中国明对虾体壁N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的分离纯化及酶学性质     

林建城  林大河  林秀春 《海洋科学》2014,38(8):52-58

为了探讨对虾N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(EC3.2.1.52,NAGase)的分离纯化及其酶学性质,作者以中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)体壁为材料,通过硫酸铵沉淀分级分离、SephadexG-100柱层析和DEAE-32离子交换柱层析纯化,获得聚丙烯酰胺凝胶电泳纯的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶酶制剂,纯化酶比活力为3938.56U/mg。通过SDS-PAGE凝胶电泳,测得该酶亚基分子量为48.88 kD。酶的最适pH为6.0,最适温度为45℃;该酶在pH 6.0~9.0区域较稳定,温度稳定性范围是20~35℃,45℃下处理1 h酶活力丧失65.04%。酶水解对硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷的Km为0.229 mmol/L,Vmax为5.00μmol/(L·min)。进一步研究金属离子对酶活力的影响,结果表明:Li+、Na+和Ba2+对酶没有明显影响,Mg2+、Ca2+、Mn2+、Co2+、Fe3+和Al3+对酶均有不同程度的激活作用,Cu2+、Zn2+和Pb2+对酶呈抑制作用,1.0 mmol/L Hg2+对酶呈激活作用,而10 mmol/L Hg2+使酶活力降低42.37%。  相似文献   

一株海藻多糖降解菌的分离鉴定及产酶条件优化     

朱大玲  唐啸龙  张宝玉  杨振芳  王乐普  秦乐宁  张蕾 《海洋科学》2017,41(8):99-107

从大型褐藻藻体分离获得一株具有高效降解琼胶和褐藻胶能力的革兰氏阴性菌菌株ST-6。16S rDNA序列分析结果表明,该菌株与海绵假单胞菌的相似度达到99%,NJ法构建系统进化树也与海绵假单胞菌归为一类,鉴定为海绵假单胞菌Pseudomonas pachastrellae ST-6。在2216E培养基、30℃培养条件下,海绵假单胞菌ST-6的生长曲线表明,接种10~48 h为菌株的指数生长期,48~72 h为生长稳定期。产酶结果表明,菌株ST-6在指数生长期时菌液的胞外琼胶酶相对酶活力较高,在接种48 h时,菌液的琼胶酶相对酶活力最高为249.15 U/m L。此外,发现菌株ST-6的琼胶酶和褐藻胶酶的分泌类型分别为非诱导型和诱导型。采用单因素分析法对其生长和产酶条件进行分析,结果表明,海绵假单胞菌ST-6最适生长条件为:温度25~35℃,33值5~9;最适产琼胶酶条件为:温度30℃,33值为7,琼胶浓度0.3%。最适产褐藻胶酶条件为:温度35℃,33值为9。在温度30℃、339和褐藻酸钠浓度0.15%的培养条件下,海绵假单胞菌ST-6获得最高胞外褐藻胶酶相对酶活力为135.54 U/m L。  相似文献   

茉莉酸甲酯和水杨酸对坛紫菜生长与抗逆性的影响   总被引：2，自引：0，他引：2  

侯赛男  邹同雷  汪芳俊  孙雪  徐年军 《海洋科学》2017,41(1):104-112

为了探讨植物激素在藻类生理与抗逆方面的作用,本文比较了不同浓度的茉莉酸甲酯(MJ)和水杨酸(SA)对坛紫菜(Pyropia haitanensis)生长、藻胆蛋白、可溶性蛋白、脯氨酸含量和叶绿素荧光参数的影响。结果显示100?mol/L SA的添加可使坛紫菜生长率达到对照组的1.57倍,而MJ对藻的生长影响不显著。50?mol/L MJ和100?mol/L SA显著促进了坛紫菜藻胆蛋白和可溶性蛋白的积累。50?mol/L MJ和100?mol/L SA添加后在48 h脯氨酸含量分别为对照组的2.67倍和1.75倍。25~50?mol/L MJ对坛紫菜的Fv/Fm和Y(II)影响不显著,而100?mol/L SA则可以提高这两个叶绿素荧光参数。该研究表明适当浓度的MJ和SA可以促进坛紫菜生长,提高其光合能力,在一定程度上增强坛紫菜的抗逆性。  相似文献   

