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假单胞菌(Pseudomonas sp.cn 4902)甘露醇-1-磷酸脱氢酶基因克隆及表达 总被引:1,自引:1,他引:1
参照几种生物的甘露醇—1—磷酸脱氢酶基因(mtl D)的序列设计引物,以极端耐盐的假单胞菌(Pseudomonas sp.cn 4902)的总DNA为模板,采用PCR扩增、构建重组高效表达载体以及生物信息学研究等方法,进行基因克隆、表达及功能定性等研究。结果表明,克隆获得一长为1149bp的基因。经蛋白质保守区域研究,初步判别该基因为mtl D结构基因。将该基因与pBV220质粒构建成高效表达原核重组载体pBH。SDS—PAGE电泳表明,含pBH的转化子产生特异的、分子量约为41kD的蛋白带,表达量约占菌体可溶性蛋白6.7%。转化子的耐盐水平比对照提高了约1/5。在含0.9mol/L NaCl的液体培养基中,转化子培养24h后其生物量约是对照的10.2倍,甘露醇含量约是对照的4.1倍。可见,假单胞菌的甘露醇—1—磷酸脱氢酶基因是一个重要的耐盐相关基因,该基因已在GenBank登记,代号为AY112696。 相似文献
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