玻尿酸合成酶的鲨鱼源单域抗体筛选     

束树超  徐明策  哈承旭  周宇杭  邓鹏辉  查丽莎  陈锦霖  陈建明  毕允晨 《海洋科学》2022,46(8):111-120

在鲨鱼等软骨鱼类体内存在天然的缺失轻链、仅包含重链的抗体,源于这种重链抗体可变区的片段称为单域抗体(single domain antibody)。目前单域抗体研究中的抗原主要来源于水溶性蛋白或病原体,筛选膜蛋白鲨鱼源单域抗体的领域接近空白。本研究以重组表达的小球藻病毒玻尿酸合成酶(一种膜蛋白)为抗原,经过免疫、建库、淘选、验证等步骤获得了抗原特异性条纹斑竹鲨(Chiloscyllium plagiosum)单域抗体序列。随后利用大肠杆菌表达了该单域抗体,通过等温滴定量热技术(ITC)测定了其与抗原的亲和力,证实了以膜蛋白作为抗原制备鲨鱼源单域抗体的可行性。  相似文献   

牙鲆NPY的体外表达及体内检测     

王倩  谭训刚  孙威  尤锋  张培军 《海洋科学》2014,38(4):15-19

神经肽Y(Neuropeptide Y,NPY)被普遍认为是一种重要的促食因子,在调节鱼类的摄食行为方面起着至关重要的作用。为进一步研究牙鲆NPY蛋白的生物学功能,作者克隆了牙鲆NPY成熟肽序列(m-NPY)及含有信号肽的全长序列(f-NPY),利用原核表达系统分别进行体外重组表达,筛选出诱导剂IPTG最佳诱导浓度为0.8 mmol/L及最佳诱导时间3 h;此外,根据牙鲆NPY第49-64位氨基酸序列制备了多克隆抗体并通过Western blot验证该多抗能够有效检验重组NPY及牙鲆体内NPY的表达。研究结果为研究重组牙鲆NPY蛋白在牙鲆水产养殖产业中的应用及检测提供了依据。  相似文献   

活动性肺结核高分辨CT的影像特点及联合T-SPOT.TB和TB-Ab诊断价值分析          下载免费PDF全文

孙培培  刘树荣  侯学静  姜立杰  王强 《CT理论与应用研究》2021,30(3):331-339

目的:观察活动性肺结核高分辨CT影像学特点及联合T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)和血清结核抗体(TB-Ab)检测的诊断价值.方法:选择2016年1月至2019年7月医院收治的疑诊活动性肺结核198例,入院后均接受高分辨CT检查、T-SPOT.TB及TB-Ab检查,总结活动性肺结核高分辨CT特点及T-SPOT.TB、TB-Ab联合诊断效能.结果:112例确诊活动性肺结核患者中见小叶中心结节、树芽征各92例(82.14％),支气管管壁增厚82例(73.21％),肺实变86例(76.79％),空洞征82例(73.21％),线状影81例(72.32％),液体支气管征81例(72.32％),磨玻璃征64例(57.14％).高分辨CT诊断活动性肺结核敏感度、特异度、准确率分别为77.67％、82.56％和79.80％,阳性预测值与阴性预测值分别为85.29％和73.96％;T-SPOT.TB诊断敏感度、特异度、准确率分别为95.54％、90.70％和93.43％,阳性预测值与阴性预测值分别为93.04％和93.98％;TB-Ab诊断敏感度、特异度、准确率分别为28.57％、82.56％和52.02％,阳性预测值与阴性预测值分别为68.09％和44.10％;联合诊断敏感度、特异度、准确率分别为97.32％、95.35％和96.46％,阳性预测值与阴性预测值分别为96.46％和96.47％.结论:活动性肺结核高分辨CT特异性征象为小叶中心结节、树芽征、支气管管壁增厚、肺实变、空洞征等,有助于其诊断及识别.而T-SPOT.TB对活动性肺结核诊断效能最高,对其无法确诊病例可辅助高分辨CT及TB-Ab检查,提高活动性肺结核检出率.  相似文献   

