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1.
尝试了多种方法分离中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)囊胚细胞和原肠胚细胞并进行了细胞培养.结果表明,解剖法适用于囊胚细胞,自行设计的压片法适用于原肠胚细胞.在培养起始阶段,通过降低血清浓度和缩小培养体系可使中国明对虾囊胚细胞和原肠胚细胞迅速贴壁并铺展,囊胚细胞铺展后有明显的生长晕,中后期原肠胚细胞较易达到半汇聚状态.值得注意的是,中国明对虾囊胚细胞在不同培养液中培养可发生形态上的分化.本实验方法有望用于对虾细胞分化机理和对虾细胞建系的研究. 相似文献
2.
运用扫描电镜和透射电镜对马氏珠母贝（Pinctada martensii D0外套膜组织培养过程中各种细胞的生长变化和活动状况的研究，重点是对上皮细胞分泌活动的观察。最初从外套膜组织迁出的上皮细胞为圆球形，细胞表面近似光滑，但有走向规则细而浅的花纹；培养到第4天，上皮细胞形态上发生了较大的变化，分成A型和B型两种细胞，A型上皮细胞内颗粒物少，是处于合成分泌物的早期阶段或尚未开始合成分泌物，B型上皮细胞处于旺盛的分泌物合成阶段，细胞内粗面内质网和线粒体丰富。培养到15－16天的B型上皮细胞体积明显变大，细胞合成并聚集了大量单层膜包裹的颗粒物，培养到第31天的B型上皮细胞分泌活动减弱，上皮细胞逐渐失去分泌功能，进入衰老，死亡，胞体明显萎缩变小，整个培养过程持续了65d。 相似文献
3.
用透射电镜技术研究了秀丽白虾精子发生过程中早期生精细胞的结构特征。结果表明：精原细胞可分为原始型和发育型两种。原始型精原细胞体积较小，形状不规则，整个细胞呈现极高的电子密度，胞质中线粒体多。早期发育型精原细胞度过非繁殖期后开始生长，内质网、线粒体增多。初级精母细胞胞质中细胞器结构典型，数量达到最多。次级精母细胞期，线粒体开始解体并相互融合；高尔基体、内质网形态不典型，胞质中充满了不规则的囊泡。 相似文献
4.
采用改良的DMEM(HG)培养基,建立了近江牡蛎(Crassostrea hongkongensis)鳃细胞体外培养技术,包括鳃组织块培养法和胰酶消化培养法。结果表明,组织块培养法接种6 h后,细胞开始从组织块中迁出,细胞形态较小,呈圆形、椭圆形或多边形,直径3～6μm。培养至3 d时,细胞在组织块周围形成生长晕。培养至6 d时可进行细胞传代,本次实验细胞已传至第6代。胰酶消化法接种约2 h后,细胞逐渐贴壁,从形态上主要分为两类,一类为小型细胞,形态为圆形、椭圆形或多边形,直径3～6μm,数量多,增殖速度较快;另一类为大型细胞,形态为圆形、椭圆形或多边形,直径10～20μm,部分细胞内部含有颗粒,数量较少,增殖速度较慢。培养至2 d时可进行细胞传代,传代培养物中的优势细胞皆为小型细胞。本次实验细胞已传至第6代。 相似文献
5.
将哈维氏弧菌SF1接种在自然海水中低温诱导进入活的非可培养状态,用添加营养物质后升温培养的方法进行复苏。用透射电镜观察不同状态哈维氏弧菌细胞形态和结构,研究哈维氏弧菌复苏后对不良环境的抵抗力,用RT-PCR检测丝氨酸蛋白酶基因Ser和rpoS基因的表达。结果表明,进入VBNC状态的哈维氏弧菌由杆状变为球状,体积比正常细胞小,复苏后恢复正常形态且对紫外辐射,热激的抵抗能力没有明显改变,对高渗透压的抵抗力减弱,而对冷激的抵抗力增强。复苏后的哈维氏弧菌对抗生素的敏感性没有改变。用RT-PCR未检测到在VBNC状态时Ser和rpoS基因的表达,而在复苏后的细胞均检测到该基因的表达,可能是其保持致病性的重要原因之一。 相似文献
6.
