单环刺螠硫醌氧化还原酶间接竞争ELISA检测方法的建立     

马玉彬  史晓丽  李阳  董英萍  张立涛  张志峰 《中国海洋大学学报(自然科学版)》2012,(Z2):64-69

硫醌氧化还原酶(Sulfide:quinone oxidoreductase,SQR),是线粒体硫化物代谢的关键酶。本研究以生活在潮间带下区及潮下带中的底栖生物—单环刺螠SQR重组蛋白为材料,建立了单环刺螠SQR间接竞争ELISA检测方法,为定量分析SQR蛋白水平表达奠定了基础。将SQR重组蛋白免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体,检测效价高达1:64 000。采用免疫印迹实验,将该抗体与重组蛋白和体壁总蛋白杂交,均得到了单一的条带,表明该抗体特异性好。优化SQR间接竞争ELISA检测条件,得出最佳的抗原包被浓度为250ng/mL,一抗浓度为1∶20 000,二抗浓度为1∶12 000,此条件下建立的标准曲线检测范围为2.5～1 000ng/mL。精确度检测结果显示,批内差异在0.42%～7.27%、批间差异在2.58%～7.78%范围内,表明该条件下精确度具有良好的准确性和重复性。以上结果表明,已成功建立单环刺螠SQR间接竞争ELISA检测方法。  相似文献   

基于克隆选择原理的核爆地震特征选择方法   总被引：1，自引：0，他引：1       下载免费PDF全文

韩绍卿  李夕海  刘代志 《地球物理学报》2010,53(8):1829-1836

为了解决核爆地震自动识别中最优特征子集的选择问题,根据克隆选择原理,提出了一种过滤与封装相结合的特征选择方法.该方法融合了封装式与过滤式特征选择方法的优点,利用局部化的类别可分性判据来处理核爆地震样本的多峰分布问题,通过设定独立的记忆抗体能够保证最终结果是搜索过的最佳特征组合,并且可以处理设定和不设定最优特征子集维数两种情况下的特征选择问题.首先通过UCI数据集中呈多峰分布的玻璃数据验证了该特征选择方法的有效性,进而将其应用到核爆地震特征选择中.核爆地震特征选择实验结果表明,该方法不仅有效地降低了特征空间的维数,而且使分类精度提高了2个百分点,与封装式特征选择方法相比,该方法的计算复杂度大为降低.  相似文献   

杭州湾底泥得克隆污染状况及来源的初步研究     

周珊珊  汤巧智 《海洋学研究》2014,32(2):53-58

随着含溴阻燃剂的进一步限用或禁用,氯代阻燃剂得克隆(Dechlorane Plus, DP)以其良好的热稳定性和电化学性能成为推荐的替代品之一。作为添加型氯代阻燃剂,DP很容易从产品中脱落而成为环境中广泛存在的污染物,但相关的研究仍十分匮乏。本研究测定了杭州湾海域4个底泥柱状样品中DP的残留及异构体特征,并对DP在该海域底泥中的时空分布和可能来源进行了初步分析。结果表明,syn-DP和anti-DP在底泥样品中的含量分别为BDL~17.7 pg/g干质量(平均为2.9±3.2 pg/g干质量)和1.4~38.1 pg/g 干质量(平均为8.0±8.5 pg/g干质量),其污染程度相对全球范围处于较低水平。空间分布表明金山工业区可能对杭州湾DP的污染有一定贡献,DP在柱状底泥中的垂直分布未发现明显变化趋势。本研究中DP的f_syn平均值为0.25~0.28,表明研究海域底泥中的DP可能来自于远距离传输。  相似文献   

植物激素对海带配子体克隆附着的影响   总被引：3，自引：0，他引：3  

韩宝芹  崔竞进  刘涛  王霖 《中国海洋大学学报(自然科学版)》2000,30(4)

实验研究 2 ,4 - D、KT、IAA、NAA四种植物激素对海带配子体克隆附着的影响。结果表明 :2 ,4 - D对附着有较明显的促附着作用 ,最有效浓度为 2 .5mg/L 和 5mg/L,其 4 h的附着率分别是对照的 2 .79倍和 2 .95倍 ;KT的作用较复杂 ,在浓度为 1mg/L 时 ,对附着有明显的促进作用 ,其 4 h的附着率是对照的 2 .3倍 ;IAA对配子体附着没有明显的促进或抑制作用 ;NAA对附着有抑制作用 ,浓度越高 ,抑制作用越强。  相似文献   

