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采用基因工程的方法,进行重组质粒HF443一EGFP的构建和在哺乳动物细胞中的表达,并进行了其用于赤潮毒素检测的可能性研究。结果表明,用PCR技术扩增EGFP基因,用XbaⅠ、Hind Ⅲ双酶切并纯化,与同样双酶切并纯化的HF443质粒连接,可构建重组质粒HF443-EGFP;利用Lipofect AMINE2000转染体外培养哺乳动物BIU-87细胞。在培养体系中加入不同浓度的GTX,而后加入Na^ 通道激活剂乌头碱以诱导绿色荧光蛋白表达,荧光显微镜下观察细胞中绿色荧光蛋白表达的变化情况。细胞发出的荧光随毒素浓度的增加而减弱,存在一定的剂量效应关系,提示毒素GTX可显著影响绿色荧光蛋白的表达,重组质粒:HF443-EGFP用于赤潮霉素检测有一定的可行性. 相似文献
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