《中国海洋大学学报(自然科学版)》2010,(Z1)
溶藻胶弧菌广泛分布于海洋环境,是海洋生物及人类的条件性致病菌。溶藻胶弧菌在不良环境进入活的非可培养状态,当条件适宜时复苏为可培养形式。本文研究了溶藻胶弧菌由活的非可培养状态复苏为可培养状态时的生理特征及对斑马鱼的致病性,结果发现复苏为可培养状态的溶藻胶弧菌对紫外辐射、热激、冷激的抵抗力没有明显改变。用RT-PCR未检测到VBNC状态溶藻胶弧菌tox S和tox R基因的表达,而复苏后的细胞检测到这些基因的表达。复苏后的溶藻胶弧菌对斑马鱼的LD50为6.25×106CFU/尾,与野生菌株(LD50为4.80×106CFU/尾)没有显著差别。 相似文献
7.
该文报道在中国对虾淋巴组织培养细胞中发现了一种立克次氏体 ,大小 0 .2～ 0 .9μm,具有链状、双球状、亚铃状等多形性 ,存在于细胞质中。在感染细胞中有大量包涵体样的结构 ,包涵体周围包有一层膜 ,膜内存在大量不同形态、大小和电子密度的立克次氏体。在包涵体之外 ,也可观察到许多散在的立克次氏体。感染立克次氏体的细胞 ,都不同程度地出现细胞病变 ,表现为核膜溶解 ,核染色质凝聚 ,部分线粒体膜溶解 ,粗面内质网水肿。 相似文献
8.
间接免疫荧光抗体技术检测活的非可培养状态的副溶血弧菌 总被引：5，自引：0，他引：5
副溶血弧菌 (Ｖｉｂｒｉｏｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ)是在海洋及盐湖环境中分布极为广泛的一种致病性嗜盐细菌 ,一般在冬季用常规方法不易将其检出［１］,并且在冬季的暴发频率和发病水平都远远低于夏季。Ｗｏｌｆ和Ｏｌｉｖｅｒ于１９９２年 ,Ｊｉａｎｇ等［３］均发现副溶血弧菌在低温贫营养的条件下可进入活的非可培养状态 (ＶｉａｂｌｅＢｕｔＮｏｎｃｕｌｔｕｒａｂｌｅＳｔａｔｅ,ＶＢＮＣ),即细菌处于不良环境条件下 ,细胞缩成球形 ,用常规方法培养不能使其生长繁殖 ,但仍然是活的一种特殊存活形式［１］。作者在对副溶血… 相似文献
9.