四种植物生长激素对海带雌配子体克隆生长发育的影响   总被引：3，自引：1，他引：2  

庄岩  戴继勋  崔竞进  潘洁  岳志芹 《中国海洋大学学报(自然科学版)》1999,(2)

以海带（Ｌａｍｉｎａｒｉａｊａｐｏｎｉｃａ）雌配子体克隆ＬＨ１０品系为材料,用４种植物生长激素：三十烷醇（ＴＡ）、２,４－二氯苯氧乙酸（２,４－Ｄ）、吲哚乙酸（ＩＡＡ）和腐植酸钠加以处理,对其生长发育进行了研究。结果表明,它们的最佳生长浓度分别为：ＴＡ,０．０１ｍｇ／Ｌ;２,４－Ｄ０．５ｍｇ／Ｌ;ＩＡＡ,０．５ｍｇ／Ｌ;腐植酸钠,０．５ｍｇ／Ｌ;最佳发育浓度分别为：ＴＡ,０．０１ｍｇ／Ｌ;２,４－Ｄ,１ｍｇ／Ｌ;ＩＡＡ,０．１ｍｇＬ－１;腐植酸钠,０．０５ｍｇ／Ｌ。该研究为加速配子体克隆的生长发育和育苗应用提供了实验依据  相似文献   

微泡菌QZHA1褐藻胶裂解酶MAAL1的酶学性质研究          下载免费PDF全文

闫康路  邵宗泽  王万鹏  谢珍玉  周梅先 《应用海洋学学报》2024,43(2):266-275

为探究Microbulbifer sp. QZHA1褐藻胶裂解(Escherichia coli)酶MAAL1的酶学性质,将褐藻胶裂解酶基因maal1构建至pET-28a表达载体并利用大肠杆菌BL21(DE3)进行异源表达。研究发现：重组酶MAAL1与来源于Microbulbifer sp. ALW1菌株的褐藻胶裂解酶(WP＿23625014.1)同源性最高,为93.69%,且与PL7家族蛋白聚为一支;重组酶MAAL1最适温度为35℃,最适pH为7.5,在pH为5.5～10.5范围内保存24 h仍能保持60%以上的酶活力;MAAL1具备良好的耐有机溶剂特性,在测试的9种有机溶剂中,除异丙醇外,其他有机溶剂在添加量达到30%(体积分数)后,酶活力依然保持在59%以上;重组酶MAAL1最适条件下酶活力为4.3 U/mg,米氏常数(K_m)值为1.08 mg/mL,最大反应速率(V_max)为4.75 mg/(mL·min),催化常数(K_cat)值为4.52 s^-1;重组酶MAAL1对聚β-D-甘露糖醛酸(p...  相似文献   

金钱鱼Zar1基因克隆及其表达分析     

何飞祥  江东能  陈华谱  邓思平  吴天利  田昌绪  石红娟  朱春华  李广丽 《广东海洋大学学报》2019,(2)

【目的】分析金钱鱼(Scatophagus argus)卵巢发育过程重要基因——合子阻滞因子1(Zygote arrest 1,Zar1)组织表达及其在卵子成熟和胚胎发育过程中的表达。【方法】克隆金钱鱼Zar1基因,采用反转录-PCR(RT-PCR)检测其在各组织的分布情况,实时荧光定量PCR(q PCR)研究Zar1在不同卵巢发育时期和胚胎发育过程中的表达。【结果】金钱鱼Zar1的开放阅读框(ORF)序列全长为1008bp,编码335个氨基酸。序列分析发现,金钱鱼Zar1在蛋白C末端高度保守,具有非典型的PHD基序(Plant homeo domain)和锌指结构域。金钱鱼Zar1同源性分析发现,它与鲈形目物种相似度最高,其中大黄鱼(Larimichthys crocea)相似性最高,为85.1%。系统进化树分析显示,金钱鱼Zar1与大黄鱼亲缘关系最近,与其分类地位一致。组织分布发现,金钱鱼Zar1仅在卵巢中表达。Zar1在II、III和IV期卵巢表达呈现逐渐递增趋势,其中IV期表达水平显著高于II期卵巢。Zar1在胚胎发育早期表达较高,后期较低,其中在四细胞期表达水平最高,之后逐渐降低。【结论】金钱鱼Zar1在卵巢和胚胎期表达,在金钱鱼卵子发生和胚胎发育阶段发挥重要作用。  相似文献   

