卡罗藻毒素研究进展     

许亚如  何山  周成旭  严小军 《海洋科学》2014,38(10):113-118

<正>剧毒卡罗藻Karlodinum veneficum(又称Karlodinium micrum)作为一种典型的赤潮种,是海水养殖水域和自然水体中一种常见的裸甲藻种类,为混合营养型生物。该藻自20世纪50年代被发现以来,在过去的60年中其命名曾发生过多次变更,直到最近将其归入裸甲藻种类,被译为剧毒卡罗藻[1](也有学者命名为剧毒卡尔藻[2])。该藻自首次在南非被发现  相似文献   

Generation of Reactive Oxygen Species in Different Fractions of the Coelomocytes of Holothurian Eupentacta fraudatrix in Response to the Thermostable Toxin of Yersinia pseudotuberculosis in Vitro     

Dolmatova  L.S. Eliseykina  M.G. Timchenko  N.F. Kovaleva  A.L. Shitkova  O.A. 《中国海洋湖沼学报》2003,21(4):293-304

Pure fraction (92% - 95%) of phagocytes (FP) and a mixture of amoebocytes (62%) and morula cells (38 % )-FPMC- of the holothurian Eupentacta fraudatrix ( Holothuroidea,Dendrochirota ) were obtained by using ficoll-verographine step gradient. Basal production of reactive oxygen species (ROS) in FP quantified by using reduction of nitroblue tetrazolium (NBT) was more than twice that in FPMC. Thermostable toxin of Yersinia pseudotuberculosis (TST) at differentconcentrations ( 0.2; 0.5; 2.5 μg/ml, but not 0.1 μg/ml) stimulated NBT reduction in FPMC after 24 h incubation. In FP, TST at concentrations of 0.1 and 0.2 μg/ml inhibited and at concentrations of 0.5 and 2.5 μg/ml stimulated NBT reduction after 24 h incubation. Maximal effect was observed in FP and FPMC at TST concentrations of 0.5 and 0.2 μg/ml, respectively. Addition of catalase (0.7 μg/ml) to the cells treated with TST (2.5 μg/ml) was followed by a decrease in NBT reduction compared to that under toxin treatment alone. TST stimulated superoxide dismutase activity in ccncentration-dependent manner (maximum at 0.5 μg/ml concentration in FP) after 24 htreatment, and this stimulation was prevented by a commercial catalase. Plant lectin concanavalin A stimulated NBT reduction more than 5-fold in FPMC compared to the control. With addition of TST, lectin stimulated ROS to lesser extent than that with lectin alone. When catalase, TST, and lectin were added into the FPMC simultaneously, ROS increase was similar to that under lectin treatment alone. On the whole, data obtained indicated that ROS generation in holothurian coelomocytes especially occurs in both stimulated and not stimulated phagocytes, and that changes in ROS production by these cells may be one of the mechanisms of antibacterial protection of holothurians.  相似文献   

超高效液相色谱-串联质谱法直接进样测定水样中8种有机污染物   总被引：1，自引：1，他引：0  

杨立新  张剑波  路阳  刘印平  董斌  常凤启 《岩矿测试》2014,33(2):275-281

2011年我国实施了新的生活饮用水卫生标准,卫生指标扩展至106项,并配套了相关的检测方法,其中微囊藻毒素、莠去津采用液相色谱紫外检测器的检测方法;丙烯酰胺、灭草松、2,4-D采用气相色谱-电子捕获检测器的检测方法;呋喃丹、草甘膦采用液相色谱荧光检测器的检测方法。这些检测方法均有前处理程序繁琐、工作量大、可操作性差的缺点,在实际工作中应用较为困难。本文采用超高效液相色谱-串联质谱技术（UPLC-MS/MS）,建立了水样过0.22 μm滤膜,直接进样测定自来水、地下水及地表水中8种有机污染物（草甘膦、呋喃丹、灭草松、莠去津、2,4-滴、丙烯酰胺、微囊藻毒素-RR和微囊藻毒素-LR）的分析方法。8种化合物在各自的线性范围内线性关系良好,相关系数均不低于0.993,定量下限为0.07~5 μg/L,低、中、高三个加标水平的回收率为94.2%~103.7%,相对标准偏差为1.1%~7.8%。本文建立的方法操作简便,可以实现在6 min内一次性分析8种目标化合物,与国家标准方法相比,显著提高了分析效率;与文献报道的均是单一类化合物检测方法相比,本检测方法具有相似的灵敏度和检测限,但是目标化合物覆盖更全面,分析时间更短。  相似文献   

