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环介导等温扩增联合横向流动试纸条检测简单异尖线虫/派氏异尖线虫方法的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
简单异尖线虫复合种(Anisakissimplexspeciescomplex)是人兽共患寄生虫,其中的简单异尖线虫(A. simplex sensu stricto)和派氏异尖线虫(A. pegreffii)能引起人异尖线虫病。本研究利用环介导等温扩增技术(loop-mediatedisothermalamplification,LAMP)结合流动试纸条(lateralflowdipstick,LFD)建立了简单异尖线虫/派氏异尖线虫的快检技术。本研究以简单异尖线虫核糖体DNA的内转录间隔区(ribosomal internal transcribed spacer 2, rDNA-ITS2)序列为检测靶标,设计6条特异性的引物进行(荧光)LAMP反应。将生物素化的LAMP产物与异硫氰酸荧光素标记的探针杂交并通过LFD可视化显示。结果表明,本研究建立的LAMP-LFD可以特异性检测出简单异尖线虫/派氏异尖线虫,而对其它10种蠕虫的检测结果呈阴性;针对两个异尖线虫姊妹种的第三期幼虫(third-stagelarvae,L3)的检测灵敏度为单条虫体基因组DNA的10–5倍。优化后的LAMP反应时间为40min,加之探针杂交和LFD显色,整个检测时程只需50min。利用本LAMP-LFD方法对2015—2017年收集于140尾海鱼的1573条线虫进行检测的结果表明,简单异尖线虫/派氏异尖线虫是东海海域的优势种,这与经rDNA-ITS1-5.8S-ITS2测序的结果一致。因此, LAMP-LFD方法能快速、灵敏且准确地检测简单异尖线虫/派氏异尖线,在经济鱼类中简单异尖线虫复合种的筛检和常规检验检疫具有巨大潜力。 相似文献
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采用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)进行核酸扩增,凭借横向流动试纸条(lateral flow dipstick,LFD)完成扩增产物检测,建立了可快速检测孔石莼(Ulva pertusa)的LAMP-LFD方法。该方法首先在孔石莼的内转录间隔区序列(internal transcribed spacer,ITS)的8个种内保守区域设计6条特异性引物(上游内引物由生物素标记),进行由生物素标记的LAMP反应;同时,在两条外引物的有效扩增区段内设计1条异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记的探针,生物素标记的LAMP产物与FITC标记的探针特异性杂交后,在LFD上完成结果显示。优化后LAMP的反应条件为63°C反应50min,加上探针杂交与LFD检测共需60min。结果表明,利用该LAMP-LFD方法可特异性地检出孔石莼,对浒苔(Ulva prolifera)等9种常见藻类的检测均呈阴性。利用该方法最低可检测到3.04×10~(–2) pg/μL的孔石莼基因组DNA,是以LAMP外引物进行的常规PCR方法的1000倍。针对一定数量的实际样本的检测结果表明,LAMP-LFD方法与传统的形态学观察的结果一致。因此,本研究建立的孔石莼LAMP-LFD快速检测方法,具有特异性强、灵敏度高、操作简便等优点,有望成为我国东部沿海孔石莼快速检测和定期监测的有效技术手段。 相似文献
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应用LAMP-LFD技术可视化检测河流弧菌(Vibrio fluvialis)的研究 总被引：2，自引：0，他引：2
