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1.
转基因水生动物的应用研究 总被引：1，自引：0，他引：1
<正>1966年Lin首次报道了将外源基因注入小鼠卵中的显微注射方法[1]。1982年诞生了首例转基因动物——转基因小鼠[2]。1984和1985年转基因虹鳟[3]和鲫鱼[4]研究获得成功。经过二十多年来的努力,转基因水生动物尤其是转基因鱼的研究有了长 相似文献
2.
转基因技术是一种快捷改良种质的手段。自朱作言等[1] 培育出世界上首例转基因鱼以来 ,转基因鱼的研究方法已取得了很大进展 ,主要包括显微注射、ES细胞基因打靶、反转录病毒介导等。在这三种方法中 ,显微注射生产转基因鱼已成为传统、可靠的手段 ,但需要复杂的仪器设备和熟练的操作技术 ,同其它两种方法一样 ,转基因效率低 ,不利于开发利用。因此 ,寻找一种更为简便、高效和广泛适用的转基因鱼方法就成了转基因研究者所关心的目标。以精子作为外源基因的载体 ,通过人工授精将外源基因导入动物胚胎 ,从而将外源基因带入子代的基因组中而实… 相似文献
3.
《广东海洋大学学报》2017,(3)
以Fat-1转基因小鼠和野生型C57BL/6小鼠为研究对象,经侧脑室注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导中枢炎症模型,测定抑郁样行为糖水偏好度和悬尾实验、腹腔巨噬细胞活性及其吞噬能力、脑炎症小胶质细胞的标记物CD11b基因与蛋白的表达水平,用以研究Fat-1对LPS诱发的炎症和抑郁样行为的作用。结果表明:在野生型小鼠中,LPS降低小鼠糖水偏好度,延长悬尾静止不动时间,增加腹腔巨噬细胞的活性和吞噬能力,上调CD11b基因和蛋白表达水平;而LPS不能引起Fat-1转基因小鼠出现上述类似变化。侧脑室注射LPS可引起野生型小鼠炎症反应和抑郁样行为,而Fat-1转基因小鼠可通过脑内和体内合成n-3 PUFAs抵抗LPS诱发的上述抑郁样变化。 相似文献
4.
探索肿瘤生长性别差异的原因。研究雌激素及其拮抗剂他莫昔芬对可移植性小鼠肉瘤180生长的影响;采用同位素方法,证实了完整小鼠腹腔巨噬细胞对3H-雌二醇的特异性细胞内结合。肯定了小鼠腹腔巨噬细胞是一种雌激素受体阳性细胞。雌性小鼠肿瘤生长速率比雄性小鼠低是因为雌性激素激活了雌激素受体阳性的巨噬细胞的缘故。 相似文献
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探索肿瘤生长性别差异的原因。研究雌激素及其拮抗剂他莫昔芬对可移植性小鼠肉瘤１８０生长的影响;采用同位素方法,证实了完整小鼠腹腔巨噬细胞对＾３Ｈ－雌二醇的特异性细胞内结合。肯定了小鼠腹腔巨噬细胞是一种雌激素受体阳性细胞。雌性小鼠肿瘤生长速率比雄性小鼠低是因为雌性激素激活了雌激素受体阳性的巨噬细胞的缘故。 相似文献
6.
《广东海洋大学学报》2018,(6)
【目的】建立圆红冬孢酵母的高效电转化方法,为利用圆红冬孢酵母重组表达功能性基因提供方法基础。【方法】以圆红冬孢酵母作为受体菌,将具有潮霉素抗性标记的改造质粒p CAMBIA1301-KCS通过电转化的方式导入到受体菌中,研究酵母细胞培养时间(2、8、14、20、26 h)、电击电压(1、1.5、2.0、2.5、3.0 kV)、前处理剂种类(DTT、LiAc、CaCl2、H2O)对转化效率的影响。【结果】当培养时间为20 h [培养液D(600 nm)约为1.6]、电击电压为2.0 kV、前处理试剂为DTT时,该系统转化率最高可达到20.8×104 cfu/μg。【结论】采用电击法将环状质粒转化入圆红冬孢酵母,能够成功实现外源基因的遗传转化,采用优化的转化条件可以获得较高的转化效率,是过去相关报道最高转化率的100倍。 相似文献
7.
