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泥蚶(Tegillarca granosa)肉质的蛋白组学研究 总被引：2，自引：1，他引：1
采用双向电泳技术,对广东阳江和浙江乐清两地的泥蚶肌肉全蛋白进行了研究,并利用质谱和软件对差异蛋白进行了分析.研究结果表明,阳江和乐清两地样品平均检测到的蛋白点数分别为674±25和746±34个,平均匹配率为78.6%.差异表达蛋白质点数为26个,其中3个点仅在阳江泥蚶中表达,5个点仅在乐清泥蚶中表达;6个点在阳江泥蚶中为高表达,12个点在阳江泥蚶中为低表达.选择其中6个具有代表性的蛋白点进行肽指纹图谱分析.结果显示,乐清泥蚶中高表达的4个蛋白确定为肌动蛋白、PRKA激酶锚定蛋白9、烯醇化酶.这些物质与泥蚶的肉质特性有一定关联.乐清地区出产的泥蚶在营养、肉质和鲜美度方面均优于阳江地区的泥蚶. 相似文献
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构建了文蛤铁蛋白的重组表达质粒 pGEX-4T-1-MmeFer, 在大肠杆菌 Escherichia coli 中获得了重组蛋白, 经酶解和质谱鉴定该蛋白为重组文蛤铁蛋白(rGST-MmeFer), 切除 GST 标签的重组文蛤铁蛋白(rMmeFer)具有氧化和吸收铁离子的功能。利用 rGST-MmeFer 制备了兔抗文蛤铁蛋白的多克隆抗体, 进而利用 Western blot 的方法对文蛤铁蛋白的组织表达分布进行了研究。结果表明, 铁蛋白在文蛤各组织中均有分布, 其中消化腺中表达量最高, 足中表达量最低。此外, 利用实时定量PCR 分析了文蛤消化腺、外套膜和鳃组织中铁蛋白 mRNA 的表达, 发现铁蛋白 mRNA 在外套膜中表达量最高, 消化腺次之, 鳃中表达量最低, 差异达到显著水平(P<0.05)。上述结果为进一步研究铁蛋白参与贝类贝壳形成的分子机制奠定了基础。 相似文献
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利用扫描电镜技术、X-射线粉末衍射技术和弱酸去钙法,对菲律宾蛤仔、文蛤、厚壳贻贝、泥蚶、缢蛏5种习见海洋经济贝类贝壳的断面微观结构、物相组成、有机基质和蛋白质含量等进行了观察和分析。电镜观察结果显示, 5种贝壳的微观结构主要包含棱柱层和珍珠层;棱柱层晶体结构有斜棱柱层、球棱柱层、棱柱层、均质层和交错板状层5种类型,其中缢蛏只有斜棱柱层,而泥蚶除球棱柱层外,其他4种晶体类型均存在,此复杂结构可能与其贝壳强度大有关;珍珠层晶体结构有珍珠层和肌棱柱层2种类型,其中厚壳贻贝的珍珠层呈典型的“砖-泥”结构,具有明显的层状结构,其余4种贝壳珍珠层均由不规则块状结构组成。X-射线衍射结果显示,菲律宾蛤仔、文蛤、缢蛏和泥蚶4种贝壳都属于文石质壳体,无机相几乎由文石组成,而厚壳贻贝属于混合质壳体,无机相由文石和方解石组成;贝壳化学成分分析显示,5种贝壳有机质含量均为3%左右,而总蛋白含量占有机质的2.98%～7.21%,其中可溶性蛋白是不可溶蛋白含量的5.55～20.31倍。上述结果为贝壳形成机理的研究积累了基础资料。 相似文献
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刺参(Apostichopus japonicus)腐皮综合症发生相关蛋白的分离与鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
采用比较蛋白质组学的方法,对2011年10月20日取自辽宁省普兰店室内养殖厂腐皮综合症刺参和健康个体肠组织中差异表达蛋白进行了研究。结果表明,在优化的电泳条件(80μg脱盐蛋白、pH4—7[NL,13cm]的IPG预制胶条)下,共检测到约700个蛋白质点;表达量差异两倍以上的蛋白点51个,最大表达差异比率为4.32;对其中重复性一致的30个差异点进行质谱鉴定,成功鉴定了23个差异蛋白,包括铁蛋白,过氧化氢酶,泛素相关修饰子3,细胞色素氧化酶和肌动蛋白等;进一步扫描实验室完成的刺参转录组数据,筛选了过氧化氢酶和泛素相关修饰子3的EST序列。本研究是蛋白层面上刺参腐皮综合症发生机制的有效尝试,研究结果为进一步认识该疾病的发生机制提供了参考。 相似文献
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文蛤(Meretrix meretrix)是我国重要的滩涂养殖贝类,病害严重影响文蛤增养殖业,研究文蛤的免疫机制有助于解决文蛤的病害问题。C型凝集素(C-type lectin)参与先天免疫,在识别病原相关分子模式和激活体液免疫因子等方面发挥重要作用。本研究检索已构建的文蛤全长cDNA 文库,经过Blast比对得到了文蛤C型凝集素1(Mm-Lec1)基因的全长cDNA序列。Mm-Lec1序列全长586 bp,5'和3'非翻译区(UTR)的长度分别为21 bp和79 bp,开放阅读框长度为486 bp,编码161个氨基酸,分子量为18.65 kD,理论等电点为4.98。预测的氨基酸序列中含有信号肽(Met1-Ser19)、糖识别结构域(CRD)和糖结合位点(QPN)。Mm-Lec1的三级结构是紧凑型,含有β片层结构。同源性分析结果表明,Mm-Lec1与其他物种C型凝集素相似度在20%~32%;邻接法(Neighbor-Joining, NJ)进化树分析结果表明,Mm-Lec1与紫贻贝CTL 6和栉孔扇贝CTL A聚为一支。实时荧光定量分析结果显示,Mm-Lec1在文蛤鳃、肝胰腺、闭壳肌、外套膜、性腺和血细胞中均表达,其中鳃表达量最高,血细胞次之,性腺中表达量最少;在鳗弧菌(Vibrio anguillarum)刺激实验中,6 h时Mm-Lec1在血细胞中的表达量最低,48 h表达量最高,暗示Mm-Lec1参与文蛤抵御细菌入侵的免疫过程。 相似文献