重组质粒HF443-EGFP的构建及其在赤潮毒素检测中的应用初探   总被引：4，自引：1，他引：4       下载免费PDF全文

刘洁生  杨维东  车军  甄熹  江天久  吴春利 《海洋与湖沼》2003,34(5):566-571

采用基因工程的方法，进行重组质粒HF443一EGFP的构建和在哺乳动物细胞中的表达，并进行了其用于赤潮毒素检测的可能性研究。结果表明，用PCR技术扩增EGFP基因，用XbaⅠ、Hind Ⅲ双酶切并纯化，与同样双酶切并纯化的HF443质粒连接，可构建重组质粒HF443-EGFP；利用Lipofect AMINE2000转染体外培养哺乳动物BIU-87细胞。在培养体系中加入不同浓度的GTX，而后加入Na^ 通道激活剂乌头碱以诱导绿色荧光蛋白表达，荧光显微镜下观察细胞中绿色荧光蛋白表达的变化情况。细胞发出的荧光随毒素浓度的增加而减弱，存在一定的剂量效应关系，提示毒素GTX可显著影响绿色荧光蛋白的表达，重组质粒：HF443-EGFP用于赤潮霉素检测有一定的可行性.  相似文献   

副溶血弧菌胶体金快速检测试纸的研制及应用     

朱慧  李嘉文  绳秀珍  唐小千  邢婧  战文斌 《中国海洋大学学报(自然科学版)》2021,(3)

副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是海水养殖动物弧菌病的主要病原菌之一。为实现对该菌的现场快速检测,本文以制备的兔抗副溶血弧菌多克隆抗体作为金标抗体,提取副溶血弧菌的外膜蛋白、鞭毛蛋白、胞外产物和全菌蛋白,以不同浓度的4种抗原蛋白作为4条检测线(T1~T4),特别在T4线设置全菌蛋白,基于竞争免疫层析原理研制出副溶血弧菌胶体金快速检测试纸。使用该试纸检测了副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)、鳗弧菌(V.anguillarum)、溶藻弧菌(V.alginolyticus)、哈维氏弧菌(V.harveyi)和鱼肠道弧菌(V.ichthyoenteri),检测结果表明其能够准确鉴别副溶血弧菌感染,排除其他菌的交叉反应干扰。副溶血弧菌快速检测试纸的最低检测限为5×105 cfu·mL^-1,感染副溶血弧菌的牙鲆组织的检测结果与ELISA结果一致。本文研制的试纸具有较高的特异性与准确性且操作简单,为现场快速检测副溶血弧菌提供了有力工具。  相似文献   

日本对虾溶血素的活性测定及性能研究   总被引：32，自引：1，他引：31  

牟海津  江晓路  刘树青  管华诗 《海洋与湖沼》1999,30(4):362-367

于1997年10－11月,以青岛市红岛养殖场养殖的日本对虾为材料,采用分光光度法对其血淋巴中的溶血素进行活性检测,研究多种理化因子对其溶血性能的影响,以及日本对虾溶血素经细菌和虫草多糖肌肉注射刺激后的活性变化。结果表明,日本对虾溶血素的活性同对虾的健康状况密切相关。该溶血累经60℃以下处理溶血作用有所增强,在pH=5－9时溶血活性最高,Ca2＋、Fe2＋可增强溶血作用。注射大肠杆菌（2×107cells／尾）和虫草多糖能够诱导日本对虾溶血素的产生,使溶血活性有所提高;而注射哈维氏弧菌（7×107cells／尾）会导致对虾发病,降低溶血素的活性。  相似文献   

汾河(太原市景区段)微囊藻的分子多样性及产毒能力     

王捷  谢树莲  王中杰  徐瑶  李仁辉 《湖泊科学》2011,23(4):505-512

对太原市汾河景区采集到的微囊藻进行分离纯化,得到7株微囊藻藻株,运用ITS、PC-IGS和gyrB基因序列构建系统树来研究其分子多样性.结果表明,太原市汾河景区微囊藻具有一定的分子多样性.采用mcyA基因和ELISA检测两种方法,即全细胞PCR测定微囊藻毒素合成酶基因A( mcyA),对这些藻株的微囊藻毒素进行测定,检...  相似文献   

大黄鱼病原弧菌耐药质粒转移研究   总被引：3，自引：1，他引：2  

鄢庆枇  方恩华  苏永全  王军  庄峙厦 《海洋科学》2004,28(3):44-49

用混合培养法进行耐药质粒从大肠杆菌 (Escherichiacoli)向病原弧菌转移研究 ,结果表明 ,耐药质粒 pBR322和 pBR325可以从大肠杆菌向病原弧菌转移。在混合培养30min后 ,部分弧菌获得耐药质粒 ,质粒的转化率随着培养时间的延长而增大 ;混合培养24h后 ,转化率分别提高至4.62×10-6～1.18×10-5。耐药质粒 pBR322和 pBR325在2株病原弧菌细胞内能较为稳定地遗传 ,在培养初期 (0～1h) ,均未出现质粒丢失 ,随着培养时间的延长 ,有少量细胞因丢失耐药质粒而表现出对药物的敏感性 ;培养72h后 ,质粒 pBR322和 pBR325在副溶血弧菌(Vibrioparahaemolyticus)中的丢失率分别为10 %和9% ,溶藻弧菌(Vibrioalginolyticus)中2种质粒的丢失率分别为22%和19 %。细菌的药敏试验表明不同菌株在获得耐药质粒后对特定药物的抗性大大增强 ,但不同菌株的耐药水平有所不同 ,说明耐药质粒在不同菌株中的表达水平有所不同。  相似文献   

