香鱼格留虫(Glugea plecoglossi)环介导等温扩增联合横向流动试纸条检测方法的建立     

康晋伟  金晶磊  段丽君  周燕  苗亮  周前进  陈炯 《海洋与湖沼》2020,51(6):1501-1512

我国的养殖香鱼正面临着严重的香鱼格留虫（Glugea plecoglossi）感染。本研究联合运用环介导等温扩增技术（LAMP）和横向流动试纸条（LFD）的检测技术，建立了快速便捷地检测G. plecoglossi的LAMP-LFD方法。该方法以G. plecoglossi的β微管蛋白基因为检测靶标，在其保守区域设计并筛得6条特异性引物（其中上游内引物用生物素标记），进行LAMP反应，产物再与异硫氰酸荧光素（FITC）标记的特异性探针杂交，在LFD上进行结果判断。结果表明，LAMP-LFD方法能够特异性地检出G. plecoglossi，对梅氏新贝尼登虫、刺激隐核虫、肝肠胞虫阳性的虾组织、派氏异尖线虫、内弯宫脂线虫、鳗弧菌香鱼分离株、杀香鱼假单胞菌，以及香鱼组织等的检测均呈阴性。优化后，LAMP的反应条件为65℃反应45min，与探针杂交的条件为65℃反应5min，加之5min的显色时间，整个检测时程为55min。利用该方法能够检测到2.0fg/μL的含β微管蛋白的质粒DNA，针对G. plecoglossi基因组DNA的检测灵敏度为14.0pg/μL；能够从感染强度达到100个虫体/克的香鱼肝组织中稳定地检测到虫体。该方法可在简单的恒温加热设备（如水浴锅）中完成核酸扩增和探针杂交，无需昂贵的仪器装置。综上，香鱼格留虫LAMP-LFD方法操作便捷、灵敏度高、特异性好、检测快速，而且设备依赖性低，完全适合于基层检测的需求。  相似文献   

大菱鲆两种转基因方法的比较研究     

刘婷  刘庆华  谭训刚  张培军  徐永立 《海洋科学》2007,31(11):9-13

对外源基因导入大菱鲆(Scophthat musmaximus)的两种方法进行了研究,采用经过改进的电脉冲方法以及哺乳动物细胞中常用的转染法导入外源基因,并对两种方法进行比较。电脉冲最佳导入条件为:脉冲电压为300V/cm,脉冲次数为5,外源DNA质量浓度为20mg/L;转染法的最佳操作时间为受精后50min。应用上述两种方法进行批量转基因鱼实验,得到外源基因的导入率分别为20%～28%和60%～70%。实验表明利用转染试剂jetPEI处理单细胞期的大菱鲆受精卵能得到较高的孵化率及较高的转基因效率。  相似文献   

孔石莼(Ulva pertusa)LAMP-LFD快速检测方法的建立     

周前进  陈先锋  蔡怡  段丽君  段维军  苗亮  陈炯 《海洋与湖沼》2016,47(2):380-389

采用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)进行核酸扩增,凭借横向流动试纸条(lateral flow dipstick,LFD)完成扩增产物检测,建立了可快速检测孔石莼(Ulva pertusa)的LAMP-LFD方法。该方法首先在孔石莼的内转录间隔区序列(internal transcribed spacer,ITS)的8个种内保守区域设计6条特异性引物(上游内引物由生物素标记),进行由生物素标记的LAMP反应;同时,在两条外引物的有效扩增区段内设计1条异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记的探针,生物素标记的LAMP产物与FITC标记的探针特异性杂交后,在LFD上完成结果显示。优化后LAMP的反应条件为63°C反应50min,加上探针杂交与LFD检测共需60min。结果表明,利用该LAMP-LFD方法可特异性地检出孔石莼,对浒苔(Ulva prolifera)等9种常见藻类的检测均呈阴性。利用该方法最低可检测到3.04×10~(–2) pg/μL的孔石莼基因组DNA,是以LAMP外引物进行的常规PCR方法的1000倍。针对一定数量的实际样本的检测结果表明,LAMP-LFD方法与传统的形态学观察的结果一致。因此,本研究建立的孔石莼LAMP-LFD快速检测方法,具有特异性强、灵敏度高、操作简便等优点,有望成为我国东部沿海孔石莼快速检测和定期监测的有效技术手段。  相似文献   

