明,一定时间的硅限制能显著提高三角褐指藻EPA百分含量,以期为工业化生产EPA提供理论参考。 相似文献
6.
综合考虑酶混合液处理时间和初始细胞密度两个因素,选取终浓度为4%半纤维素酶和2%崩溃酶的酶混合液对一株海洋经济微藻——微拟球藻(Nannochloropsis oculata)进行原生质体的制备与再生,Calcofluor White染料染色可在荧光显微镜下观察到完整的原生质体细胞。实验结果表明:同一初始密度藻细胞酶处理1～3 h制备率较高;酶处理相同时间较高初始密度(2×107～3×107cells/mL)的藻细胞制备率较高,并且原生质体在再生培养基上可再生,生长趋势与野生型细胞一致。考虑到酶处理时间过长或者密度过大会对原生质体的再生产生影响,本实验选择最适酶处理时间为1h,初始细胞密度为2×107cells/mL。 相似文献
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亲环素的研究进展与展望 总被引：1，自引：0，他引：1
亲环素(Cyclophilins, CyPs)是1个在自然界分布广泛、具高度保守性的多功能蛋白家族,也是重要的免疫抑制剂药物环孢菌素A(CyclosporinA, CsA)的蛋白受体,除了具有肽酰脯氨酸顺/反异构酶(Peptidyl-prolylisomerases, PPIase)活性外,亲环素还在一系列生物学过程中发挥重要作用,如辅助蛋白折叠、参与细胞凋亡、信号转导、HIV-1病毒蛋白组装等过程.近年国内外关于亲环素的研究主要集中在亲环素在不同生物体内的分布、相关的蛋白序列分析、亲环素的结构及其重要的生物学功能,而在微拟球藻(Nannochloropsis oculata)中发现的类似亲环素的基因序列为微藻中亲环素的研究提出了新的课题. 相似文献
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Δ5脂肪酸去饱和酶(Δ5fatty acid desaturase)是合成花生四烯酸(AA)和EPA的关键酶。为了构建三角褐指藻Δ5脂肪酸去饱和酶基因(简称D5)的原核表达重组质粒,并实现在E.coli BL21(DE3)中的表达。本研究根据GenBank中三角褐指藻Δ5脂肪酸去饱和酶基因序列,设计引物,扩增该基因并插入到pET28a中,测序鉴定后,转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达产物。结果表明pET28a-D5构建成功,IPTG能诱导D5特异性表达。 相似文献
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于2009年8月在海南省东寨港、亚龙湾青梅港和三亚河口红树林区,分别采用自行研制的沉积物耗氧量(Sediment oxygen demand,SOD)测定装置,对红树林湿地SOD和相关环境因子进行研究。结果表明,红树林湿地沉积物耗氧主要分为2个阶段,即瞬时耗氧阶段和渐缓耗氧阶段。3个站位的SOD值范围为102.2-157.7mg/(m2·h),其中瞬时耗氧占23.3%-45.5%。SOD与沉积物中的硫化物含量及上覆水中的化学耗氧量(Chemical oxygen demand,COD)、NH4+浓度有显著的相关性。研究结果表明,红树林湿地沉积物能对其上覆水释放有机物并消耗水体中的溶解氧,使水质变差,因此,用红树林湿地处理城市污水可能导致生态恶化。 相似文献
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