灿烂弧菌粘附相关因子VsA的表达及功能研究     

王奕超  张卫卫 《海洋通报》2019,38(1):70-77

为了探究灿烂弧菌中 Zn2+转运系统的细胞周质组分 VsA 的表达与功能,本实验采用 PCR 克隆 vsA 基因,实时荧光定量测定 vsA 基因的表达,利用抗体封闭实验研究 VsA 蛋白的功能。生物信息学分析表明 VsA 具有结合和转运 Zn2+的结构基础。实时荧光定量结果表明,vsA 的表达受 Zn2+调控,且具有浓度依赖性,0.01 mmol/L 的 Zn2+可使 vsA 的表达量下调至对照组的0.5倍,而添加等摩尔量的 Cu2+、Fe3+、Mg2+和 Ca2+对 vsA 的表达无明显影响。而 0.1 滋mol/L Zn2+则会诱导 vsA 的表达。此外,在大肠杆菌 Escherichia coli BL21 （DE3） 中进行了 VsA 的重组表达,制备了 VsA 的小鼠多克隆抗体。利用抗体封闭 VsA 蛋白可导致灿烂弧菌在 Zn2+限制条件下的生长受抑制,以及过氧化氢的能力和粘附效率的降低。本研究获得了灿烂弧菌的 vsA 基因,其表达受 Zn2+浓度调控,VsA 蛋白在灿烂弧菌生长、抗氧化以及粘附宿主细胞过程中发挥作用。  相似文献   

Molecular analyses of bacterioplankton communities with highly abundant Vibrio clades: a case study in Bohai Sea coastal waters     

WANG Shuping  ZHANG Yuan  HE Jia  JIA Xiaobo  LIN Jianing  LI Meng  WANG Qinglin 《海洋湖沼学报（英文）》2019,(5):1638-1648

We investigated the bacterioplankton abundance, community composition and the associated Vibrio clades of natural seawater in Bohai Sea coastal waters. Seawater samples (10 L in triplicate) were collected at 0.5, 3, and 5 m depths near the coastal aquaculture zone of the Bohai Sea on May 12, 2016. Real-time PCR and 16S rRNA gene amplicon high-throughput sequencing methods were employed by which 485 operational taxonomic units (OTUs) at a 97% sequence similarity level were generated. Gammaproteobacteria, Alphaproteobacteria, and Bacteroidetes were the most abundant groups, accounting for 49.5%, 23.5%, and 18.9% of the total assemblage, respectively. Obvious variations in Pseudoalteromonas, Vibrio, and Octadecabacter , which were the most abundant genera, could be observed among diff erent samples. Notably, the results of Vibrio -specifi c real-time PCR indicated that Vibrio had extremely high 16S rRNA gene copy numbers. The 16S rRNA gene sequencing results across all the samples also indicated that they occupied a large proportion of the total assemblage. Both the alpha diversity and major bacterioplankton group Pseudoalteromonas had significant correlations with the concentration of PO4^3-. Overall, studies on bacterioplankton communities with highly abundant Vibrio clades can provide interesting insight into the microbial function and health assessment of the Bohai Sea coastal ecosystem.  相似文献   

大黄鱼(Larimichthys crocea)白细胞介素10(IL-10)基因克隆及溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)侵染后表达变化分析     

侯红红  苗亮  李明云  郭晓飞  杜静雅  陈炯 《海洋与湖沼》2018,49(6):1334-1340

白细胞介素10(interleukin10,IL-10)是鱼类先天性免疫因子之一,在炎症反应和免疫调节中有着重要作用。本研究获得大黄鱼(Larimichthys crocea)IL-10基因cDNA序列,由899个核苷酸组成,含1个555bp的开放阅读框、编码184个氨基酸,预测编码蛋白分子量为21.24kDa、N端有22个氨基酸组成的信号肽序列。氨基酸序列多重比对表明大黄鱼IL-10具有IL-10家族特征性序列和构成2对二硫键的4个保守性半胱氨酸,与欧洲鲈(Dicentrarchuslabrax)IL-10序列相似性最高(78.5%);系统进化树分析显示大黄鱼IL-10和其他鱼类IL-10形成一个大簇,与欧洲鲈进化关系最近。荧光定量PCR(quantitative real-time PCR, qRT-PCR)检测结果显示健康大黄鱼IL-10基因在鳃和肠中高表达,肝和头肾中低表达;溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)侵染后大黄鱼肠、脑、脾、肝和头肾中IL-10基因表达量均显著上调(P0.05),其中头肾和肝中上调幅度最大(分别为菌侵染前的10.06倍和8.79倍)。综上,大黄鱼IL-10基因表达与病原菌感染密切相关,为深入研究大黄鱼IL-10的生物学功能及免疫机制提供了基础资料。  相似文献   