外源水杨酸对龙须菜生长及生理的影响     

王俏俏  徐年军  朱招波 《海洋学研究》2013,31(2):78-85

以龙须菜Gracilaria lemaneiformis为材料,研究了不同质量浓度水杨酸对龙须菜的生长速率、渗透调节物质、抗氧化酶、藻胆蛋白和叶绿素荧光动力学特性等的影响。结果表明,外施水杨酸可以促进龙须菜的生长,其中水杨酸质量浓度为10 μg/mL的处理组对促进龙须菜的生长效果最好,其日相对生长速率达到6.92%/d,比对照组的相对生长速率增长了26.3%。在用水杨酸处理后的第3天,水杨酸质量浓度为10 μg/mL处理组的各指标达到最大,脯氨酸增长了32.5%、SOD增长了24.3%、藻红蛋白增加了24.6%。同时水杨酸促进了Ca²⁺和K⁺离子在龙须菜藻体内的积累速率。用水杨酸处理后,叶绿素荧光参数ΦPSⅡ在处理后的第5天开始增长,比对照组增长了9.6%;F_v/F_o在第5天达到最大值,比对照组增长了5.6%。本研究表明,适当质量浓度的水杨酸有利于提高龙须菜的生长速率,其中水杨酸质量浓度为10 μg/mL的处理组对龙须菜的处理效果最好。  相似文献   

外源添加剂水杨酸对菊花江蓠抗寒性的影响   总被引：2，自引：0，他引：2       下载免费PDF全文

范皖苏  黄鹤忠  徐汗福  何华敏  贾一何 《海洋科学》2011,35(2):38-43

通过室内实验生理生态学的方法研究了外源添加剂水杨酸(SA)对菊花江蓠(Gracilaria lichevoides)抗寒性的影响.研究表明,通过添加0.5 mmol/L的SA,可以明显降低(实验组)江蓠的丙二醛(MDA)积累量、电解质渗透率;其脯氨酸含量、特定生长率(RsG)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(PO...  相似文献   

深海来源微生物乙酰酯酶的酶学性质鉴定及拆分制备D-乳酸甲酯     

黄锦龙  张继福  胡洁莹  关见留  张云  孙爱君  胡云峰 《热带海洋学报》2018,37(4):38-44

D-乳酸及其酯是重要的手性药物中间体和手性化工产品。从南海深海芽孢杆菌Bacillus sp. SCSIO15029克隆到一个乙酰酯酶基因bae02030, 表达并鉴定该酶Bae02030的酶学性质。该酯酶的最适pH和最适温度分别为8.5和35℃, 其对多种有机溶剂和表面活性剂具有较好的耐受性。乙酰酯酶Bae02030能够通过水解拆分消旋乳酸甲酯来制备光学纯的D-乳酸甲酯。通过对拆分反应进行优化, 添加体积分数为60%的正庚烷能够改善乙酰酯酶Bae02030的光学选择性, 所制备的D-乳酸甲酯的对映体过量值(e.e._s)超过99%, 转化率(c)为56%。深海微生物来源的乙酰酯酶Bae02030作为生物催化剂在工业上制备手性药物中间体具有较好的应用潜力。  相似文献   

中国鲎N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活性必需基团的研究     

林建城  周文虎  林娟娟 《中国海洋大学学报(自然科学版)》2020,(1):57-64

为了探讨中国鲎N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(EC3.2.1.52,NAGase)活性的必需基团,采用了化学修饰法进行研究,分别以甲醛、乙酸酐、三硝基苯磺酸、对氯汞苯甲酸、苯甲基磺酰氟、二巯基苏糖醇、乙酰丙酮、溴代乙酸、碘代乙酸、N-溴代琥珀酰亚胺等10种修饰剂,在特定环境中对中国鲎NAGase进行化学修饰。结果表明:中国鲎NAGase中赖氨酸的ε-氨基、组氨酸的咪唑基、色氨酸的吲哚基和丝氨酸的羟基经修饰后,酶活力几近丧失,这些氨基酸基团为酶活性的必需基团,且可能处于酶的活性部位;半胱氨酸的巯基经修饰后不完全失活,说明半胱氨酸的巯基是NAGase催化活性所必需的,但可能不处于酶的活性部位;酶的二硫键被修饰后,酶活力明显下降,说明二硫键在维系NAGase的三维空间构象中起重要作用;而精氨酸的胍基经修饰后酶的活性基本不变,因此,精氨酸不是NAGase的必需基团。  相似文献   