海洋沉积物氨氧化菌群落结构的测序分析     

贺惠  陈阳阳  王勋功  甄毓  米铁柱  于志刚  李迎 《海洋科学》2018,42(8):22-29

本文以氨氧化细菌(ammonia-oxidizing bacteria,AOB)特征基因氨单加氧酶(ammonia monooxygenase,AMO)α亚基基因(amoA)为目标基因(～491bp),分别采用克隆文库、454高通量测序和illumina测序技术对其群落结构进行了比较研究。结果表明, 454高通量测序和illumina测序技术得到的菌群多样性及丰富度均高于克隆文库技术。在菌群组成方面,虽然3种测序技术检测到的优势类群均为亚硝化螺菌,但在菌群丰度方面存在差异。3种测序技术中,克隆文库技术在很大程度上可能高估物种丰度,且对部分低丰度类群的检测能力有限;illumina单端测序由于其测序片段较短,可能存在物种注释错误、不能准确区分各物种间序列差异等问题;比较而言, 454高通量测序技术能较为全面和准确地反映海洋沉积物中AOB的菌群结构特征。  相似文献   

太湖鲂鲌F2代GH基因结构、系统发育和表达特征     

刘加林  贾永义  刘士力  郑建波  迟美丽  程顺  李飞  尹绍武  顾志敏 《海洋与湖沼》2020,51(6):1440-1451

采用PCR及T-A克隆技术，从基因组DNA成功克隆三角鲂、太湖鲂鲌、太湖鲂鲌F₂代含完整阅读框的生长激素基因全序列，经测序拼接获得序列全长分别为6009、6042和6058bp，转录单元长分别为2049、2014和2045bp。三种群体的GH基因序列均包括五个外显子、四个内含子及5''侧翼区和3''侧翼区；编码氨基酸序列均为633bp，编码210个氨基酸。对3个目14种鱼类进行同源性及系统发育分析发现，太湖鲂鲌F₂代与其祖父母的遗传距离相比亲本较近。另取10尾太湖鲂鲌F₂代，对其进行GH基因编码区SNPs筛选，共得到7处SNPs，其中有3处位点的突变导致其氨基酸序列发生了明显的变化；对其蛋白质结构分析发现，突变后的氨基酸残基导致蛋白质二级结构发生改变。我们将该10尾个体按体重分为小个体组和大个体组，经组织表达分析发现，大个体组中的个体具有较高的转录水平，进一步分析发现其氨基酸残基有所不同。  相似文献   

香鱼Apo-14基因的克隆、序列分析及其mRNA表达与盐度适应性的关系   总被引：1，自引：0，他引：1  

曹霄  陈炯  史雨红  陆新江 《台湾海峡》2011,30(2):203-209

14 kDa载脂蛋白（Apo-14）是鱼类一种特有的载脂蛋白,是鱼类高密度脂蛋白（HDLs）的重要成分,其生物学功能目前还不明确.本研究采用简并引物,从香鱼（Plecoglossus altivelis）肝脏cDNA文库中筛选香鱼Apo-14基因,该基因cDNA序列全长905个核苷酸,开放阅读框编码一个有144个氨基酸,分子量约为15.9 kDa的蛋白.香鱼Apo-14基因mRNA主要在香鱼肝脏中表达,在肠、肾和鳃中也有少量表达.同源性分析揭示,香鱼Apo-14与已知鱼类中虹鳟（Oncorhynchus mykiss）Apo-14最相似,氨基酸序列同源性为70%.qRT-PCR表明,咸淡水处理组（盐度为10）的肝、肠、肾、鳃中,该基因mRNA均比淡水处理组（盐度为0）明显下调（p〈0.05）,揭示载脂蛋白Apo-14可能与盐度适应相关.  相似文献