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建立检测鸡鸭血浆中喹烯酮的方法,并测定其与鸡鸭血浆蛋白的结合率。采用平衡透析法测定喹烯酮的血浆蛋白结合率;血浆样品采用乙腈沉淀蛋白后用HPLC测定喹烯酮含量,同时采用HPLC测定透析外液中喹烯酮的含量,计算喹烯酮的血浆蛋白结合率,并对检测方法的方法学进行验证。建立的测定鸡鸭血浆中喹烯酮的方法,喹烯酮添加浓度为0.3、1和2μg/mL时,回收率范围为86.5%~92.2%,相对标准偏差均低于5%。喹烯酮在不同浓度的鸡鸭血浆中的平均蛋白结合率分别为40.53%±1.09%和46.88%±1.25%。喹烯酮药物浓度在0.5~8μg/mL的浓度范围内其血浆蛋白结合率无显著差异,其蛋白结合呈现非浓度依赖性。上述结果表明,喹烯酮在鸡鸭中应用时不易发生血浆蛋白结合介导的药物相互作用,药物的安全性较高。 相似文献
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以杂色鲍(Haliotisdiversicolor)血淋巴为材料进行了双向电泳研究。首先,确定了以丙酮沉淀法和RC DC 蛋白定量试剂盒为基础的蛋白制备与定量方法;其次,对样品前处理方法进行了摸索,通过500 r/min的低速离心方法分离了血细胞和血浆组分,通过35000 r/min超速离心2 h除掉了部分高丰度的血蓝蛋白,降低了高分子量区域的血蓝蛋白背景;进一步使用18 cm pH 3-10非线性胶条和标准化的电泳程序,对不同上样量的电泳银染结果进行了比较,获得了良好的双向电泳图谱;最终选取肌动蛋白、原肌球蛋白、胶原蛋白和血蓝蛋白4个蛋白点成功进行了质谱鉴定。 相似文献
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牙鲆(Paralichthys olivaceus)红细胞单克隆抗体与五种养殖鱼类血细胞的交叉反应 总被引：1，自引：0，他引：1
以牙鲆血细胞为抗原免疫Balb／c小鼠，选用聚乙二醇(PEG)作为细胞融合剂，将免疫的小鼠脾细胞与P3 X63 Ag8U1骨髓瘤细胞融合，筛选、克隆出3株生产抗牙鲆红细胞单克隆抗体(Mabs)的杂交瘤细胞(1C7、286、3A1)。应用免疫荧光抗体法(IFAT)研究3株单抗与5种常见养殖鱼类(大菱鲆、花鲈、真鲷、许氏平鲉、鲫鱼)红细胞的交叉反应，结果显示，3株单抗与5种鱼类红细胞有不同程度的阳性反应；应用Western blotting法分析单抗识别的蛋白分子量，结果显示，单抗1C7与大菱鲆血细胞结合的蛋白分子量为52kD、47kD、45kD、32kD、29kD、27kD，与花鲈、许氏平 结合的蛋白分子量是52kD、29kD，与真鲷结合的为29kD，与鲫鱼结合的为44kD、29kD、28kD；单抗286与大菱鲆、花鲈血细胞结合的蛋白带分子量是30kD、28kD，与真鲷结合的为30kD，与许氏平 结合的为29kD、28kD；单抗3A1没有Western blotting反应。结果表明，这6种鱼红细胞存在相同或相似的抗原决定簇，蛋白成分具有相似性。 相似文献
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一种来自海洋细菌的血纤维蛋白溶酶的分离纯化及性质研究 总被引：2，自引：0，他引：2
利用硫酸铵分级盐析、DEAE－纤维素阴离子交换层析、Sephadex G-75凝胶层析法对由海洋细菌FE92－8分泌的纤维蛋白溶酶进行了分离纯化，结果得到SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳单一区带。性质研究发现，该酶分子量为12.6kD，等电点为7.45，琼脂糖－纤维蛋白平板法测得该酶作用的最适温度为50℃，最适pH为8.0，在37℃，pH为8.0的情况下表现出很好的稳定性，温度起来50℃热稳定性较差，在碱性环境中稳定性较在酸性环境中稳定性强，阴性平板和阳性平板对比实验发现，该酶只有纤溶活性而无激酶活性，体外实验发现，该酶具有快速溶解血栓的能力。 相似文献
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One-dimensional sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and high resolution two-dimensional electrophoresis (2-DE) were applied to separate protein molecules in dissolved organic matter (DOM) from oceanic waters. Results were: (1) The 2-DE distinguished a total of 412 protein spots in 10 samples from five water columns over the Pacific, although fewer than 30 proteins were resolved as bands from the identical samples by SDS-PAGE. (2) Major and ubiquitous protein bands (34 and 39 kDa proteins) on the SDS-PAGE gel were resolved into horizontally spread arrays (trains) of spots on the 2-DE gels, indicating that these bands were a mixture of protein species that have the same molecular weight (MW) but different isoelectric points (pIs). (3) Proteins that exhibited such electrophoretic patterns on the 2-DE gels were glycosylated with variable linkages between the sugar and polypeptide chains. (4) N-terminal amino-acid sequencing demonstrated that individual spots within each train of spots had identical N-terminal amino-acid sequences.The N-terminal amino-acid sequences of the 39 and 34 kDa glycoprotein spots in samples collected at different sites were also identical. Protein isoforms with the same amino-acid sequence but different glycosylation profiles, termed glycoforms, were often observed on the 2-DE gel. Thirty-one and 24 spots on the 2-DE gels were glycoforms of two glycoproteins with MWs of 39 and 34 kDa, respectively; they were one protein species. The glycoforms of the 39 kDa protein were identified as a low molecular weight alkaline phosphatase (L-AP) of Pseudomonas aeruginosa PAO1 by a homology search through five amino-acid sequence databases. The present and earlier work indicates that all identified source organisms of dissolved proteins belong to the Pseudomonas group. We propose the hypothesis that proteins associated with membrane vesicles liberated from a minor member of the bacterioplankton assemblage, the marine Pseudomonas group, are one of the important sources of dissolved proteins in oceanic waters. This hypothesis may apply to the source pathway and survival not only of proteins and also to the universally occurring bacterial peptidoglycan and lipopolysaccharide components in DOM. 相似文献
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研究两种硒化物在文蛤富集、排出镉过程中的作用,对文蛤进行转录组测序,并进行生物信息学分析,以探讨硒化物对Cd2+代谢相关机制。硒化卡拉胶组和亚硒酸钠组共产出587 855条高质量reads。基因本体分析功能注释到15 380条unigenes, KEGG通路注释到18 866条unigenes。差异基因主要富集到肌球蛋白复合物(myosin complex)、离子通道抑制(ion channel suppression)等基因本体分析功能中。差异基因KEGG通路富集显示,在嘌呤代谢(purinemetabolism)、ECM受体相互作用(extracellularmatrix receptor interaction)、硒化合物代谢(metabolism of selenium compounds)等通路显著富集。从结果分析Cd2+可以使文蛤体内蛋白转录修饰出现异常;有机硒可以通过调控金属离子通道活性来排出细胞内的Cd2+;无机硒主要作用于文蛤细胞表面,增强其表面活性抵御Cd2+进入细胞;差异基因KEGG注释结果表明有机硒与无机硒在文蛤重金属代谢中作用机制以及途径不相同。 相似文献
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刀额新对虾主要过敏原蛋白的肽指纹图谱鉴定与分析 总被引：1，自引：0，他引：1
以我国常见的刀额新对虾为研究对象,旨在获得其主要过敏原的氨基酸序列等基础数据,增加对虾类过敏原的认识和理解。分离和纯化了分子量为36 kD的虾主要过敏原蛋白,利用激光辅助解析/飞行时间质谱对其进行肽质量指纹图谱鉴定,并对鉴定的结果采用Mascot搜索引擎在NCBInr数据库上进行搜索。结果表明刀额新对虾主要过敏原蛋白与斑节对虾原肌球蛋白匹配分值最高为268,吻合肽段27条,序列覆盖率为65%;与其它无脊椎动物如腐食酪螨、衣鱼等的原肌球蛋白的序列覆盖率也很高,分别达到了51%和53%。这一结果不仅表明了刀额新对虾与其它甲壳类海产品过敏原存在着高度同源性,而且为其与甲壳类及其它无脊椎动物主要过敏原之间存在严重交叉反应的现象提供了理论依据。 相似文献