星虫动物利用体腔液中的多种细胞完成呼吸、免疫、生殖等功能,部分种类体腔中有一类能依靠纤毛摆动、在体腔液中自由"游动"的"壶状细胞复合体"(urn cell complex,UCC)。利用光学显微镜和透射电子显微镜,观察了裸体方格星虫体液内UCC的形态、结构和细胞组分,结果显示:UCC占体腔液细胞总数的0.1%~0.4%,由位于前端的泡状细胞(vesicular cell)和位于基部能分泌粘液的纤毛细胞(ciliated cell)构成。泡状细胞呈帽状,长径为10~33μm,短径为8~25μm,内有一泡状体占据了细胞绝大部分体积,泡状体内含物均匀,电子密度低;位于细胞膜下有一或两个核,核内具团块状异染色质;细胞器极少。纤毛细胞呈扁平状,核大且位于正中,核仁明显,异染色质少;内质网和高尔基体发达,有大量分泌泡;线粒体丰富;细胞边缘有大量纤毛,具有典型的微管结构。泡状细胞质中仅有少量非网状细胞骨架,细胞形状多变;纤毛细胞骨架结构发达,尤其在纤毛着生区域。在UCC内部发现了多糖成分,泡状细胞主要含有酸性多糖,纤毛细胞则含有中性和酸性混合多糖。经对照实验发现,壶状细胞复合体内不存在碱性磷酸酶(AKP)和酸性磷酸酶(ACP)。实验结果说明,UCC可通过分泌粘液收集体液中的细胞碎片、异体杂质等,但是不具有细胞内消化的能力,其运动的动力由纤毛细胞提供。 相似文献
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活的非可培养状态霍乱弧菌的复苏 总被引：1，自引：0，他引：1
将活的非可培养状态的霍乱弧菌（ＥＩＴｏｒ生物型）注入兔肠结扎段中，通过兔肠可以使休眠的霍乱弧菌复苏，恢复成为可培养状态．复苏的霍乱弧菌具有很强的毒力，使兔肠结扎段肿胀、积水、内壁紫红色并出现溃疡。结扎段积液中含有约１０９ｃｅｌｌｓ／ｍｌ细菌。 相似文献
12.
霍乱弧菌的越冬方式—活的非可培养状态及其检测方法 总被引：3，自引：0，他引：3
霍乱弧菌是河口与海洋环境中自然微生物区系的成员。霍乱弧菌在诸如低温、低盐和低营养物浓度的不良环境条件下,可以变成非可培养状态。利用活菌直接镜检技术和免疫萤光抗体染色技术证明,霍乱弧菌是活的非可培养状态。实验还证明霍乱弧菌的越冬是通过活的非可培养状态实现的。 相似文献
13.
间接酶联免疫吸附技术检测活的非
可培养状态的大肠杆菌O157：H7 总被引：2，自引：0，他引：2
大肠杆菌O157H7在低温贫营养的条件下可进
入活的非可培养状态（Viable but nonculturable state,VBNC），用常规的培养法无法将其检出。作者利用间接酶联免疫吸附技术（Indirect
Enzyme-Linked Immunosorbent Assa y, ELISA）检测VBNC的大肠杆菌O157H7，发现此方法可以快速有效地将其检出，最小检测
浓度为10 相似文献
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环丙沙星作DNA抑制剂应用于活菌直接计数 总被引：2，自引：0，他引：2
Yao Fei 《中国海洋大学学报(自然科学版)》2000,30(Z1):159-165
参照Isabel方法用不同浓度的环丙沙星(Ciprofl oxacin),处理两株革兰氏阳性菌;北京棒状杆菌(Corynebacterium pakinense);枯草芽 孢杆菌(Bacillus subtilis)和两株革兰氏阴性菌：霍乱弧菌(Vibrio cholerae)和大肠杆 菌 O157：H7(Escherichia coli O157:H7)。结果发现经乳酸环丙沙星处理后的细菌形 态均变长变大,计数结果表明环丙沙星处理的细菌的活菌直接计数与用萘啶酮酸(Nalidixic acid)处理的活菌直接计数法(DVC)结果相似,高于平板菌落计数结果,而且对部分革兰氏 阳性菌也可应用此法进行活菌直接计数。 相似文献
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致病性鳗弧菌W-1外膜蛋白ompU基因克隆及在大肠杆菌中的表达 总被引：1，自引：1，他引：1
从致病性鳗弧菌W-1基因组DNA扩增并克隆了1 156bp的特异性片段,含有完整的外膜蛋白ompU基因阅读框,由993个核苷酸组成,编码330个氨基酸残基的蛋白质。与国外已发表的鳗弧菌外膜蛋白基因的序列同源性为100%,与创伤弧菌(Vibrio vulnificus)、霍乱弧菌(Vibrio cholerae)、费氏弧菌(Vibrio fischeri)和副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)的序列同源性分别为72%,69%,68%和64%。将该外膜蛋白基因克隆于pBV220表达质粒,在大肠杆菌中得到了表达,SDS-PAGE分析表明表达蛋白分子量约38kDa,Western blot分析发现表达蛋白能与鳗弧菌外膜蛋白抗体很好的反应。 相似文献
16.