斜生栅藻对乙酰甲胺磷的急慢性毒性响应     

陈敏东  葛顺  宋玉芝  邱伟健  周军英 《南京气象学院学报》2013,5(4):289-295

为了解有机磷农药乙酰甲胺磷污染对本土水生敏感性物种斜生栅藻(Scenedesmus obliquus)的毒性效应,在实验室条件下采用静态毒性试验,研究了乙酰甲胺磷对斜生栅藻96 h急性毒性效应,并在急性试验基础上进行慢性试验,分析了斜生栅藻连续染毒14 d的叶绿素质量浓度、可溶性蛋白质量分数以及丙二醛(MDA)质量摩尔浓度的变化.结果表明:乙酰甲胺磷的96 h EC₅₀为482.9 mg/L,属低毒农药,但在1 mg/L低质量浓度下可促进藻细胞生长;乙酰甲胺磷对栅藻光合作用无明显影响,但可通过干扰藻细胞代谢活动和引起膜脂过氧化反应,对斜生栅藻产生毒性作用;可溶蛋白和MDA可作为有效的生物标志物对农药引起的毒性做出评价.研究结果可为本土水生敏感性物种的保护和农药安全使用标准的制定提供理论依据.  相似文献   

乙酰微小杆菌生物合成5-甲基尿苷的研究     

上官俊龙  苏境坦  郑桂兰  张文权  张贵友  谢莉萍  王洪钟 《广东海洋大学学报》2011,(4)

用乙酰微小杆菌(Exiguobacterium acetylicum)完整细胞作为酶源,催化鸟苷和胸腺嘧啶合成抗艾滋病药物关键中间体5-甲基尿苷,并对影响菌体生长和5-甲基尿苷转化率的因素进行了考察。采用紫外诱变方法获得高表达核苷磷酸化酶菌种,使5-甲基尿苷的转化率提高到了75.8%;对培养基进行了碳源和氮源的优化,结果表明,3 g/L葡萄糖、20 g/L玉米浆、4 g/L NH4Cl有利于菌体生长;通过响应曲面(Response Surface Methodology,RSM)法获得了较为合适的转化条件:0.03 g/L MnSO4加入到pH值为8.0的磷酸缓冲液,两种底物浓度均为67 mmol/L,反应温度为56℃。  相似文献   

深海噬菌体BVE2内溶素的重组表达及其活性研究          下载免费PDF全文

张天佑  陈源  余美舜  张蒙辉  金敏  曾润颖 《应用海洋学学报》2023,42(3):416-425

本研究从一株来源于西南印度洋沉积物的噬菌体BVE2基因组中得到了一条全长702 bp，编码噬菌体内溶素的基因Lysin132，编码的蛋白共含有234个氨基酸残基，预计分子量为25.74 kDa；氨基酸序列同源比对结果表明BVE2 Lysin132具有多个酰胺酶活性位点。进化树分析结果表明BVE2 Lysin132是一种N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酸酰胺酶。将Lysin132克隆到pEASY-Blunt E2 Expression Vector中，构建了E. coli-pEASY-Lysin132表达菌株。成功用IPTG诱导表达，得到了大量带有6×His标签的重组BVE2 Lysin132。经镍柱纯化后进行SDS-PAGE电泳，得到单一目的蛋白条带。酶学性质分析结果表明，重组BVE2 Lysin132的最适反应温度为30 ℃，在中高温下热稳定性良好，在10~50 ℃下孵育90 min，仍能保持70%以上的酶活力；最适pH为7.0，在pH 6.0~8.0时均能保持80%以上的酶活力，表明该酶有较宽的pH作用范围；Na⁺、Mg²⁺可以使酶活力显著提高20%以上，Ca²⁺可以使酶活力提高40%以上。抑菌实验结果表明，重组BVE2 Lysin132对革兰氏阴性菌的抑制效果较好，尤其对溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）、坎氏弧菌（V. campbellii）、哈维氏弧菌（V. harveyi）的抑制作用显著，与市售微生物溶菌酶相比，抑制效果最高提升了40%以上。因此，本研究获得了一种拥有较宽pH作用范围且热稳定性良好的内溶素，可为开发应用于水产养殖、食品保鲜、医药等领域的新型抑菌剂研发提供基础。  相似文献