城市设置理论     

Uuma.  EL 杨军 《地理译报》1989,(1):23-26

  相似文献   

夏季养生五个最佳     

《青海国土经略》2012,(3):64-64

最佳饮料——热茶[点评]提到夏季解暑饮料,很多读者第一时间就想到各类冷饮。其实不然,最佳的饮料是热茶。冷饮解热只是一种短暂的效心。由于吃冷饮后刺激了人体的冷敏神经元,信息传递到体温调节中枢,使皮肤毛细血管收缩,汗毛孔闭,汁液分泌减少,结果导致短暂的凉爽后是闷热。  相似文献   

生活百科     

本刊编辑部 《青海国土经略》2012,(3):64

夏季养生五个最佳最佳饮料——热茶[点评]提到夏季解暑饮料,很多读者第一时间就想到各类冷饮。其实不然,最佳的饮料是热茶。冷饮解热只是一种短暂的效应。由于吃冷饮后刺激了人体的冷敏神经元,信息传递到体温调节中枢,使皮肤毛细血管收缩,汗毛孔关闭,汗液分泌减少,结果导致短暂的凉爽后是闷热。相反,喝热茶时虽热,但能促进人体汗腺的分泌,热随汗出,从而达到散热的作用。  相似文献   

环介导恒温扩增技术快速检测米氏凯伦藻方法的建立   总被引：2，自引：0，他引：2       下载免费PDF全文

张凤英  徐兆礼  马凌波  郑俊斌  缪宇平  陆亚男 《海洋学报》2009,31(6):170-175

米氏凯伦藻(Karenia mikimotoi,Hansen)属于裸甲藻目(Gymnodiniales),裸甲藻科(Gymnodi-niaceae),凯伦藻属(Karenia)。它能产生溶血性(hemolytic)毒素和鱼毒(ichthyotoxins),溶解鱼类细胞,破坏鱼鳃组织结构,使鱼类无法正常呼吸而窒息死亡[1]。近年来,米氏凯伦藻引起的赤潮在世界各海域屡次发生,日本海域,墨西哥湾,新西兰、韩国、苏格兰和澳大利亚海域都有米氏凯伦藻引发赤潮的报道,对渔业造成很大损失[2]。  相似文献   

环介导恒温扩增技术快速检测米氏凯伦藻方法的建立环介导恒温扩增技术快速检测米氏凯伦藻方法的建立          下载免费PDF全文

张凤英  徐兆礼  马凌波  ﹡  郑俊斌  缪宇平  陆亚男 《海洋学报》2009,31(6):169-174

利用环介导恒温扩增（LAMP）技术成功检测了米氏凯伦藻(Karenia mikimotoi)基因，并对其反应程序和反应体系进行了优化，建立起一种简单快速的微藻检测技术。利用本实验优化体系对米氏凯伦藻进行了LAMP扩增，得到了理想的扩增产物，同时以其他8种藻类为阴性对照实验，只有米氏凯伦藻为特异性扩增，其他藻类均呈现阴性反应。另外，对扩增终产物进一步进行酶切分析，并与以F3和B3为引物PCR扩增的片段相比较，均与预期结果相吻合。采用2种方法进行阳性反应检测，一是阳性反应管内可见白色焦磷酸镁沉淀，二是LAMP产物与SYBR Green I反应呈现绿色。这种技术简单快速，有望应用到赤潮藻类的现场检测，在赤潮的预测预报中发挥强大作用。  相似文献