孔石莼(Ulva pertusa)LAMP-LFD快速检测方法的建立     

周前进  陈先锋  蔡怡  段丽君  段维军  苗亮  陈炯 《海洋与湖沼》2016,47(2):380-389

采用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)进行核酸扩增,凭借横向流动试纸条(lateral flow dipstick,LFD)完成扩增产物检测,建立了可快速检测孔石莼(Ulva pertusa)的LAMP-LFD方法。该方法首先在孔石莼的内转录间隔区序列(internal transcribed spacer,ITS)的8个种内保守区域设计6条特异性引物(上游内引物由生物素标记),进行由生物素标记的LAMP反应;同时,在两条外引物的有效扩增区段内设计1条异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记的探针,生物素标记的LAMP产物与FITC标记的探针特异性杂交后,在LFD上完成结果显示。优化后LAMP的反应条件为63°C反应50min,加上探针杂交与LFD检测共需60min。结果表明,利用该LAMP-LFD方法可特异性地检出孔石莼,对浒苔(Ulva prolifera)等9种常见藻类的检测均呈阴性。利用该方法最低可检测到3.04×10~(–2) pg/μL的孔石莼基因组DNA,是以LAMP外引物进行的常规PCR方法的1000倍。针对一定数量的实际样本的检测结果表明,LAMP-LFD方法与传统的形态学观察的结果一致。因此,本研究建立的孔石莼LAMP-LFD快速检测方法,具有特异性强、灵敏度高、操作简便等优点,有望成为我国东部沿海孔石莼快速检测和定期监测的有效技术手段。  相似文献   

三苯基氯化锡(TPTC)对孔石莼光合作用及生长的影响   总被引：4，自引：2，他引：2  

李钧  于仁诚  李正炎  颜天  周名江 《海洋与湖沼》2000,31(4):404-407

于１９９５年５月在青岛太平角采集孔石莼,研究了三苯基氯化锡（ＴＰＴＣ）对其光合、呼吸、色素含量及生长的影响。结果表明,低浓度的ＴＰＴＣ≤２μｇ／Ｌ）对光 过程无明显作用,高浓度的ＴＰＴＣ（〉２μｇ／Ｌ）能抑制光合作用,当ＴＰＴＣ浓度达到１６μｇ／Ｌ时,光合过程基本停止,ＴＰＴＣ对光作用的半数效应浓度为９６ｈＥＣ５０＝７．３９μＧ／Ｌ。低浓度的ＴＰＴＣ就能够使呼吸速率加快,但ＴＰＴＣ浓度达到８μｇ／  相似文献   

紫外辐射对孔石莼抗氧化酶活性及其同工酶表达的影响   总被引：1，自引：0，他引：1  

李丽霞  王秀静  赵吉强 《海洋科学》2017,41(4):1-9

潮间带海藻不可避免地要遭受UV-B的胁迫。本研究以孔石莼(Ulva pertusa)为试材,研究了UV-B胁迫对其抗氧化酶体系中SOD、CAT、POX、APX、GR、GPX活性及前4种酶的同工酶表达的影响。结果显示:SOD、CAT、POX酶活性应激反应较为迅速;APX活性始终保持较稳定水平;GR、GPX酶应激表达启动稍晚,酶活高峰在处理中期6d时出现。SOD同工酶谱有4条酶带,在UV-B3种剂量处理下,SODⅠ及SODⅡ同工酶活性有所增加;POXⅡ同工酶活性呈小幅增加;在UV-B诱导下,CAT产生了2条新的同工酶谱带CATⅠ及CATⅡ;APX同工酶仅有1条谱带,在UV-B处理下与对照差异不大。抗氧化成分As A及GSH含量在处理前中期与对照相近。孔石莼的特定增长率(SGR)在1.6 kJ/(m~2·d)、4.8 kJ/(m~2·d)和9.6kJ/(m~2·d)3种剂量UV-B辐射处理下均呈下降趋势,且在后两种剂量处理下降低尤为显著,而相应的H_2O_2及TBARS含量呈不同程度增加。上述结果表明:孔石莼对UV-B辐射具有一定程度的耐受性,可以通过提高酶促过氧化体系活性来应答UV-B导致的氧化胁迫,并且酶活性变化体现出剂量和时间效应。  相似文献