墨吉明对虾c型溶菌酶基因的克隆及表达     

《广东海洋大学学报》2017,(3)

克隆并鉴定墨吉明对虾(Fenneropenaeus merguiensis)的一种c型溶菌酶基因(Fm-Lyz),其cDNA全长为770 bp,包括71 bp的5′非编码区(UTR)、222 bp的3′UTR和477 bp完整开放阅读框,编码158个氨基酸。SMART分析显示,Fm-Lyz氨基酸序列包含1个LYZ1结构域和1个含18个氨基酸的信号肽。同源性分析发现,Fm-Lyz与斑节对虾(Penaeus monodon)溶菌酶同源性最高;进化树结果显示,Fm-Lyz与不同对虾的c型溶菌酶聚为一类。实时荧光定量PCR结果显示,Fm-Lyz在所测组织中均有表达,其中在血细胞中表达量最高。副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)和溶壁微球菌(Micrococcus lysodeikticus)感染后,Fm-Lyz表达量比对照组明显上调(P0.05),最高表达量时间分别为感染后24、12 h,暗示Fm-Lyz参与了墨吉明对虾的抗菌免疫防御。  相似文献   

Construction of a muscle cDNA library of Chinese shrimp <Emphasis Type="Italic">Fenneropenaeus chinensis</Emphasis> and sequence analysis of the troponin I gene     

Jitao Li  Ping Chen  Jian Li  Ping Liu  Yuying He  Qingyin Wang 《中国海洋大学学报(英文版)》2010,9(1):81-86

A muscle cDNA library of Chinese shrimp (Fenneropenaeus chinensis) was constructed with the SMART™ cDNA Library Construction Kit. The titer of optimal primary library was 7.7×10⁵ pfu mL⁻¹ and that of the amplified library was 3.0×10⁹ pfu mL⁻¹. The percentages of the recombinant clones of primary and amplified libraries were over 98%. The insert sizes were longer than 400 bp with an average of 1000 bp. A positive clone containing a 794 bp insert was sequenced and identified encoding fast skeletal troponin I gene. This library provided a useful resource for the functional genomic research of F. chinensis.  相似文献   

虚拟技术在地震前兆技术系统中的应用     

胡玉良  程冬焱  李惠玲 《震灾防御技术》2015,10(3):688-694

地震前兆技术系统长期稳定和可靠运行对管理人员来说至关重要,本文以山西前兆台网为例,基于VMware虚拟机搭建了地震前兆技术系统,并利用其快闪及克隆功能实现了地震前兆技术系统的快速备份及恢复,提升了地震前兆技术系统故障应急处置能力。  相似文献   

海洋交替单胞菌（Alteromonas sp. Y-389）普鲁兰酶基因的异源表达与酶学性质分析          下载免费PDF全文

魏家强  高志远  陈颢 《海洋科学进展》2019,37(4)

以海洋交替单胞菌(Alteromonas sp. Y-389)的基因组为模板,设计普鲁兰酶基因的引物并进行PCR扩增。将目的基因连接到载体pET-28a(+)后进行测序并进行生物信息学分析。结果显示,基因的开放阅读框全长4 347 bp,编码1 449个氨基酸的普鲁兰酶,为Ⅰ型普鲁兰酶,有4个保守的结构域,属于糖苷水解酶家族13;将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3),成功诱导出了可溶性的目标蛋白;随后对其酶学性质进行测定与分析,结果表明,该酶的比活力为54.53 U/mg,其最适的反应温度为35℃,最适pH为6.0,Na~+和Mn~(2+)对该酶的活性具有明显的促进作用,而Cu~(2+),Zn~(2+)与Fe~(2+)对其活性的抑制作用比较明显;其酶学参数K_m和V_(max)分别为3.12 mg/mL,228.8 U/mg,将为今后的规模化生产提供数据支持。  相似文献   

人参前胡汤治疗椎动脉型颈椎病痰湿中阻证30例临床观察          下载免费PDF全文

赵致缘  胡辉煌  谢义松 《应用海洋学学报》2020,36(1):42-44

根据研究证明,在机体先天免疫系统中溶菌酶作为重要的效应分子之一,通过参与机体中多种免疫反应,主要是通过形成一个水解体系,从而破坏和消除侵害体内的病原体,进而促使机体实现免疫防御。本研究以生活在深海超深渊海沟极端环境下的钩虾Eurythenes gryllus为材料,首次从Eurythenes gryllus中克隆获得i型溶菌酶(i-type lysozyme)基因EgLyz。序列分析表明,基因EgLyz与已知序列相似性较低,并含有一个失稳酶结构域。综合分析结果表明EgLyz可能是一个新颖的溶菌酶蛋白。在此基础上,对基因EgLyz进行了大肠杆菌原核重组表达,成功获取了较高纯度的可溶性表达产物,为后续生物活性分析奠定了实验基础。  相似文献   

Expression and localization of a novel phosducin-like protein from amphioxus <Emphasis Type="Italic">Branchiostoma belcheri</Emphasis>     

