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大菱鲆mIgD重链基因的克隆与表达分析 总被引：1，自引：0，他引：1
利用RACE技术克隆获得大菱鲆(Scophthalmus maximus)膜结合型免疫球蛋白D(Membrane-bounded Ig,mIgD)重链基因的cDNA序列全长,该基因全长3 357bp,包含1个2 997bp的开放阅读框,编码999个氨基酸,基因结构为VDJ-μ1-δ1-δ2-δ3-δ4-δ5-δ6-δ7-TM。重链恒定区δ1~δ7氨基酸序列同源比对结果显示,其与庸鲽(78%)、鳜(71%)、牙鲆(68%)具有较高的同源性;多序列比对结果显示,大菱鲆mIgD的每个δ恒定区内均存在色氨酸与半胱氨酸保守位点。利用邻位相连法构建硬骨鱼类免疫球蛋白系统发育树,结果显示,鱼类IgD聚为一大支,大菱鲆IgD与庸鲽及牙鲆聚为一支。利用RT-PCR分析了大菱鲆IgD重链基因的组织差异表达,结果显示,其在外周血白细胞、脾脏、前肾及中肾组织中具有较高的表达。将大菱鲆腹腔注射福尔马林灭活鳗弧菌后,实时荧光定量PCR检测其前肾组织中mIgD重链基因应答表达量,结果显示,mIgD重链基因在注射鳗弧菌后呈显著下调趋势,在注射后8h时降至最低值,其相对表达量约为对照组的1/28,然后呈逐渐恢复上调趋势,在48h时mIgD相对表达量与对照组无显著差异。 相似文献
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目的 了解HBV相关肝病患者外周血NK细胞表面PD-1、Tim-3的表达情况,探讨PD-1和Tim-3的表达与血清HBV-DNA载量的相关情况。方法 选择HBV感染相关肝病患者74例,其中CHB患者30例,LC患者24例,HCC患者20例,健康对照18例。应用流式细胞术检测NK细胞表面PD-1、Tim-3表达,荧光定量PCR检测HBV-DNA量,ELISA法检测细胞因子分泌水平。统计各组患者PD-1和Tim-3的表达率,比较各组差异,分析其与病情的相关性。结果 CHB、LC、HCC组外周血NK细胞表面PD-1和Tim-3的表达率分别为34.46%±7.31%、59.09%±12.35%、61.49%±15.26%和19.18%±6.05%、28.64%±11.20%、31.24%±11.85%,均高于对照组（P<0.01）,LC组和HCC组明显高于CHB组（P<0.01）,LC组和HCC组比较无统计学差异。在CHB组,PD-1的表达率与HBV-DNA呈负相关关系（R=-0.437,P=0.033）。CHB、LC、HCC各组血清中细胞因子TNF-α和IFN-γ水平分别为0.66±0.63、0.75±0.66、0.85±0.71和1.76±0.88、1.83±1.23、1.60±0.53,均低于健康对照组（P<0.01）。结论 HBV相关肝病患者NK细胞表面PD-1、Tim-3表达均增加,且与病情严重程度有关,增加表达的PD-1与血清HBV-DNA载量存在负相关性,HBV肝病各组血清TNF-α、IFN-γ分泌减少。 相似文献
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A pathogenic bacterium(S636),identified as Streptococcus iniae,was isolated from turbot(Scophthalmus maximus) in 2005.We immunized turbot with formalin-killed S.iniae four times(on days 1,14,21,and 28) by intraperitoneal inoculation.After each vaccination,we obtained serum samples and isolated the lymphocytes from the peripheral blood,spleen,pronephros,and mesonephros.We measured surface Ig-positive(sIg+) lymphocytes and serum antibody levels from these organs using flow cytometry and enzyme-linked immunoso... 相似文献
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以免疫两周的剑尾鱼为材料，提取脾脏总RNA，通过逆转录一聚合酶链式反应（RT-PCR）扩增出分泌型免疫球蛋白M（secretory immunoglobulin M，sIgM）重链基因的核心序列，再应用3’和5’快速扩增cDNA末端（RACE）方法扩增其末端序列，拼接后获得剑尾鱼sIgM重链全长cDNA序列。全长序列含有免疫球蛋白的信号序列：FKCIANH，得到的5个可变区序列可能来源于4个不同的VH家族。经用半定量RT-PCR分析sIgM在脾脏和头肾的表达变化，初步认为利用剑尾鱼头肾sIgM的mRNA表达变化替代检测血清抗体效价具有可能性。 相似文献