中国对虾血清中酚氧化酶活力研究   总被引：19，自引：0，他引：19  

李天道  于佳 《海洋湖沼通报》1998,(1):51-56

１９９５年７－９月,以养殖中国对虾为材料,实验室用弧菌菌悬液注射感染对虾,血甭中测得一定量的酚氧化酶（ＰＯ）。正常状态下对虾血清中ＰＯ活力变化不大,而濒死对虾血清中ＰＯ活力变化较大。较低浓度的菌悬液能有效地提高ＰＯ活力,促使有机体对病原体的防御能力,这在实践中有重要意义。  相似文献   

中国对虾复合疫苗的初步研究   总被引：14，自引：0，他引：14  

丁燏  王雷  李光友 《海洋与湖沼》1999,30(4):355-361

于１９９６年１１月－１９９７年５月,运用差异离心,蔗糖梯度离心、柱层析等方法从发病中国对虾分离出杆状病毒并纯化;分别用冷乙酸处理法、十二烷基硫酸钠－苯酚法提取纯化该病毒的结构蛋白与核酸、λＤＮＡ;分别用十二烷基硫酸钠煮沸法、三氯乙酸法纯化孤菌的肽菊聚糖和鸡卵粘蛋白;配制出小牛血清白蛋白、蜗牛凝集素两溶液。然后从超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活力和溶菌活力两种免疫指标分析灭活病毒和以上提取、纯化的７种大分  相似文献   

溶藻弧菌体外刺激泥蚶(Tegillarca granosa)血细胞后早期转录组研究          下载免费PDF全文

钟爱华  王迎宾  毕澜方  徐浩磊 《海洋与湖沼》2023,54(1):286-295

泥蚶(Tegillarca granosa)是我国传统养殖贝类,细菌性疾病导致的死亡已成为制约泥蚶养殖业发展的重要因素,血细胞是泥蚶免疫防御的执行者,血细胞能直接吞噬异物,能通过包囊作用将异物包裹,血细胞还在炎症反应和伤口修复中发挥作用。采用RNA-seq测序技术研究了溶藻弧菌体外刺激后泥蚶血细胞3h和6h时转录组动态变化,与未受刺激血细胞相比,3h时1790个基因表达发生显著改变,包括1319个上调基因和471个下调基因;6h时3183个基因表达发生显著改变,包括2629个上调基因和554个下调基因。KEGG通路富集分析发现溶藻弧菌刺激后免疫相关多个信号通路或生物学过程发生显著改变,如吞噬体、细胞凋亡、蛋白酶体、内质网加工、局部黏附等。部分免疫相关基因表达丰度3h时变化不显著而6h时发生显著改变,部分免疫相关基因3h和6h时表达丰度均显著改变。研究结果为泥蚶血细胞早期免疫反应提供了新的见解,为泥蚶抗病机理研究提供了理论基础。  相似文献   

三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)CTL基因SNP位点E4-205 C/T与抗溶藻弧菌相关性分析     

郝贵杰  林锋  母昌考  雷宁  黄爱霞  崔雁娜  沈亚芳  张海琪  文菁 《海洋与湖沼》2023,54(5):1434-1443

C-型凝集素(C-typelectin,CTL)是甲壳类动物体液免疫中重要的免疫因子之一。但CTL基因在溶藻弧菌对三疣梭子蟹(Portunustrituberculatus)感染的过程中的表达及抗病机制尚有待进一步研究。为初步阐明CTL基因SNP E4-205 C/T位点与抗溶藻弧菌感染相关的分子机制,对不同基因型梭子蟹进行溶藻弧菌感染,通过绝对定量方法分析不同基因型梭子蟹肝胰腺、肌肉组织中溶藻弧菌的复制情况。发现溶藻弧菌感染后12 h内梭子蟹肝胰腺、肌肉组织中C/C组细菌数量显著高于T/T组,结果表明T/T组梭子蟹抗感染能力显著高于C/C组。进一步对该位点非同义突变(ACT-ATT)导致的一个氨基酸改变(Thr-Ile)的两种蛋白进行体外重组表达,并对两种重组蛋白CTL-ATT及CTL-ACT进行活性分析。发现两种重组蛋白对溶藻弧菌生长均具有一定的抑制作用, CTL-ATT的抑菌活性显著高于CTL-ACT。重组蛋白CTL-ATT与PAMPs的结合活性高于CTL-ACT与PAMPs的结合活性,同时两种蛋白与PAMPs和溶藻弧菌的结合活性具有浓度依赖性。结果表明三疣梭子蟹CTL基因参与机...  相似文献   