以河流弧菌(Vibrio fluvialis)为检测对象,将环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)与横向流动试纸条(lateral flow dipstick,LFD)联合应用,建立了快速便捷的LAMP-LFD方法。该方法以河流弧菌的外膜蛋白omp U基因作为检测靶标,在其保守区域设计6条特异性引物(上游内引物由生物素标记),并在两条外引物的有效扩增区段内设计1条特异性探针,由异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记。使用引物进行有生物素标记的LAMP反应,产物与FITC标记的探针完成杂交,杂交产物在LFD上进行结果展示。结果表明,LAMP-LFD方法可特异性地检出河流弧菌,对近似物种如创伤弧菌等弧菌病原以及迟缓爱德华菌等其他水产养殖病原的检测均呈阴性。经优化,LAMP的反应条件为63°C反应25min,加上5min的探针杂交和3—5min的LFD显色,整个检测时程约35min。利用该方法最低可检测到1.0×10~2 CFU/m L的河流弧菌纯培养物,能够从污染强度为5.0×10~2 CFU/m L的组织样品中检测到该病原。该方法设备依赖性更低,仅需简单的恒温加热设备即可完成。因此,本研究建立的河流弧菌LAMP-LFD方法,具有操作便捷,设备依赖性低、灵敏度高和检测快速等优点,在河流弧菌的基层检测中具有良好的应用前景。 相似文献
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环介导等温扩增联合横向流动试纸条快速检测扁浒苔(Ulva compressa)的研究 总被引：2，自引：1，他引：1
本研究将环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)与横向流动试纸条(lateral flow dipstick,LFD)的可视化检测方法结合,建立了扁浒苔(Ulva compressa)的LAMPLFD快速检测技术。该方法以扁浒苔的内转录间隔区(ITS1-5.8S-ITS2)序列为检测靶标,设计了3对特异性引物(其中,上游内引物由生物素标记)和1条异硫氰酸荧光素标记的探针。结果表明,LAMP最适反应温度为63°C,扩增时间为60 min,从核酸扩增到LFD结果判读需70 min。利用LAMP-LFD可特异性检出扁浒苔,对浒苔、曲浒苔、缘管浒苔和孔石莼等石莼属绿藻以及塔玛亚历山大藻、无纹环沟藻、东海原甲藻、锥状斯克里普藻和赤潮异弯藻等常见微藻的检测结果为阴性。该方法最低可检测到0.1 pg的扁浒苔基因组DNA,是以Uco ITS-F3和Uco ITS-B3为特异性引物的PCR方法的100倍。对实际样品的检测结果表明,LAMP-LFD方法检测扁浒苔与传统的形态学观察的结果一致。因此,该方法可快速、特异地检测出扁浒苔,而且操作简单,仪器设备依赖性低,有潜力成为扁浒苔现场检测的常规技术手段。 相似文献
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真江蓠是原产于西北太平洋的重要经济红藻。我们利用10对微卫星引物检测中国黄渤海地区真江蓠的群体遗传多样性和结构。10个微卫星位点在12个群体中共检测到65个等位基因，每个位点的等位基因（Na）为1~28，有效等位基因（Ne）为1.0~9.6。每个群体的平均等位基因（Na）、平均有效等位基因（Ne）、平均香浓指数（I）、平均观察杂合度（Ho）和平均预期杂合度（He）分别为2.4、1.6、0.419、0.133和0.227，显示较低的群体遗传多样性。中国黄渤海12个真江蓠群体间遗传分化较大（Fst=0.398 7），基因流有限（Nm=0.377 1），近交系数为正（Fis=0.391 3，Fit=0.634 0），表明可能存在近交和杂合子缺失现象。Structure和UPGMA系统进化分析一致将12个群体分为两个遗传组，并在黑石礁群体（HS）和石岛群体（SD）中发现明显的遗传混杂现象。AMOVA分析显示遗传变异主要来自于群体内（73.27%）。该研究可为黄渤海地区真江蓠自然资源保护和管理提供科学依据。 相似文献
6.