以大豆病基因类似物(RGA)基因为对照,用RR大豆中的外源CaMV35S启动子、CP4-EPSPS引物,应用多重PCR方法,从RR大豆中扩增出预期大小的DNA片段。结果表明:将扩增产物回收后测序,经同源性分析扩增产物为CaMV35S启动子和CP4-EPSPS的一部分序列;多重PCR检测的灵敏度为0.08%;PCR检测过程中产生假阳性的原因是污染和非特异性扩增。 相似文献
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以大豆病基因类似物(ROA)基因为对照,用RR大豆中的外源CaMV35S启动子、CP4-EPSPS引物,应用多重PCR方法,从RR大豆中扩增出预期大小的DNA片段.结果表明:将扩增产物回收后测序,经同源性分析扩增产物为CaMV35S启动子和CP4-EPSPS的一部分序列;多重PCR检测的灵敏度为0.08%;PCR检测过程中产生假阳性的原因是污染和非特异性扩增. 相似文献
9.
为探究溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)ZJ03株Ⅲ型分泌系统(Type III secretion system,T3SS)注射装置蛋白VscO作为疫苗候选抗原的可能性,根据GeneBank上登陆的溶藻弧菌VscO序列(NO.KJ179947),设计1对带酶切位点的特异性引物,PCR扩增vscO基因,序列分析结果显示,该基因全长462 bp,理论分子质量为18.430ku。将vscO基因定向插入原核表达载体pET-28a(+),构建重组表达质粒pET-vscO。用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后,可在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中表达分子质量约为22 ku的VscO融合蛋白,且该蛋白主要以包涵体形式存在。VscO蛋白表达和纯化的最优条件为:0.1 mmol/L IPTG、37℃条件下诱导4 h,咪唑洗脱浓度为400 mmol/L。用纯化后的融合蛋白免疫SPF级小鼠,获得高效多克隆抗体。Western-blotting结果表明,鼠抗VscO血清既能与重组VscO蛋白发生反应,也能与分离自溶藻弧菌约22 ku的天然蛋白发生反应,提示T3SS注射装置蛋白VscO可能是溶藻弧菌的重要保护性抗原之一。 相似文献
10.
转基因水稻恢复系产量构成性状的杂种优势分析 总被引：1，自引：0，他引：1
为探明转抗真菌蛋白基因水稻的杂种优势利用价值,选用6个转基因的水稻恢复系与多个不育系杂交,计算转基因水稻恢复系杂种一代的超父优势、超原种优势和单株产量竞争优势,并对其产量构成性状进行相关与通径分析。结果表明:不同品种或同一品种的不同转基因株系间的超父优势表现不同,整体上优势较明显的性状是有效穗数和单株产量;七丝软占转化后代的杂种F1普遍存在显著正向超原种优势,而E32转化后代所配杂种的超原种优势则较多表现为负值;产量竞争优势分析结果则表明转基因水稻选配优良组合几率并不比常规育种方法低,其中E10、EF38的杂种F1存在较强的产量竞争优势;对转化后代杂种F1的单株产量贡献最大的性状依次为有效穗、穗实粒数和千粒重。 相似文献
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为探明转抗真菌蛋白基因水稻的杂种优势利用价值，选用6个转基因的水稻恢复系与多个不育系杂交，计算转基因水稻恢复系杂种一代的超父优势、超原种优势和单株产量竞争优势，并对其产量构成性状进行相关与通径分析。结果表明：不同品种或同一品种的不同转基因株系间的超父优势表现不同，整体上优势较明显的性状是有效穗数和单株产量；七丝软占转化后代的杂种F1普遍存在显著正向超原种优势，而E32转化后代所配杂种的超原种优势则较多表现为负值；产量竞争优势分析结果则表明转基因水稻选配优良组合几率并不比常规育种方法低，其中E10、EF38的杂种F1存在较强的产量竞争优势；对转化后代杂种F1的单株产量贡献最大的性状依次为有效穗、穗实粒数和千粒重。 相似文献
