红螯螯虾网格蛋白轻链的克隆及制备抗体的检测          下载免费PDF全文

黄家骏  李钫  杨丰 《应用海洋学学报》2016,35(2):205-210

网格蛋白为三脚蛋白复合体,其介导的内吞作用是病毒侵染细胞的常用途径之一.而对虾白斑综合症病毒(white spot syndrome virus,WSSV)是对虾养殖业的主要病原,为了研究分析WSSV的侵染机制及进入宿主细胞的途径,在本研究中,克隆得到红螯螯虾(Cherax quadricarinatus)网格蛋白轻链的c DNA全长,并将其命名为Cq CLC(Genbank登录号为KR075008).进化树分析表明,其与黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)的网格蛋白轻链进化距离较近.此外,在其蛋白序列中选择抗原性较好的片段合成多肽,并以此制备单克隆抗体,而后经免疫荧光和western blot检测从中筛选出具有特异性的抗体,为进一步对WSSV侵染虾细胞机制及入胞途径的研究奠定了基础.  相似文献   

哈维氏弧菌溶血素基因vhhA在大肠杆菌中的表达及活性研究     

钟英斌  张晓华  陈吉祥  孙铂光  李筠 《中国海洋大学学报(自然科学版)》2007,37(1):97-102

哈维氏弧菌（Vibrio harveyi）是水产养殖动物（鱼、虾）的重要致病菌。已发现哈维氏弧菌对鱼类的致病性与其分泌的胞外产物中的溶血素相关，致病力最强的菌株VIB645有2个碱基序列非常相似的溶血素基因，vhhA和vhhB。本研究将vhhA克隆于pET-24d（＋）表达质粒，VHH溶血素蛋白作为1种带6组氨酸的融合蛋白在大肠杆菌BL21（DE3）中得到了过量表达。重组菌在鱼血平板上表现出很强的溶血活性，并且在卵磷脂平板上表现出磷脂酶活性。SDS-PAGE分析表明，表达蛋白的分子量约为43kDa。在17，25和37℃时重组的VHH溶血素蛋白都能得到很好的表达，达到最大表达量的时间分别为9,6和3h。在25℃进行诱导时，分泌到上清液中的表达蛋白的量最多。  相似文献   

白骨壤铜锌超氧化物歧化酶基因片段的克隆与序列分析     

杨盛昌  谢潮添  刘敏 《海洋科学》2004,28(1):43-47

以红树植物白骨壤(Avicennia marina)基因组DNA为模板，根据超氧化物歧化酶基因保守序列设计特异引物进行PCR扩增，得到特异基因片段。回收该基因片段，与pMD18-T载体连接,并转化到感受态大肠杆菌ER2566细胞，获得铜锌超氧化物歧化酶基因片段的克隆。序列分析表明白骨壤铜锌超氧化物歧化酶基因片段含4个外显子和3个内含子，编码78个氨基酸,与水稻、玉米、红薯和白杨相应氨基酸序列的同源性分别为83．3％，84．6％，84．6％和87．2％。  相似文献   

条斑紫菜丝状孢子体cDNA文库构建及抗病相关基因鉴定   总被引：1，自引：3，他引：1  

杨官品  刘永健  孙雪  沈怀舜  许璞  张学成 《中国海洋大学学报(自然科学版)》2003,33(1):47-52

经过微量总 RNA抽提、c DNA合成、c DNA扩增和克隆等步骤 ,构建了微量条斑紫菜丝状孢子体 c DNA文库 ,并进行了小规模表达序列标签分析。从 1 70条标签序列中鉴定出 6条抗病相关基因序列。这些序列可用于研制抗病单核苷酸多态性标记 ,辅助紫菜抗性遗传改良。  相似文献   

短沟对虾和斑节对虾酚氧化酶原基因的克隆和序列分析   总被引：7，自引：1，他引：7       下载免费PDF全文

叶星  郑清梅  白俊杰  劳海华  简清  罗建仁 《海洋与湖沼》2003,34(5):533-540

采用RT-PER原理和长片段扩增技术克隆短沟对虾和斑节对虾酚氧化酶原基因。设计合成特异引物、提取血细胞总RNA，反转录后扩增获得的特异片段回收并克隆到pGEM-TEasyVector系统的T载体上，重组子进行碱基序列测定。结果表明，所克隆的短沟对虾酚氧化酶原基因含起始密码子A1B到终止密码子TGA的2055bp，编码684个氨基酸。斑节对虾酚氧化酶原基因含ATG到TGA的2061bp，编码686个氨基酸。短沟对虾酚氧化酶原推算分子量为78153Da，等电点pI为6．25；斑节对虾则为78581Da，pI为5．83，用DNA分析软件分析显示两种对虾酚氧化酶原基因具有高度的同源性，二者的碱基和推测的氨基酸序列同源性分别为93％和92％；对虾与其他节肢动物酚氧化酶原基因的同源性的高低与种类间亲缘关系相关；不同种类间酚氧化酶活性中心重要组成部分的2个铜结合位点、位于铜结合位点内的6个组氨酸以及与铜结合位点相邻的氨基酸序列高度保守。  相似文献   