以东海原甲藻的ITS序列(Internal transcribed spacer,ITS)为检测靶标,将生物素标记的环介导恒温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)扩增产物与经异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocyanate,FITC)标记的探针特异性杂交,并结合横向流动试纸条(Lateral flow dipstick,LFD)肉眼直接观察检测结果,建立了有害赤潮藻东海原甲藻(Prorocentrum donghaiense)的快速检测技术。经优化后的最适条件为63°C、30min,较常规PCR扩增缩短约2h。结果表明:LAMPLFD可特异性检出东海原甲藻,对常见赤潮藻检测结果均为阴性;其对东海原甲藻基因组DNA的检测最低限为47pg/μL,是常规PCR技术(以F3/B3为引物)的10倍。LAMP-LFD技术能高效、特异地检出东海原甲藻,仪器设备依赖性低,结果可视化,有望成为赤潮原因种检测监控的常规方法。 相似文献
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根据在中国近海采集到的标本，描述多毛类环节动物一新种——中华竹节虫（Sabaco sinicus sp.nov.）。该物种标本在乌沙科夫等（1962）报道后一直被错误鉴定为钩齿短脊虫（Asychis gangeticus Fauvel，1932）。我们基于以下性状将该种描述为一新物种：项沟和前三个刚节具深棕色色素点；刚节4–6的腺体分布特征；肛前节无刚毛；肛漏斗喇叭状，背侧小叶呈扁盘状；具膝状的背刚毛、表面有或无螺旋刺毛带的细毛状背刚毛；腹刚毛为排成一列的鸟嘴状齿片刚毛。钩齿短脊虫和该新种的区别在于前者身体无色素点，肛板背侧小叶呈三角形。自1950s以来，该物种的分布区已经从长江口以南海区明显向北扩展。 相似文献
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似三核线虫属的两个新种似三核线虫红树林种（Tripyloides mangrovensis n.sp.）和似三核线虫厦门种（Tripyloides amoyanus n.sp.）在本文中分别被描述，标本分别采自中国厦门同安湾红树林和海门岛红树林。两个新种都具有6根较粗的外唇刚毛，雄性标本不具有肛前附器，尾部圆锥圆柱形且不具有末端突起。似三核线虫红树林种（Tripyloides mangrovensis n.sp.）口器分成两部分，化感器圆形，尾部具有显著的近端圆锥形和远端纤细的圆柱形，圆柱形部分占尾部的2/3。似三核线虫厦门种（Tripyloides amoyanus n.sp.）口器分成3部分，具有小齿，化感器小，双环状，尾部1/3部分为圆柱形，引带有4个小齿。 相似文献
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促性腺激素释放激素（GnRH）在脊椎动物的繁殖过程中起着至关重要的作用,同时也存在于许多无脊椎动物中。利用cDNA末端快速扩增技术（RACE）克隆出曼氏无针乌贼（Sepiella japonica）促性腺激素释放激素（命名为SjGnRH,KP 982885.1）。SjGnRH基因的cDNA全长710 bp,开放阅读框（ORF）为273 bp,编码90个氨基酸,包括一条含有31个氨基酸的信号肽、12个氨基酸的GnRH多肽和44个氨基酸的GnRH相关肽（GAP）;SjGnRH与剑尖枪乌贼（Uroteuthis edulis）和真蛸（Octopus vulgaris）的同源性分别为86.7%和73.3%;SjGnRH高度保守的十二肽与剑尖枪乌贼和真蛸的octGnRH相似度达100%,其信号肽的相似性分别为66.7%和54.8%,GAP区的相似性分别为95.5%和77.3%;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）结果显示,SjGnRH基因在成熟期的表达具有特异性,在脑中表达量最高,且与其他组织差异显著（P<0.05）;采用原位杂交技术检测SjGnRH mRNA在脑内的表达模式,结果表明：SjGnRH在食道上神经团、食道下神经团和视叶的不同部位均有表达,暗示SjGnRH可能参与曼氏无针乌贼的生殖调控作用。 相似文献
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凡纳滨对虾-缢蛏生态循环养殖池塘中浮游植物群落结构与水质因子相关性研究 总被引：1，自引：0，他引：1
为研究凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）与缢蛏（Sinonovacula constricta）生态循环养殖过程中浮游植物群落结构及其与水质因子变化特征之间的相关性，本实验于2018年6月至11月在宁波市鄞州区椿霖养殖场对虾蛏循环养殖池塘中水质及浮游植物的动态开展了逐月采样监测，分析了养虾塘与养蛏塘中的浮游植物群落结构变化及水质因子变动。结果显示：（1）对虾养殖期间共鉴定出6个门101种浮游植物（包含9个未定种），从种的数量上来看，硅藻门 > 甲藻门 > 绿藻门 > 蓝藻门 > 裸藻门 > 隐藻门，其中包含优势种14种，养殖初期优势种为硅藻门的新月菱形藻（Nitzschia closteriu）、牟氏角毛藻（Chaetoceros muelleri）等，随后甲藻门的海洋原甲藻（Prorocentrum micans）和绿藻门的小球藻（Chlorella vulgaris）等逐渐占据优势，后期仍以硅藻门为主要优势种。（2）浮游植物的丰度介于6.8×105-2.5×108cell/L，生物量为2.04-65.72mg/L，Shannon-Wiener多样性指数范围为1.34-2.56，均匀度指数范围为0.43-0.72，多样性水平较高，物种分布的均匀度较好。（3）对浮游植物群落结构与水质因子进行CCA分析后得到硅藻门种群变化主要与温度、盐度、pH密切相关（P<0.05）；绿藻门种群优势受氮含量（总氮、亚硝酸盐氮、氨氮）的影响较大；而甲藻门、蓝藻门种类则与磷含量（总磷、活性磷）与温度相关。 相似文献
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港口内靠码头系泊船运动的计算 总被引：11，自引：1，他引：11
本文以英国南海岸处Ｓｈｏｒｅｈａｍ港内系泊船为例，研究了港口内靠码头系泊船运动的数值计算问题。该船的实船实验和模型实验已经完成，为验证本文计算结果提供了依据。运动方程在时域内求解。在计算船体脉冲响应函数时，引入了船体阻尼系数在频率很低时的渐近表达式和一迭代算法。分析了港内共振波浪和其对船体的作用力。讨论了靠码头系泊船运动的非线性特征。计算结果与实验结果符合很好。 相似文献