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采用四甲基偶氮唑盐(MTT)微量酶反应比色法检查赤魟三种组织(皮肤、软组织和软骨)粗提物对体外培养的人癌细胞生长的影响,用腹腔注射或灌胃法检查赤魟三种组织粗提物对小鼠移植性肉瘤180(S180)和肝癌(H22)生长的影响。结果表明,赤魟组织粗提物对体外培养的人早幼粒白血病细胞(HL-60)、人子宫颈癌细胞(HeLa)和人低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)的生长无明显影响,赤魟组织粗提物无论腹腔注射还是灌胃均显著抑制小鼠肉瘤和小鼠肝癌的生长,且对体重无明显影响;当三种组织粗提物以500mg/kg/d(相当生药量,下同)的剂量连续腹腔注射(ip)15d时,对S180的抑制率分别为63.9%、47.2%和80.3%;以3500mg/kg/d连续灌胃(ig)15d时,对S180的抑制率分别为66.9%、61.5%和66.9%;以500mg/kg/d连续腹腔注射15d时,对H22的抑制率分别为43.3%、43.3%和80.4%。 相似文献
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将大口黑鲈(Micropterus salmoide)肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)前肽(MSTN-Pro)的cDNA定向克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-)/mycHisB中,双酶切检测和测序鉴定证实,插入pcDNA3.1(-)/mycHisB载体中的片段为目的基因的核苷酸序列,MSTN基因前肽cDNA为正向插入,且重组质粒无错配或插入移位等突变。采用肌肉注射法将重组表达质粒注入大口黑鲈背部肌肉组织,在注射后第2天经RT-PCR检测到MSTN前肽基因mRNA的表达,第6天经免疫组化学检测到MSTN前肽蛋白的表达,第8天蛋白表达强度增强,对照组始终未检测到MSTN前肽基因的表达。 相似文献
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随机扩增多态性 DNA(Random Amplified Polymorphic DNA,RAPD)是 90年代初在聚合酶链反应 (PCR)技术基础上发展起来的一项 DNA多态性检测方法。其特点是简便快捷、一次可探测多个位点 ,无需知道被检 DNA的核苷酸序列信息。这一技术已被广泛用于动植物的研究 ,但在软体动物类的应用 ,国内外的报道都较少。本文报告用 RAPD技术检测我国最重要的海产珍珠贝之一——合浦珠母贝 (Pinctada fucata)基因组 DNA多态性的研究结果。1 材料和方法1 .1 实验材料合浦珠母贝分别采自北部湾和大亚湾的野生种群 ,两地各用贝 3 0个 ,贝龄 1～ 4… 相似文献
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应用PCR技术扩增16S rRNA基因和amoA(ammonia monooxygenase subunit A)的基因片段,并测定其序列,对一株源于海水养殖水体的高效氨氧化细菌(ammonia-oxidizing bacteria,AOB)进行了系统发育分析。结果表明,经PCR扩增得到了1 098 bp的16S rRNA基因片段和491 bp的amoA基因片段,将其序列用NCBI-Blast软件在GenBank数据库中进行同源性检索后发现,该菌株的16S rRNA基因序列和amoA基因序列分别与亚硝化单胞菌Nitrosomonas sp.NS20的相对应基因片段相似性分别为98.4%和96.7%。在此基础上构建了系统发育树,表明用该菌株的16S rRNA基因片段和amoA基因片段构建的系统发育树均与亚硝化单胞菌属类聚在一起,结合该菌株形态和生理生化特性,鉴定该株氨氧化细菌属亚硝化单胞菌。 相似文献
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注射黄芪多糖对吉富罗非鱼c型溶菌酶基因表达量的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
