副溶血弧菌（Vibrioparahaemolyticus）tdh2基因和鳗弧菌（Kanguillarum）ompU基因二联DNA疫苗制备及其对大菱鲆（Scophthalmusmaximus）免疫保护作用     

刘瑞  赵明君  杨慧  陈吉祥 《海洋与湖沼》2011,42(4):580-586

采用基因工程的方法,将副溶血弧菌的热稳定直接溶血素基因tdh2和鳗弧菌外膜蛋白基因ompU进行融合,在大肠杆菌中得到表达,并利用该融合基因构建二联DNA疫苗pEGFP．N1／tdh2-ompU。用DNA疫苗按10和50μg／尾的剂量通过肌肉注射免疫大菱鲆,对大菱鲆抵抗致病性副溶血弧菌和鳗弧菌的免疫效果进行研究。结果表明...  相似文献   

IN VITRO STUDY ON CYTOTOXIC EFFECTS OF THE ORGANOPHOSPHOROUS PESTICIDE PROFENOFOS ON THE GILL CELL LINE,FG-9307, OF THE FLOUNDER （PARALICHIHYS OLIVACEUS）   总被引：2，自引：0，他引：2  

李红岩  张士璀姜明 汪岷 《中国海洋湖沼学报》2001,19(1):57-62

The FG-9307 cell line derived from the gill of flounder Paralichthys olivaceus was used in the present study to determine the acute cytotoxic effects of the organophosphorous pesticide, profenofos. It was found that the cell growth rate was markedly reduced by profenofos at the concentrations of 2.5, 5 and 7.5 mg/L tested; and that the fine structures of the cells were also altered by profenofos, as evidenced by dilation of nuclear membranes and mitochondria cristae, and presence of enlarged lysoscrneswith engulfed organelles and numerous vacuoles in the cytoplama. Probably, mitochondria, the cell ener-gy-generating sites, are the most prcrninent sites of profenofos cytotoxity in the cells. This seems to be the first report of the use of marine fish cell line for evaluation of the acute in vitro cytotoxicity of organophos-phorus pesticide.  相似文献   

石斑鱼及暂养环境中副溶血弧菌分离鉴定与毒力评价   总被引：1，自引：1，他引：0  

高磊  邓益琴  刘助红  龙云映  陈偿 《海洋与湖沼》2014,45(6):1280-1287

副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)存在于海洋环境和海产品中,可引起人的食物中毒。本研究的目的是对某地石斑鱼暂养环境的副溶血弧菌的致病风险进行评价。结合弧菌选择性培养基TCBS、gyr B基因和16Sr RNA特定片段的序列分析方法对分离菌株进行鉴定;通过PCR检测毒力基因,血琼脂平板溶血实验、细胞感染实验、KM鼠灌胃实验分别检测各菌株的致病性、溶血性、细胞毒性与肠毒性。共鉴定出4株具有毒力的副溶血弧菌,分别为HS51-5、HS54-4、MJ01-1和MJ03-1。所有菌株都检测到溶血素基因(tdh和tlh)、三型分泌系统(T3SS)基因簇1(T3SS-1)的4个效应蛋白基因(vop Q、vop R、vop S和vpa0450)、和基因簇2(T3SS-2)的1个效应蛋白基因(Vop A)的分布,同时在HS51-5和HS54-4还检测到T3SS-2中的其他3个效应蛋白基因(vop C、vop T和vop L)。所有菌株都具有溶血现象、细胞毒性以及对小鼠的致死能力,而HS54-4、MJ01-1、MJ03-1对小鼠的毒力明显强于HS51-5。因此,从毒力基因检测、神奈川溶血、细胞毒性和对小鼠的毒力等4个方面的结果都表明副溶血弧菌具有致病性,说明石斑鱼暂养环境的副溶血弧菌具有致病风险,应加强对这些环境的监测。  相似文献   