17.
《Oceanologica Acta》1998,21(6):951-964
In an attempt to synthesize conceptual and experimental information on the behaviour of enteric bacteria in seawater, a mathematical model has been developed. This model is based on changes in intracellular metabolisable components depending on physiological responses of the cell when subjected to nutrient starvation, salinity stress and solar radiation. Following a strategy which takes into account short- and mid-term physiological adaptation and reversal processes, the cells can develop in different states: culturable (B1), viable and definitively nonculturable (B2), and reversibly dormant (B3) cells. Model parameters were deduced either from original microcosm experiments, from literature data or calibration procedures. Validation of the model was performed through specific data on the patterns of change in culturable cell abundances when Escherichia coli populations were subjected to separate or simultaneous experimental stresses. It was shown that model simulations fit these data satisfactorily. Simulation results clearly show the effectiveness of the antistress response and the importance of dormancy which confers higher resistance properties. The model also makes it possible to test the effect of the different stresses, and the role of pre-adaptation with regard to the dynamics of the different cellular states. 相似文献
18.
溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)、哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolytic-us)是引起大黄鱼(Pseudosciaena crocea)溃疡病的3种主要致病菌.将试验大黄鱼随机分成4组,分别腹腔注射哈维氏弧菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌和灭菌生理盐水,在感染后的不同时间采样,通过白细胞数量、白细胞分类计数、NBT阳性细胞数量以及溶菌酶活力的变化趋势来探讨3种致病弧菌感染对大黄鱼非特异性免疫功能的影响.结果表明,大黄鱼各项血液指标的变化主要发生在感染后的1～7 d.在人工感染的初期,各实验组大黄鱼外周血的白细胞数量、NBT阳性细胞数量呈现先增加后降低的趋势,淋巴细胞、嗜中性粒细胞百分比显著降低(p<0.05),单核细胞百分比显著提高(p<0.05);随着时间的延长,白细胞数量开始下降;淋巴细胞、嗜中性粒细胞百分比有所上升,7 d以后各类血细胞数量变化不显著.其中哈氏弧菌感染组在白细胞数量、NBT阳性细胞数量等多个指标上的变化最为明显.血清中溶菌酶活性显著高于脾组织,鱼体受感染后两者溶菌酶活性均较对照组有显著提高,不同致病菌与大黄鱼非特异性免疫功能之间呈现一定的时效差异.研究认为反映鱼体受感染后从应激反应发生至非特异性免疫功能的发挥主要发生在病原菌感染前期,不同致病菌与大黄鱼非特异性免疫功能之间呈现一定的时效差异. 相似文献
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Ben Kahla-Nakbi A Besbes A Chaieb K Rouabhia M Bakhrouf A 《Marine environmental research》2007,64(4):469-478
The aim of this study was to evaluate the survival responses of four strains of Vibrio alginolyticus in seawater under starvation conditions. We used microcosms containing sterilised seawater and incubated at ambient temperature (22-25 degrees C). V. alginolyticus maintained its culturability for at least nine months. Long-term-starved cells showed an absence or a decrease in their enzymatic activities. Resuscitation assays of viable but non-culturable (VBNC) cells were conducted and the recovery of these cells was achieved after the addition of nutrients. Amplified 16S ribosomal DNA (rDNA) restriction analysis (ARDRA) was used to confirm that the same strain of V. alginolyticus persisted in all microcosms during a long period of time. Starved cells maintained their infectivity for gilt head sea bream (Sparus aurata) and sea bass (Dicentrachus labrax) as determined by intraperitoneal challenges. 相似文献