将黄芪多糖(APS)用无菌生理盐水配制成2 mg/mL和20 mg/mL针剂,腹腔注射吉富罗非鱼,以注射无菌生理盐水为对照。24 h后分别提取吉富罗非鱼鳃、头肾、肝脏、脾脏等组织中的总RNA并反转录成cDNA,利用Real-time PCR方法对不同组织中基因表达进行定量分析。结果表明:吉富罗非鱼腹腔注射20 mg/mL高剂量APS后,其鳃、头肾、肝脏等三个组织中的Lysozyme-c基因表达量显著高于对照组(P<0.05);注射2 mg/mL低剂量APS后,Lysozyme-c基因表达量仅在脾脏中出现显著上调(P<0.05)。APS可通过诱导Lysozyme-c基因在鳃、头肾、肝脏和脾脏等组织在的表达量,来提高吉富罗非鱼的机体免疫力。 相似文献
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用RT-PCR和RACE方法,从荷那龙罗非鱼(Oreochromis hornorum)垂体中克隆到生长激素促分泌素受体(GHSR)cDNA全序列。荷那龙罗非鱼GHSR基因具有GHSR-1a与GHSR-1b两个高度保守cDNA序列。GHSR-1a序列全长1 646 bp,包括225 bp的5′非编码区,266 bp的3′非编码区和1 155 bp的开放阅读框,编码384个氨基酸残基,具有7个跨膜结构域结构(transmembrane domains,TM);GHSR-1b序列全长1 877 bp,包括225 bp的5′非编码区,755 bp的3′非编码区和897 bp的开放阅读框,编码298个氨基酸残基,只具有前5个TM,在第6个TM的第4个氨基酸处开始缺失。将GHSR cDNA序列与基因组序列比较发现,这两种cDNA转录本来自同一个基因的不同变体。 相似文献
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【目的】通过转录组测序分析雌激素(17β-Estradiol,E2)对雌性金钱鱼下丘脑中基因表达的影响。【方法】E2体注射后进行雌性金钱鱼下丘脑转录组测序,基因功能注释,差异基因筛选、鉴定,GO(Gene Ontology annotation)和KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)信号通路富集分析,并利用实时定量PCR(Real-time quantitative PCR,qPCR)检测E2体注射后雌性金钱鱼下丘脑中相关基因的表达。【结果】雌性金钱鱼下丘脑转录组测序共测得Clean reads为190909756,注释到17687个基因,筛选和鉴定了22个差异表达基因,包括prl、erf3α、pgr和cyp19a1b等11个表达上调基因和chsy1、muc17l、prf1和hla-α等11个下调基因。通过KEGG功能富集分析发现差异基因涉及13个代谢通路。转录组和qPCR结果显示,与对照雌鱼相比,E2注射组雌鱼下丘脑中prl、pgr、cyp19a1b和3β-HSDI的表达显著上调,而生长轴相关基因ghrh、sst1、sst3、sst5和sst6的表达未受影响。【结论】E2通过反馈作用调节下丘脑中部分性类固醇激素合成通路相关基因的表达,但不影响生长相关基因的表达。 相似文献
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膨胀石墨化学氧化法制备技术研究进展 总被引：3，自引：0，他引：3
膨胀石墨是石墨的重要深加工产品之一.目前膨胀石墨工业生产用的最多和最成熟的方法是化学氧化法,具有很多优点.由于这种工艺生产过程存在环境污染,产品在应用中对设备有腐蚀,高温抗氧化性及强度不高等原因,限制了其进一步发展.介绍了近年来围绕化学氧化法制备工艺及产品性能改进问题国内外研究的主要进展.讨论了利用低品位和细鳞片石墨原料,降低或消除生产过程中的NOX、重金属离子的污染,降低产品的含硫量和腐蚀性,提高产品的膨胀倍数、抗氧化性和强度,改进产品的膨化工艺等方面的技术措施及应用效果.指出了化学氧化法进一步发展的方向和应用前景. 相似文献
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传统的地勘测量中的测网和地质工程点的测量使用全仪器法进行,特别是DZ／T0153—95《物化探工程测量规范》要求规则物化探测网应用仪器综合法进行布设,不允许用手持GPS定点布设,这是由于DZ／T0153—95在1995年发布时,受当时的技术方法和手持GPS达到的精度限制的结果。 相似文献