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Dissolved proteins in seawater samples collected from a coastal area of Tokyo Bay, Sagami Bay and a location off the Kuroshio
Current were investigated by one-dimensional sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and high
resolution two-dimensional electrophoresis (2-DE). Four to nine protein bands were detected in SDS-PAGE in the apparent molecular
weight (MW) range from 12 kilo Dalton (kDa) to 49 kDa. The 2-DE technique distinguished 10 to 46 protein spots exhibiting
isoelectric point (pI)/MW ranging 4.3–9.2/12–63 kDa. The elecrophoretic patterns were similar between the coastal and pelagic samples, as well
as previously reported patterns from various pelagic areas. The close similarity of electrophoretic mobility on both SDS-PAGE
and 2-DE gels indicates the compositional homogeneity of dissolved proteins in seawater throughout a broad range of marine
environments. Proteinaceous dissolved organic matter (DOM) that was unresolved and smeared staining characteristics on both
SDS-PAGE and 2-DE gels was first observed in Tokyo Bay waters in the present study and its possible sources are discussed.
Although the two protein species, 48 kDa and 39 kDa proteins, have been identified as homologues of Porin P and low molecular
weight-alkaline phosphatase of Pseudomonas aeruginosa PAO1, respectively, four strains of P. aeruginosa and two species of Pseudomonas spp. have been newly identified as the source organisms of these proteins using the N-terminal amino acid sequence data determined in previous studies. 相似文献
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文蛤外套膜"肥大症"的组织病理学研究 总被引：1，自引：0，他引：1
2003年3～5月,山东莱州某养殖场部分养殖文蛤（Meretrix meretrix Linnaeus）出现外套膜异常肥大现象.组织病理学研究显示,患病贝外套膜、水管、鳃、足等器官组织内粘液细胞增多,水管两侧的外套膜结缔组织中粘液细胞增生尤为明显.同时,患病贝各器官组织还呈现出不同程度的病理学变化,主要表现为组织结构紊乱,上皮细胞肿胀、脱落,生殖细胞滞育、退化,肌纤维变形、溶解,血细胞增生并诱发炎症反应等.在患病贝体内主要观察到3种寄生性原生动物,分别为缘毛类纤毛虫、粘孢子虫及1种顶复门类“孢子虫”.纤毛虫数量较少,主要寄生于鳃表面;粘孢子虫数量较多,寄生在水管、外套膜、鳃、性腺、消化盲囊、血淋巴等器官组织中,以水管结缔组织内数量最多;而顶复门类“孢子虫”主要发现于消化道结缔组织中.组织病理学研究表明,这3种寄生虫可能是病害发生的重要原因. 相似文献
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本研究将新发现的鳗弧菌毒力相关基因mltD(膜绑定溶胞壁质转糖酶基因)克隆于表达载体pET-32a(+),在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,并以镍琼脂糖亲和层析柱纯化表达的融合蛋白;经SDS-PAGE分析,纯化的融合蛋白为单一条带,分子量约为70.2 kDa,与理论预测值相符。生物信息学分析表明,鳗弧菌MltD由523个氨基酸组成,与其他弧菌的MltD氨基酸序列有较高的相似性;二级结构以α螺旋和无规则卷曲为主;功能区包括N端的信号肽区域、1个糖基转移酶结构域和C端的3个溶解酶结构域;蛋白的N端具有一段脂蛋白信号肽,信号肽外的其他部分为非细胞质蛋白。鳗弧菌MltD蛋白为亲水性;不稳定系数为27.40,属于稳定性蛋白;整个蛋白分子共有24个可能的抗原决定簇,具有较强的抗原性。推断MltD蛋白为1种外周膜脂蛋白,在弧菌中相对保守,抗原性强,可应用于抗弧菌病疫苗的开发研制。 相似文献