萨仁高娃  赵永刚 《中国海洋湖沼学报》2009,27(2):324-330

A full length amphioxus cDNA, encoding a novel phosducin-like protein (Amphi-PhLP), was identified for the first time from the gut cDNA library of Branchiostoma belcheri. It is comprised of 1 550 bp and an open reading frame (ORF) of 241 amino acids, with a predicted molecular mass of approximately 28 kDa. In situ hybridization histochemistry revealed a tissue-specific expression pattern of Amphi-PhLP with the high levels in the ovary, and at a lower level in the hind gut and testis, hepatic caecum, gill, endostyle, and epipharyngeal groove, while it was absent in the muscle, neural tube and notochord. In the Chinese Hamster Ovary (CHO) cells transfected with the expression plasmid pEGFP-N1/Amphi-PhLP, the fusion protein was targeted in the cytoplasm of CHO cells, suggesting that Amphi-PhLP is a cytosolic protein. This work may provide a framework for further understanding of the physiological function of Amphi-PhLP in B. belcheri. Supported by the Pilot Projects of Knowledge Innovation Project of Chinese Academy of Sciences (No. KZCX2-YW-211-03 and MGE2008KG06)  相似文献   

两个奥利亚罗非鱼群体热休克蛋白70基因序列比对分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

李莉萍  陈明  罗永巨  唐章生  唐瞻杨  陈忠  张永德  曾兰  林勇 《广东海洋大学学报》2009,29(1)

采用RACE技术,对两个奥利亚罗非鱼群体(Oreochromis aurea)(美国奥利亚和中国奥利亚)热休克蛋白Hsp70基因完整编码区(code sequences,CDS)cDNA的进行克隆测序。序列分析结果表明:两个奥利亚罗非鱼群体热休克蛋白Hsp70基因CDS序列完全相同,全长1 923 bp,编码640个氨基酸,相对分子质量为70.29×103,理论等电点5.462,均具有Hsp70家族的3个签名序列:IDLGTTYS、IFDLGGGTFD、VVLVGGSTRIPKIQK;核定位信号标签KRKHKKDISQNKRALRR;Dank特征基序DLGTT-S-V;胞质Hsp70特征基序EEVD;靠近C端的GGMP4肽序列;2个糖基化位点NKSI和NVSA。对所得基因序列与已发表的青锵(Oryzias latipes)等物种Hsp70基因的氨基酸序列进行同源性比较,发现两个奥利亚罗非鱼群体与莫桑比克罗非鱼最高99.4%,与牙鲆最低83.9%;系统进化树分析表明奥利亚罗非鱼的Hsp70 cDNA序列与青鳉等物种的Hsp70基因聚在一支,而与牙鲆的Hsp70基因相分离。  相似文献   

黄鳍金枪鱼巨噬细胞移动抑制因子（MIF）的克隆与序列分析   总被引：2，自引：0，他引：2  

毛勇  王军  张之文  王定  苏永全 《海洋科学》2009,33(9):29-34

采用同源克隆的方法、利用RACE技术从黄鳍金枪鱼(Thunnus albacares)肝脏中克隆了其MIF(TaMIF)的cDNA序列.TaMIF的cDNA全长706 bp含一个345 bp的开放阅读框,编码一个长115氨基酸的蛋白质.信号肽预测分析表明TaMIF没有信号肽.序列分析与进化分析表明,黄鳍金枪鱼与近海养殖鱼类MIF的氨基酸序列高度相似、进化地位相近,预示着深海鱼类TaMIF与近海养殖鱼类具有相似的生物学功能.研究结果是对深海鱼类MIF基因信息资料的重要补充.  相似文献   

大黄鱼β2-微球蛋白基因的克隆及其在大肠杆菌中的重组表达   总被引：1，自引：0，他引：1  

余素红  王玉桥  陈新华 《台湾海峡》2009,28(1):13-18

主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex,MHC）是一类高度多态的基因群,它广泛分布于各种脊椎动物体内,在启动特异性免疫应答中起关键作用．MHC根据结构分为Ⅰ型和Ⅱ型两种．β2-微球蛋白（β2mcroglobulin,β2m）是MHCI型分子的轻链．本文根据大黄鱼β2m的表达序列标签（expressed sequence tags,EST）序列设计合成了特异性引物,利用RT—PCR技术从大黄鱼脾脏组织中克隆了β2m基因（Pscr-β2m）;构建了合β2m因的原核表达载体（pGEX4T-2-β2m,在0．1mmol／dm^3IPTG诱导下重组β2m得到了表达;采用Sepharose 4B亲合层析纯化目的蛋白并制备了抗体;Western—blotting分析证实了该抗体具有与天然大黄鱼脾脏组织中β2m蛋白反应的特性．这些结果为进一步研究鱼类β2m构与功能的关系,以及制备MHCI类分子四聚体奠定基础．  相似文献   

克隆五遍，“9·11”救生犬再获“新生”     

《地图》2009,(4):11-11

日前,美国退役警官詹姆斯·赛明顿带着他的五只“Trakr”在洛杉矶与媒体见面。Trakr原是警察赛明顿的救生犬,它在15岁的一生中战功累累：曾经协助逮捕过上百名逃犯;截获过超过100万美元的赃物：2001年“9·11”搜救行动中更是屡建奇功,在废墟中不知疲倦地搜救幸存者,因为救出了最后一名生还者而闻名美国。由于在“9·11”现场吸入泄漏的有毒气体,Trakr后来患上“衰退性精神障碍”,后腿不能动弹,在两个月前死去。  相似文献