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This paper deals with the study of moisture budget of the typhoon No. 7507. The results show that the mass convergence produced by divergent wind has made the maximum contribution to precipitation, especially at the lower level, accounting for about 70% of the total precipitation, and that the advection term of water vapor is very small. The vertical flux term is to transport water vapor from the lower level to the middle and upper levels, resulting in the increase of water vapor accumulation at these levels. Evaporation term also plays an important role in precipitation, accounting for about 13% of the total precipitation and 23% of the horizontal moisture convergence. The moisture of the typhoon comes mainly from its southern boundary and the secondary inflow of moisture is from its western or eastern boundary. All the inflow layers of these three boundaries are very deep, reaching up to 300 hPa, while the strongest inflow occurs below 700 hPa. In the northern boundary of the typhoon, we obtained that 相似文献
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An elliptic jet and a square jet flowing into a counterflow with different jet-to-current velocity ratios are investigated by using realizable k–ε model. Some computed mean velocity and scalar features agree reasonably well with experimental measurements, and more features are obtained by analyzing the computed results. After fluid issues from a nozzle, it entrains ambient fluid, and its velocity and concentration on the centerline decay with the distance downstream from the potential core (l0). The decay ratio increases with the decreasing jet-to-current velocity ratio α. For an elliptic jet, the evolution of the excess velocity half-width b and the concentration half-width bc merely remains constant near the jet exit on major-axis plane while they increase linearly on the minor-axis plane. However, the half-widths on the major-axis and minor-axis plane become proportional to the axial distance downstream after equaling each other. For a square jet, b and bc increase linearly with the distance downstream from the jet exit, but the spread ratio is larger on the middle plane than that on the diagonal plane before they equal each other. The radial extent of the dividing streamline rs or the mixing boundary rsc increases linearly downstream, and decreases exponentially after reaching a peak at xb. The ratio on the minor-axis plane is larger than that on the major-axis plane for an elliptic jet. The characteristics are the same for the square jet. b, bc, rs, and rsc on two corresponding planes become equal to each other more rapidly for the square jet than for the elliptic jet, because the sharp corner of the square nozzle induces secondary structures that are more intense. The distributions of the excess axial velocity and scalar concentration exhibit self-similarity for either the elliptic jet or square jet in the region of l0 < x < xb. On the cross section, four counter-rotating pairs of vortices, which enhance the entrainment between the jet and counterflow, form at the four corners of the square jet or at the two ends of the major-axis plane of the elliptic jet. The recirculation pattern formed by these axial vortices is more complex for the square jet than that for the elliptic jet. The turbulent kinetic energy k have large value in the region near the jet exit and stagnation point. The maximum value of k for the square jet is larger than that of the elliptic jet near the jet exit. This results in the square jet mixing more strongly than the elliptic jet. 相似文献