大黄鱼病原弧菌耐药质粒转移研究   总被引：3，自引：1，他引：2  

鄢庆枇  方恩华  苏永全  王军  庄峙厦 《海洋科学》2004,28(3):44-49

用混合培养法进行耐药质粒从大肠杆菌 (Escherichiacoli)向病原弧菌转移研究 ,结果表明 ,耐药质粒 pBR322和 pBR325可以从大肠杆菌向病原弧菌转移。在混合培养30min后 ,部分弧菌获得耐药质粒 ,质粒的转化率随着培养时间的延长而增大 ;混合培养24h后 ,转化率分别提高至4.62×10-6～1.18×10-5。耐药质粒 pBR322和 pBR325在2株病原弧菌细胞内能较为稳定地遗传 ,在培养初期 (0～1h) ,均未出现质粒丢失 ,随着培养时间的延长 ,有少量细胞因丢失耐药质粒而表现出对药物的敏感性 ;培养72h后 ,质粒 pBR322和 pBR325在副溶血弧菌(Vibrioparahaemolyticus)中的丢失率分别为10 %和9% ,溶藻弧菌(Vibrioalginolyticus)中2种质粒的丢失率分别为22%和19 %。细菌的药敏试验表明不同菌株在获得耐药质粒后对特定药物的抗性大大增强 ,但不同菌株的耐药水平有所不同 ,说明耐药质粒在不同菌株中的表达水平有所不同。  相似文献   

河流弧菌(Vibrio fluvialis)对牙鲆(Paralichthys olivaceus)粘液的趋化和粘附作用   总被引：1，自引：1，他引：0  

鄢庆枇  邹文政  纪荣兴  义家波 《海洋与湖沼》2008,39(4)

采用生长曲线法测定了河流弧菌在牙鲆表皮、鳃和肠粘液中的生长情况,结果表明,河流弧菌在3种粘液中都能生长,生长前期符合Logistic模型,然后进入Gompertz模型,在鳃粘液中的生长量高于肠粘液和表皮粘液。采用毛细管法研究了河流弧菌对牙鲆3种粘液的趋化作用,结果表明,河流弧菌对牙鲆3种粘液具有较强的趋化应答,在粘液总蛋白含量相同的情况下,河流弧菌对牙鲆鳃粘液的趋化应答显著强于对表皮粘液的趋化应答（P〈0．05）,而对肠粘液的趋化应答极显著低于对鳃粘液和表皮粘液的趋化应答（P〈0．01）。采用^3H—TdR示踪法进行了河流弧菌对牙鲆3种粘液的粘附作用研究,结果表明,河流弧菌对牙鲆表皮粘液和鳃粘液的粘附率较高,而对肠粘液的粘附率较低,特别是孵育30、60和90min时河流弧菌对牙鲆表皮粘液和鳃粘液的粘附率显著高于对肠粘液的粘附率（P〈0．05）。这些结果表明,河流弧菌能够在牙鲆粘液,尤其是鳃粘液中生长和定植,有利于其进一步感染、致病。  相似文献   

Starvation effects on pathogenic Vibrio alginolyticus in natural seawater     

YI Jiabo  CHEN Qiang  ZOU Wenzheng  YAN Qingpi  ZHUANG Zhixi  WANG Xiaoru 《海洋学报(英文版)》2008,27(4):120-129

To get a better understanding of the starvation survival strategy of pathogenic Vibrio alginolyticus, log-phase cells were inoculated into sterile natural seawater for starvation studies. The results showed that all of total bacteria number, viable bacteria number and CFU number of V. alginolyticus increased remarkably at the initial starvation stage; after reaching their peaks at 5 d, both total bacteria number and viable bacteria number of V. alginolyticus fell slowly, while the CFU number fell more quickly after reaching its peak at 10 d; V. alginolyticus elongated their cells at the prophase of starvation, and then shrunk their volume and turned their shapes into ovals from rods at the anaphase of starvation; starved cells showed more sensitivity to heating and UV; starved cells showed no significant difference from unstarved ones at the lowest detection limit determined by indirect enzyme-linked immu- nosorbent assay （ELISA） ; starved cells＇ ability to adhere to the skin mucus of large yellow croaker （ Pseudosciaena crocea） showed a sharp decline as the starvation time increases; the cellular protein of V. alginolyticus increased remarkably at the ariaphase of starvation. The results indicated that pathogenic V. alginolyticus could survive in starvation for relatively long periods of time （ ≥2 months） in 28℃ natural seawater due to the morphological and physiological changes; however, starved V. alginolyticus cells showed less virulence and higher sensitivity under environmental stresses.  相似文献