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采用中性溶菌结合超速离心的方法,从链霉菌ＦＲ－００８中直接提取了完整的１３０ｋｂ的大一质粒ＰＨＺ２２７,经蛋白酶Ｋ和限制性内切酶处理后,进行强迫克隆,生内切酶酶解和杂交实验证实已克隆到大线性质粒ＰＨＺ２２７的末端。 相似文献
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白斑综合症杆状病毒（WSBV）PCR检测方法的改进及应用 总被引：7，自引：0，他引：7
斑节对虾Ｐｅｎａｅｕｓ ｍｏｎｏｄｏｎ白斑综合症是由白斑综合症杆状病毒（ＷＳＢＶ）所致。患有典型斑综合症的斑节对虾,用两种提取病毒模板ＤＮＡ的方法,进行ＰＣＲ扩增：一咱是用传统的方法,即蛋白酶Ｋ,ＣＴＡＢ等消化,酚／氯仿抽提,乙醇沉淀得到ＤＮＡ;另一咱是用改进的煮沸法提取病毒ＤＮＡ。对比发现且一种方法稳定性及敏感性比前者高,重复性好。用后一种方法对病虾 的复眼进行检测,ＰＣＲ结果为阳性。应用后一种 相似文献
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微绿球藻(Nannochloropsis oculata)DNA被提取纯化并经超声波处理后,将所得大小在1.6~3 kb之间的DNA片段用T4 DNA聚合酶补平,再与SmaI酶切消化并经去磷酸化处理的质粒载体pUC18连接,转化至DH10B大肠杆菌(Escherichia coli)的感受态细胞中。建立的DNA质粒文库容量含2×104个克隆,其中重组子占90%。随机挑选白色菌落并培养,抽提的质粒经XbaI和SacI双酶切鉴定,显示重组的质粒中均含有大小不等的DNA插入片段。 相似文献
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大黄鱼高质量基因组DNA的简便提取方法 总被引：9，自引：0，他引：9
目前常用的分子标记技术如ＲＡＰＤ、ＡＦＬＰ、微卫星等都是以ＤＮＡ为研究对象 ,而高质量ＤＮＡ的简便快速提取是至关重要的 ［１］。大黄鱼 (Ｐｓｅｕｄｏｓｃｉａｅｎａｃｒｏ ｃｅａ（Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ）)曾是我国著名的四大海洋渔业对象之一 ,也是目前闽浙两省重要的经济养殖品种。近年来养殖大黄鱼普遍出现生长缓慢、抗病能力弱、性成熟提早、个体小等生物学性状退化的现象［２］。为了从ＤＮＡ水平上研究大黄鱼遗传多样性 ,为养殖大黄鱼种质的改良和养殖业的健康持续发展提供依据 ,我们首先要从大黄鱼组织中提取基因组ＤＮＡ。… 相似文献
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将凡纳滨对虾(litopenaeus vannamei)血淋巴细胞中提取的总RNA,经RT-PCR扩增溶菌酶基因(LvLys 基因)的开放阅读框,将其克隆至pMD18-T并测序.用限制性内切酶BamHⅠ和HindⅢ双酶切取目的基因并与表达载体pET-28a(+)连接,构建重组质粒pET-28(a+)/LvLys,转移到BL21(DE3)中诱导表达.经亲和纯化得到凡纳滨对虾重组溶菌酶.抑菌活性检测表明重组溶菌酶对大肠杆菌TOP10有一定抑制作用. 相似文献
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坛紫菜微卫星DNA序列的筛选 总被引：4，自引：0，他引：4
自坛紫菜(Porphyrahaitanensis)丝状体中提取的DNA,经Sau3AI限制性内切酶消化后,将300~900bp之间的DNA片段回收,并连接到经BamHI酶切并去磷酸化的pUC18载体上,最后转化至大肠杆菌JM109感受态细胞中,构建坛紫菜小片段DNA质粒文库。选用pUC18质粒的通用引物进行PCR反应,对文库进一步筛选并检测插入片段的大小,在384个阳性克隆中,有278个含有大小合适的插入片段。经测序及序列分析,在103个克隆中获得172个微卫星序列,其中完美型107个,占62.2%,非完美型53个,占30.8%。(GC)n与(CG)n在坛紫菜DNA中非常丰富,分别占25%及17%,但重复频率相对较低。 相似文献
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牙鲆不同组织中抗蛋白酶物质活性研究 总被引：2，自引：0，他引：2
病原菌在侵袭宿主时 ,往往要分泌一些胞外酶 ,这些酶在感染过程中能够协助病原菌抗吞噬或进行扩散［１］。Ｉｎｇｌｉｓ等１９９３年认为 ,一些海洋中生活的细菌在侵袭鱼体时 ,同样能够分泌多种蛋白酶。实验表明 ,这些侵袭性酶的活性能够被鱼体内一些抗蛋白酶活性物质所抑制。通过检测这些物质对于胰蛋白酶的抑制作用 ,可以定量地测定这些抗蛋白酶物质的活性［２］。本实验以１龄牙鲆为实验对象 ,检测了牙鲆体表黏液、腮、血清中抗蛋白酶物质的分布和活性。１材料和方法１．１牙鲆的饲养实验用牙鲆由中国科学院海洋研究所实验海洋生物学开放… 相似文献
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众所周知,提取高纯度和完整的ＲＮＡ是开展鱼类胚胎发育分子生物学的前提。据Ｓａｍｂｒｏｏｋ,Ｊ．等１９８９年,Ｃｈｏｍｃｚｙｎｓｋｉ,Ｐ．等１９８７年报道,分离动物细胞质的总ＲＮＡ主要是在强变性试剂,如：盐酸胍、异硫氰酸胍,或在含有蛋白酶Ｋ的缓冲溶液中,通过匀浆细胞来分离和提取细胞质的总ＲＮＡ。用这类方法提取的总ＲＮＡ往往受少量ＤＮＡ的污染,可能在构建ｃＤＮＡ文库和反转录聚合酶链式反应中引起混乱。用无ＲＮＡ酶的ＤＮＡ酶处理提取的总ＲＮＡ也不是十分理想的方法,为克服以上方法的缺陷,本文在已有的鱼类胚… 相似文献