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提出一种基于序贯预测误差方法（ＳＰＥ）的多层神经网络（ＭＮＮ）的学习算法。经模拟计算，它比传统的基于最陡下降方法的误差反传（ＳＤＢＥＰ）算法具有更好的收敛性能。并对这两种算法进行了模拟计算的比较． 相似文献
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中国隆头鱼之一新属新种——尖尾新丝隆头鱼 总被引：1，自引：0，他引：1
在过去几年的西沙群岛鱼类区系调查中,我们曾在西沙群岛的东岛和永兴岛附近水域,先后三次采到5尾前所未曾见过的隆头鱼类标本,经过比较研究后,认为是一新属、新种,定名为“尖尾新丝隆头鱼”,(Neocirrhilabrus oxyurus gen. et sp. nov.)现描述如下: 相似文献
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A Time-Domain Coupled Model for Nonlinear Wave Forces on A Fixed Box-Shaped Ship in A Harbor 总被引：2，自引：1，他引：1
A 2-D time-domain numerical coupled model is developed to obtain an efficient method for nonlinear wave forces on a fixed box-shaped ship in a harbor.The domain is divided into an inner domain and an outer domain.The inner domain is the area beneath the ship and the flow is described by the simplified Euler equations.The other area is the outer domain and the flow is defined by the higher-order Boussinesq equations in order to consider the nonlinearity of the wave motions.Along the interface boundaries between the inner domain and the outer domain,the volume flux is assumed to be continuous and the wave pressures are equal.Relevant physical experiment is conducted to validate the present model.It is shown that the numerical results agree with the experimental data.Compared with the coupled model with the flow in the inner domain governed by the Laplace equation,the present coupled model is more efficient and its solution procedure is more simple,which is particularly useful for the study on the effect of the nonlinear wave forces on a fixed box-shaped ship in a large harbor. 相似文献
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王荣良 《中国海洋大学学报(自然科学版)》1988,(1)
本文对J.Maynard Smith提出的物种竞争模式: x=x(a-bx-cy-kxy) y=y(e-fx-gy-lxy)作了定性分析,并给出两物种共存或其中任一物种死亡,而另一物种趋于确定值的条件。 相似文献
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This is a numerical study on the time development of surface waves generated by a submerged body moving steadily in a two-layer fluid system, in which a layer of water is underlain by a layer of viscous mud. The fully nonlinear Navier-Stokes equations are solved on FLUENT with the Volume-of-Fluid (VOF) multiphase scheme in order to simulate the free surface waves as well as the water-mud interface waves as functions of time. The numerical model is validated by mimicking a reported experiment in a one-layer ... 相似文献
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Field measurement of waves and wave pressure in a given harbour were carried out in the years 1973 and 1977 and then the statistical analysis was made. Based on this analysis and the linear wave theory some problems concerning the total pressure spectrum and the total pressure crest value and trough value are discussed, and the method of calculating these quantities is given. 相似文献