18F-FDG PET/CT联合神经元抗体检测诊断神经系统副肿瘤综合征          下载免费PDF全文

袁磊磊  陈谦  乔真  李晓桐  樊迪  张巍  艾林 《CT理论与应用研究》2023,32(2):209-215

目的:探讨全身18F-FDG PET/CT联合神经元抗体检测在神经系统副肿瘤综合征（PNS）患者诊疗中的应用价值。方法:回顾性收集56例临床疑诊PNS患者的临床、神经副肿瘤抗体检测及全身18F-FDG PET/CT资料,对照病理及临床随访结果,利用ROC曲线评价PET/CT、神经元抗体及二者联合检测结果的诊断效能。结果:56例疑诊PNS患者中,共有肿瘤患者20例,其中肿瘤伴PNS 19例,肿瘤伴脊髓转移1例。18F-FDG PET/CT显像提示肿瘤或可能肿瘤23例,其中20例为真阳性,3例为假阳性（随访结果分别为反流性食管炎、反应性骨改变、颈部炎性病变）,其余33例为真阴性;敏感度、特异度、准确度分别为100.0％、91.7％、94.6％。神经元抗体阳性33例,其中PNS伴肿瘤8例（抗Amphiphysin抗体脑炎3例,抗GABAB抗体脑炎2例,抗Yo抗体脑炎1例,抗Hu抗体脑炎2例）,PNS不伴肿瘤25例（LGI1抗体脑炎10例,抗Amphiphysin抗体脑炎3例,抗Hu抗体脑炎1例,抗GABAB抗体脑炎3例,抗Yo抗体脑炎3例,抗CASPR2、GAD65、NMDA、PNMA及SOX1抗体脑炎各1例）;神经元抗体阴性23例（其中伴肿瘤12例）;敏感度、特异度、准确度分别为40.0％、30.6％、33.9％。两种联合检测结果的敏感度、特异度、准确度分别为100.0％、33.3％、57.1％,50.0％、94.4％、78.6％。ROC分析显示AUC分别为0.958（P<0.001;95％CI,0.904～1.000）、0.353（P>0.05;95％CI,0.199～0.506）、0.667（P<0.05;95％CI,0.528～0.806）及0.672（P<0.05;95％CI,0.514～0.830）,18F-FDG PET/CT及两种联合检测方法具有统计学意义。结论:全身18F-FDG PET/CT可作为疑诊PNS患者无创筛查肿瘤的一线检查方法。   相似文献   

降低交叉反应的鱼类病原菌检测抗体芯片初步研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

王欣欣  绳秀珍  战文斌 《海洋湖沼通报》2013,(1):23-28

采用菌体吸附法对海豚链球菌(Streptococcus iniae)、迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)、鳗弧菌(Vibrio anguillarum)、杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida)、荧光假单胞菌(Psedomonas fluo-rescens)和海洋分支杆菌(Mycobacterium marinum)6种养殖鱼类病原菌的兔抗血清进行吸附,以减小抗血清与其它菌株的交叉反应;吸附纯化后的抗体作为捕获抗体构建了病原菌检测抗体芯片。实验结果显示,与未经过吸附的纯化抗血清构建的抗体芯片相比,血清吸附实验能有效减少交叉反应,降低抗体的非特异性吸附,提高细菌检测的特异性。同时,以迟缓爱德华氏菌为例,采用吸附纯化后抗体制备的抗体芯片检测人工感染迟缓爱德华氏菌和自然发病的牙鲆,均观察到迟缓爱德华氏菌的特异性显色反应,得到了较理想的检测结果。本文结果说明优化后的病原菌检测抗体芯片可用于水产养殖鱼类常见的上述6种细菌性疾病的有效检测。  相似文献   

Preparation of hemocyanin polyclonal antibody and the identification of 35 kDa hemocyanin fragment in HaHotis diversicolor Reeve     

《海洋科学》2012,36(3)

以杂色鲍（Haliotis diversicolor Reeve）为研究对象,通过密度梯度离心方法纯化得到高纯度血蓝蛋白,以其作为抗原皮下注射免疫新西兰大白兔,从而获得高效价的兔源多克隆抗血清。进一步通过ProteinA抗原亲和纯化的方法对该抗血清纯化,最终获得效价更高、检测特异性更好的血蓝蛋白多克隆抗体。应用该抗体进行Western检测发现,鲍血淋巴中存在着多样的血蓝蛋白衍生产物;进一步结合质谱技术对其中35kDa条带进行鉴定发现,其来源于血蓝蛋白I型亚基的H结构域。  相似文献   