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以免疫两周的剑尾鱼为材料,提取脾脏总RNA,通过逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出分泌型免疫球蛋白M(secretory immunoglobulin M,sIgM)重链基因的核心序列,再应用3’和5’快速扩增cDNA末端(RACE)方法扩增其末端序列,拼接后获得剑尾鱼sIgM重链全长cDNA序列。全长序列含有免疫球蛋白的信号序列:FKCIANH,得到的5个可变区序列可能来源于4个不同的VH家族。经用半定量RT-PCR分析sIgM在脾脏和头肾的表达变化,初步认为利用剑尾鱼头肾sIgM的mRNA表达变化替代检测血清抗体效价具有可能性。 相似文献
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SERUM IMMUNOGLOBULIN OF THE MANDARIN FISH,SINIPERCA CHUATSI WITH DEVELOPMENT OF POLYCLONAL ANTIBODY 总被引：2，自引：0，他引：2
Serum immunoglobulin from the mandarin fish,or the so-called Chinese perch,Siniperca chuatsi(Basilewsky),was successfully purified using affinity chromatography.Heavy and light chains were detected on electrophoresis gel,with molecular weights being estimated at 72 and 29 kDa,respectively.The tetrameric IgM of S.chuatsi was calculated to be 808 kDa.The rabbit polyclonal antisera against the purifed immunoglobulin were developed and tested by Westem blot analysis.The antisera reacted strongly with the heavy chains of S.chuatsi immunoglobulin.Humoral immune responses of the mandarin fish can then be examined using the developed polyclonal antibody. 相似文献
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四种海水养殖鱼类血清免疫球蛋白的分离纯化及分子量测定 总被引：18，自引：0，他引：18
利用Protein A-sepharose亲和性层析一步法，首次分离纯化了4种海水养殖鱼类（3种暖水性鱼类：紫笛鲷Lutjanus argentimaculatus,青石斑鱼Epinephelus awoara，尖吻鲈Lates calcarifer和1种冷水性鱼类牙Ping Paralichthys olivaceus）血清中的免疫球蛋白（Ig)。3种暖水性鱼类Ig的分离效果较好，牙Ping较差。层析曲线的洗脱峰值说明牙Ping血清的Ig同紫红笛鲷，青石斑鱼，尖吻钙3种暖水性鱼类血清的Ig在结构和功能上有明显的差异。通过SDS－PAGE电泳测得其重链分子量分别为紫红笛鲷79.5kDa和75.0kDa，青石斑鱼77.2kDa，尖吻鲈81.8kDa和75.7kDa，牙Ping 73.5kDa，轻链分子量分别为30.1kDa，31.1kDa,29.7kDa和15.0kDa。 相似文献
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目的：观察扶阳罐干预背俞功能带对慢性疲劳综合征（CFS）的疗效及免疫球蛋白的影响。方法：将60 例CFS患者随机分为治疗组和对照组,每组各30 例。治疗组采用扶阳罐干预背俞功能带法治疗,对照组采用推拿、捏脊、拔罐背俞功能带法治疗。2组均治疗15次后比较其临床疗效、疲劳评定量表（FAI）评分及免疫功能指标［免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白G（IgG）］水平。结果：治疗过程中治疗组脱落1例,对照组脱落2例。总有效率治疗组为93.10%（27/29）,对照组为92.86%（26/28）,差异无统计学意义（P>0.05）。治疗后2组FAI评分均较治疗前降低,差异均有统计学意义（P＜0.01）,但治疗后组间比较,差异无统计学意义（P>0.05）。2组IgA、IgM、IgG水平均较治疗前升高,差异均有统计学意义（P＜0.01）,其中,治疗组的IgM、IgG水平高于对照组,差异均有统计学意义（P＜0.01）。结论：扶阳罐干预背俞功能带治疗CFS疗效颇佳,能明显改善患者疲劳状态,提高患者机体免疫力,是一种简单有效的治疗方法。 相似文献