液质联用快速测定河鲀鱼肝脏中河鲀毒素含量的方法研究     

曹文卿  林黎明  时迪  杨桂朋 《中国海洋大学学报(自然科学版)》2014,44(11):52-58,66

采用高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)方法进行了河鲀鱼肝脏中河鲀毒素(Tetrodotoxin,TTX)含量的快速检测研究。河鲀鱼肝脏样品用1%乙酸甲醇溶液超声提取2次,正己烷脱脂后用C18和石墨化碳黑(GCB)混合吸附剂净化,冷冻高速离心,上清液经聚四氟乙烯-尼龙复合膜过滤;TSK-gel Amide-80 3μm色谱柱分离,乙腈和0.15%乙酸(含10mmol/L乙酸铵)溶液为流动相梯度洗脱进行HPLC-MS/MS分析。外标法定量测定。方法检出限为40μg/kg,在50~1 000μg/kg范围内线性关系良好。在河鲀鱼肝脏中添加50,75,100μg/kg TTX进行重复性试验,回收率在79.2%~105.3%之间,相对标准偏差(RSD)不大于9.0%(n=6)。本方法准确、灵敏、实用,节约时间和试剂,操作简单,易重现,满足目前对河鲀鱼肝脏中TTX含量快速定量检测的技术要求。  相似文献   

副溶血性弧菌产耐热直接溶血毒素对黑色素瘤的抑制作用研究     

杨兰珠  李诗怡  郑雯静  李静  包哲隈  杨靖亚 《海洋科学》2022,46(8):121-129

为探讨耐热直接溶血毒素(Thermostabile direct hemolysin,TDH)在体内和体外对小鼠黑色素瘤细胞B16的抑制作用,本研究通过MTT法、克隆形成试验、凋亡试验、Caspase-8和Caspase-3的活性试验、线粒体膜电位的检测以及体内C57BL/6小鼠(Mus musculus)荷瘤实验,比较TDH作用于不同细胞的半抑制浓度(IC₅₀),评价TDH对小鼠黑色素瘤细胞B16的体内外抑制作用。结果发现:人结肠上皮细胞NCM460、人正常肝细胞LO2、人肝癌细胞SMMC-7721和小鼠黑色素瘤细胞B16在TDH处理24 h之后,细胞的半抑制质量浓度IC₅₀分别为151、118、54和48 μg/mL,正常细胞的IC₅₀高出癌细胞近2~3倍。当质量浓度低于20 μg/mL时,TDH以剂量依赖性的方式抑制B16细胞的克隆形成,6 mg/kg TDH在移植瘤模型中显著抑制体内肿瘤的生长(P<0.001)。流式细胞术和荧光试剂盒检测表明:20 μg/mL的TDH能诱导19.4%的B16细胞发生早期凋亡,并激活Caspase-8和Caspase-3,但不影响线粒体膜电位。TDH具有体内外的抗肿瘤活性,可能通过细胞表面的死亡受体介导的凋亡信号通路引起凋亡,从而发挥抗肿瘤作用。  相似文献   

抑制黄曲霉毒素的深海环状芽胞杆菌发酵条件优化          下载免费PDF全文

徐静静  闫培生 《应用海洋学学报》2022,41(4):693-700

环状芽胞杆菌(Bacillus circulans)菌株FA13在M2培养基中的发酵无细胞上清液对寄生曲霉(Aspergillus parasiticus)突变菌株NFRI-95菌丝生长和黄曲霉毒素的产生表现出明显的抑制作用。为了最大限度地提高活性物质的产量,本研究对从南大西洋深海沉积物中分离到的环状芽胞杆菌菌株FA13的发酵条件进行了均匀设计发酵优化。优化后,菌株FA13的发酵液10倍稀释液对寄生曲霉突变菌株NFRI-95的菌丝生长抑制率从10.98%提高到70.57%,黄曲霉毒素产生抑制率从41.43%提高到100.00%;对应的发酵条件为发酵温度38.70 ℃,接种量6.00%,海水体积占比0.00%,培养基pH 8.71,培养时间6 d。  相似文献   