新加坡石斑鱼虹彩病毒ORF162蛋白的表达、纯化及抗体制备     

夏立群  梁海鹰  江韶英  张尧清 《广东海洋大学学报》2010,30(1):59-64

将新加坡石斑鱼虹彩病毒(Singapore grouper iridovirus,SGIV)的ORF162的开放式阅读框插入pET-32a表达载体T7启动子控制下的6-His·Tag编码基因上游,构建SGIVORF162原核表达质粒pET-ORF162。表达质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导,成功表达SGIV ORF162融合蛋白。对IPTG浓度、诱导温度、诱导时间等诱导表达条件进行优化后,确定在0.7mmol/LIPTG、16℃条件下诱导14h时可溶性SGIV ORF162重组蛋白占重组蛋白总量的95%。经镍琼脂糖凝胶纯化,获得纯度为90%以上的SGIV ORF162蛋白。用纯化的SGIV ORF162蛋白免疫小鼠,获得高效特异的SGIV ORF162多克隆抗体。  相似文献   

鲶爱德华氏菌间接酶联免疫快速检测法的建立     

李重实  李强  刘海燕  叶仕根  李华 《广东海洋大学学报》2010,30(4)

用鲶爱德华氏菌兔抗血清作为一抗,碱性磷酸酶(AP)标记的羊抗兔IgG作为酶标二抗,建立黄颡鱼"红头病"病原菌—鲶爱德华氏菌的间接酶联免疫(ELISA)快速检测法,并优化检测条件。抗原最佳包被浓度为107/mL,一抗工作的最佳稀释度为1∶211,病原菌的检测灵敏度为105/mL,交叉反应实验证明该方法特异性强,与迟钝爱德华氏菌、弧菌等13种标准菌株无交叉。应用上述技术对人工感染发病鱼中分离的优势菌进行检测,结果表明阳性检出率为80%;对自然发病黄颡鱼体内分离获得的20株优势菌检测结果表明,12株菌为鲶爱德华氏菌。  相似文献   

副溶血弧菌特异性卵黄抗体(AHPND-VpIgY)对凡纳滨对虾幼体被动免疫和育苗成活率的影响     

闫茂仓  王瑶华  胡利华  张炯明  刘亚南  唐明  罗奎  黄贤克  周前进  陈炯 《海洋与湖沼》2019,50(2):443-448

将抗高致病性副溶血弧菌(Vibrioparahaemolyticus)特异性卵黄抗体(AHPND-VpIgY)应用于育苗生产,通过测定氨氮、亚硝酸盐、细菌总数、弧菌总数、相对保护率和育苗成活率,评价了AHPND-VpIgY在育苗期对凡纳滨对虾(Litopenaeusvannamei)幼体的保护效果。结果表明,0.1g/m3和0.2g/m3AHPND-VpIgY组的相对保护率为35.7%和57.2%,两者均显著高于非特异性卵黄抗体组(P0.05);两组的育苗成活率为50.8%和57.2%,比对照组分别提高19.1%和25.6%。各实验组氨氮、亚硝酸盐、细菌总数及弧菌总数与对照组无显著差异,对水质无影响。综上,特异性的AHPND-VpIgY能在不改变水质的前提下,有效提高凡纳滨对虾幼体的存活率、相对保护率和育苗成活率,从而提高凡纳滨对虾苗种产量和质量。  相似文献   

溶藻弧菌的间接荧光抗体快速检测   总被引：18，自引：0，他引：18  

王军  鄢庆枇  苏永全  张纹 《海洋科学》2002,26(7):1-4

建立了大黄鱼病原溶藻弧菌的间接荧光抗体检测方法，溶藻弧菌的特异性抗血清由新西兰兔制备，试管凝集法测定抗血清及交叉反应效价，吸附离心法去除交叉反应，荧光抗体为异硫氰酸荧光素标记的羊抗兔免疫球蛋白，现场检测对具典型弧菌病表症大黄鱼病原检出率为100％，表观健康大黄鱼病原检出率为30％，养殖海水检测结果均为阴性，结果表明，间接荧光抗体检测法不仅可以用于已感染发病大黄鱼的快速检测，而且还能用于已感染未发病大黄鱼的检测。  相似文献