PAC改性粘土处理蓝藻水华对水环境的影响     

周庆  杨小杰  韩士群 《湖泊科学》2017,29(2):343-350

利用改性粘土治理蓝藻水华堆积的湖泊近岸区域以及发生水华的养殖水体成为应急治理蓝藻的重要措施,然而负载有毒藻体的改性粘土沉积水体可能引发的安全性风险尚缺乏研究.选取PAC改性粘土作为研究对象,通过模拟实验,研究改性粘土处理蓝藻水华后沉积水体对负载的藻细胞结构、水体营养盐与藻毒素的释放与削减以及对其他水体功能性细菌(硝化、反硝化细菌)的影响.结果表明,PAC改性粘土的施用对低水华水体蓝藻细胞的去除率为96.04%±0.99%,高水华水体与低水华水体施用的去除率之间差异不显著,PAC改性粘土的施用能够在较长的时间内有效地控制水体中的蓝藻浓度.透射电镜结果表明,PAC改性粘土沉降蓝藻第4 d后,蓝藻细胞膜出现了一定程度的不完整,细胞内规则的类囊体片层结构出现了实质性损伤.随着粘土负载蓝藻细胞的损伤,水体中的总可溶性氮浓度迅速上升,但总可溶性磷浓度仍可在较长一段时间内维持在较低水平.PAC改性粘土施用后,水体的总细菌数与空白对照组趋于一致,但硝化、反硝化细菌数却呈显著下降趋势.PAC改性粘土施用下的藻毒素释放风险主要集中在高水华水体.高水华水体中,PAC改性粘土施用导致藻毒素MC-LR和MC-RR加速释放,其最高峰值分别达到空白对照组的1.69±0.09和2.04±0.09倍,但水体MC-LR浓度达到安全限(1μg/L)的时间明显比空白对照组早8 d.此外,PAC改性粘土的施用并没有导致水体中Al~(3+)和Cl~-浓度超标.  相似文献   

中华乌塘鳢(Bostrychus sinensis)白细胞介素8基因的克隆及免疫应答表达分析     

陈林杰  沈斌  张建设 《海洋与湖沼》2024,55(2):499-508

由细菌等感染引起的疾病对中华乌塘鳢(Bostrychus sinensis)养殖业的可持续发展造成严重威胁。白细胞介素8 (Interleukin-8, IL-8)在调节炎症反应和抗感染免疫方面扮演着重要的作用。利用PCR扩增和克隆测序获得了中华乌塘鳢IL-8 (命名为BsIL-8) cDNA序列。BsIL-8 cDNA序列全长1 244 bp, 包含576 bp的5’端非编码区序列(5’-UTR), 312 bp的开放阅读框序列(ORF)和356 bp的3’端非编码区序列(3’-UTR)。BsIL-8共编码103个氨基酸, 包含1个由18个氨基酸组成的信号肽和1个由62个氨基酸组成的SCY结构域。其中, SCY结构域包含1个CXC基序(Cys³⁰-Arg³¹-Cys³²)以及4个保守的半胱氨酸残基(Cys³⁰、Cys³²、Cys⁵⁷和Cys⁷³)。序列分析结果表明, BsIL-8与大弹涂鱼(Boleophthalmus pectinirostris)的IL-8序列相似性和一致性最高(分别为92.4%和86.4%)。基因组织表达分布结果显示, BsIL-8基因在主要组织器官中呈泛在性表达, 头肾BsIL-8基础表达量最高, 肝脏次之, 外周血最低。Poly (I:C)免疫刺激后, BsIL-8在4个重要免疫器官(脾脏、肝脏、头肾和外周血)中的表达量均发生了显著的上调(分别在刺激后3、12、24和24 h时表达量达到最高, P<0.01)。副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)感染后, BsIL-8基因在脾脏和外周血中的表达量均显著上调(均在感染后12 h时表达量达到最高, P<0.01), 而在肝脏和头肾中的表达量均显著下调(均在感染后12 h时表达量达到最低, P<0.01)。综上所述, BsIL-8基因参与了中华乌塘鳢抗感染免疫应答过程。  相似文献