Construction of full length cDNA expression library of hepatopancreas of Penaeus monodon     

Luo Tian  Xu Xun 《海洋学报(英文版)》2002,21(3):437-443

mRNA was isolated from the hepatopancrease of shrimp Penaeus monodon with a PolyAT-tract System 1000 Kit. By using mRNA as template, double - strand cDNA with EcoR I/Xho I ends was synthesized by using a ZAP Express cDNA Synthesis Kit. The cDNA was inserted into the lambda ZAP Express vector predigested with EcoR I/Xho I, and the recombinant DNA was in vitro packaged into lambda phage with GigapackIII Gold packaging extracts. These recombinant phages were then used to transfect E. coli XL1 - Blue MRF', and finally a cDNA expression library was constructed. The library is 7.2 × 10~5 pfu in capacity and its recombination ratio is higher than 99 % . The size of the inserted cDNAs was determined by EcoR I/Xho I digestion of 9 phagemids prepared by in vivo excision of plaques selected randomly from amplified cDNA library . The longest inserted cDNA is about 1.6 kb in length. The complete sequence (about 1.2 kb) of actin cDNA was amplified from the library by PCR reveals that this library contains full-length  相似文献   

皱纹盘鲍(Haliotis discushannai Ino)胚胎RNA分离和cDNA文库构建   总被引：2，自引：0，他引：2  

刘晓  赵敏  高其康  张国范 《海洋与湖沼》2006,37(4):355-360

从皱纹盘鲍胚胎样本中分离RNA并构建了cDNA文库。分别收集孵化8、10和12h的皱纹盘鲍胚胎,用抽滤除菌的海水反复悬浮胚胎,将这3个发育阶段的胚胎样本等量混合后用TRIZOL试剂提取总RNA,将提取物用酚氯仿异戊醇再抽提2次,分离获得高质量的总RNA。从总RNA中分离mRNA,构建了皱纹盘鲍混合胚胎的cDNA文库,未扩增胚胎文库的滴度为5.0×106pfu/ml,重组率为94.12%,插入片段均大于400bp,70.6%克隆的插入片段分布在1000—1500bp之间,扩增后的文库滴度为3.06×109pfu/ml。  相似文献   

一株赤潮甲藻转录单元内间隔区(ITS)和5.8S rDNA序列的克隆     

张宝玉  王广策  张炎  吕颂辉  齐雨藻  邹景忠  曾呈奎 《海洋科学》2004,28(12):49-53

  相似文献   

HDS技术在古建文物测量中的应用   总被引：3，自引：0，他引：3  

李海刚 《测绘通报》2007,(7):73-74

一、引言HDS(High Definition Survey)技术是徕卡公司对地面3维激光扫描技术的重新定义。HDS技术包括硬件和软件两方面的内容。硬件主要是指以徕卡HDS ScanStation/HDS6000为代表的地面型3维激光扫描仪,硬件系统负责外业数据的采集和存储任务;软件系统有徕卡“赛克隆-Cyclone”模块化软件和CloudWorx插件,软件系统完成数据的管理、点云拼接、建模、制图和CAD系统的通讯协同等任务。HDS作为一种全新的3维激光测量技术,一经推出便引起了行业内的广泛关注。现在徕卡测量系统的HDS技术已经在国内成功地应用于工厂管道测量、船舶形体和容积测量、桥梁高速公路测量、事故现场调查测量、普通地形测量、文物及古建筑测量等领域。中国作为古建筑和文物资源大国,为HDS技术提供了广阔的应用空间,从近几年的工程实践来看,HDS技术作为一项全新的3维测量技术在国内的文物保护和古建筑测量方面已经取得了相当数量的成功应用案例。比如:故宫数字化测量、佛光寺保护方案制定、兵马俑2号坑考古现场记录、长城资源调查、乐山大佛保护性数字化存档等等,这些大型文化遗产的保护调查工作都采用HDS作为核心的测量技术来...  相似文献   

巴马香猪Hsp70基因的克隆、生物信息学分析及其在猪肠上皮细胞IPEC-J2中的表达     

《广东海洋大学学报》2017,(1)

为研究热应激蛋白70(HSP70)在巴马香猪(Sus scrofa domestica)耐热中的作用,利用NCBI公布的猪Hsp70基因序列设计引物,用RT-PCR克隆巴马香猪Hsp70基因。核酸序列分析表明,巴马香猪Hsp70基因开放阅读框(ORF)长1 932 bp,编码643个氨基酸。该蛋白分子质量为71.1 ku,等电点(PI)为5.88,与野猪、人、牛、羊、犬和鸡的同源性分别为99.2%、82.8%、83.2%、83.6%、82.4%和77.7%。该蛋白非叶绿体转运肽和线粒体导肽,亦非信号肽分泌通道,存在多个明显的疏水区,其中397位疏水性最强,达2.211。将该基因的ORF与真核表达载体pc DNA 3.1/V5-HisTOPO连接构建真核表达载体,并转染IPEC-J2细胞,荧光定量PCR及Western blot检测可见其在基因和蛋白水平的高量表达。  相似文献