栉孔扇贝对氮杂螺环酸毒素代谢解毒的生理应激响应     

董晨帆  吴海燕  李清云  顾海峰  谭志军 《海洋与湖沼》2020,51(6):1422-1431

将栉孔扇贝（Chlamys farreri）暴露于分离自我国近海的一株氮杂螺环酸毒素（azaspiracids，AZAs）产毒藻——腹孔环胺藻（Azadinium poporum，AZDY06株，主产AZA2），研究了栉孔扇贝对AZAs的代谢解毒效应以及代谢过程中血细胞数量、抗氧化酶活性及细胞超微结构变化等生理应急响应。结果发现，栉孔扇贝对AZDY06所产的AZA2具有一定的代谢解毒能力，可将AZA2转化成AZA6、AZA12、AZA19和AZA23等4种极性较强且毒性较低的代谢产物。代谢解毒过程中，栉孔扇贝血细胞数量、关键抗氧化酶活性及靶器官细胞超微结构均出现一定的应激效应，且总体表现出明显的剂量-效应关系。栉孔扇贝血细胞数量对AZAs表现出较强的应激反应，且随实验过程出现较大波动，最高可达对照组的2—3倍；抗氧化系统酶如超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、过氧化物酶（POD）和酸性磷酸酶（ACP）活性也出现不同程度的变化：GSH-Px与POD在整个蓄积代谢过程中均表现出持续激活状态，且血液中这两种酶活性最高，可达内脏和鳃中的20倍以上；SOD活性与扇贝中AZAs含量有一定关系，AZAs含量为74.2—168.2μg AZA1 eq/kg时为诱导状态，过高或过低剂量均表现为抑制效果；而ACP对AZAs的应激表现也十分敏感，但代谢过程中大部分时间为被持续抑制状态。此外，AZAs还导致栉孔扇贝内脏和鳃细胞超微结构出现空泡化、核固缩等病理性变化；实验后期，低暴露组细胞结构出现一定的自我修复现象，而高暴露组则无此现象。本研究可为进一步深入探索AZAs的解毒机制，对其进行风险评价并制定限量标准提供科学依据。  相似文献   

基于高效液相色谱法的扇贝毒素-2制备方法研究     

王玉  彭吉星  吴海燕  郭萌萌  佟蒙蒙  谭志军 《海洋与湖沼》2018,49(3):568-576

本文以渐尖鳍藻(Dinophysis acuminata)为实验原料,建立了基于高效液相色谱法(HPLC)的扇贝毒素-2(Pectenotoxin-2,PTX2)的制备方法。研究重点对鳍藻细胞的破碎、PTX2毒素的提取及HPLC纯化等三个步骤的方法进行筛选和优化。结果表明,反复冻融与超声波细胞破碎相结合可获得最大的细胞破碎率和毒素提取率,分别为99.2%和81.5%。采用四种有机试剂(甲醇、丙酮、乙醚、二氯甲烷)及三种固相萃取小柱(Solid Phase Extraction,SPE)(Oasis HLB SPE,Phenomenex Strata-X SPE,Sep-Pak C18 SPE)对PTX2毒素进行提取,其中乙醚-二氯甲烷的提取效率最高,达78.2%。在HPLC对PTX2毒素的纯化实验中发现,流动相的pH会影响毒素组分的分离,其中在碱性流动相(含6.7mmol/L氨水的水溶液和乙腈溶液,pH=10.94)条件下,PTX2的分离效果最佳,响应值最高。实验使用Phenomenex Kinetex C18(4.8mm×250mm,5μm)色谱柱,在上述碱性流动相条件下,分离得到纯度为93.2%的PTX2毒素。本研究选定的藻细胞破碎、PTX2毒素提取、及HPLC纯化方法简单快捷,高效易操作,为从大规模培养的鳍藻细胞中制备高纯度PTX2毒素提供了技术支持。  相似文献   

氮、磷对克氏前沟藻三亚株生长及产毒特性的影响     

龙超  龙丽娟 《热带海洋学报》2012,(4)

以改良 K 培养液为基础,通过设定不同的 N、P 浓度水平,探讨 N、P 营养盐对克氏前沟藻 Amphidinium klebsii(三亚株)生长及产毒特性的影响.研究结果表明, N、P 均为影响克氏前沟藻生长和产毒的重要因素.低浓度的N、P(N浓度≤4.665×10?4mol·L?1, P浓度≤2.000×10?5mol·L?1)不利于克氏前沟藻生物量的积累,但能促进其生长及毒素的产生;中浓度的N、P(4.665×10?4mol·L?1相似文献   

基于绿色生物模板电极的微囊藻毒素-LR快速检测     

朴云仙  姚兰  何凌志  张彧 《吉林大学学报(地球科学版)》2021,51(4):1217-1223

为实现水环境中微囊藻毒素的高性能检测,利用农业废弃物合成了具导电性能的生物炭颗粒,并将其作为导电材料构建了对微囊藻毒素-LR具电化学免疫检测性能的生物模板电极。实验结果表明：该电极具有很好的电催化性能,在电解液中,能够在短时间（5 min）内有效识别微囊藻毒素-LR的存在;利用差分脉冲伏安法检测发现在0.0~5.0 nmol/L的检测范围内毒素浓度与响应电流值呈线性递减关系,且最低检测浓度为0.2 nmol/L。该电极对各类不相关分子及离子具有抗干扰能力,表明了该方法可应用于对微囊藻毒素-LR污染的快速、特异性检测。  相似文献